劉家有，鄧世山，朱劍軍，侯令密，謝少利，黃波

( 1.川北醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科；3.川北醫(yī)學(xué)院臨床技能培訓(xùn)中心，四川 南充 637000)

免疫組化法和qPCR技術(shù)檢測(cè)FBP1在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)及臨床意義

劉家有1，鄧世山1，朱劍軍1，侯令密2，謝少利2，黃波3

( 1.川北醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科；3.川北醫(yī)學(xué)院臨床技能培訓(xùn)中心，四川 南充 637000)

目的：探討果糖-1，6-二磷酸酶1 (fructose-1，6-bisphosphatase 1,FBP1)基因在結(jié)直腸腺癌的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的聯(lián)系。方法：qPCR技術(shù)檢測(cè)川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2014年9月至2016年2月 新鮮結(jié)直腸腺癌組織及癌旁正常組織46 例中FBP1基因的表達(dá)水平。 免疫組化方法檢測(cè)川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2015年7月至2016年6月結(jié)直腸腺癌及癌旁對(duì)照組織的蠟塊標(biāo)本30例中FBP1的表達(dá)及分布情況。結(jié)果：qPCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，F(xiàn)BP1 基因在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)水平低于在癌旁正常組織中的表達(dá)水平(t=2.934，P=0.006)；FBP1基因在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)水平隨著結(jié)直腸腺癌腫瘤的惡性程度的增加(F=13.267,P=0.000)、Duke’s 分期的增加(F=15.864,P=0.000)、遠(yuǎn)處淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移(t=14.285,P=0.000)而降低；FBP1基因在男性患者的結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)水平高于其在女性患者的表達(dá)水平，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.294,P=0.165)。 免疫組化結(jié)果顯示FBP1在結(jié)直腸腺癌組織中低表達(dá)甚至缺失，而在癌旁正常組織中高表達(dá)，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.461,P=0.000)。結(jié)論：FBP1 基因及蛋白質(zhì)的低表達(dá)可能在結(jié)直腸腺癌的發(fā)生發(fā)展中有著重要的作用，是其潛在的治療靶標(biāo)。

結(jié)直腸腺癌；果糖-1，6-二磷酸酶1；免疫組化法；qPCR

結(jié)直腸腺癌是消化道第二位的常見(jiàn)惡性腫瘤，位居癌癥死亡率第四位，嚴(yán)重威脅人類的健康[1]，探索與結(jié)直腸腺癌發(fā)病的相關(guān)基因，對(duì)結(jié)直腸腺癌的早期預(yù)防和診治具有重要意義。果糖-1，6-二磷酸酶1 (fructose-1，6-bisphosphatase 1,FBP1)是葡萄糖異生的關(guān)鍵酶之一，在機(jī)體內(nèi)源性葡萄糖的合成、輸出及調(diào)控中發(fā)揮重要作用[2]。研究發(fā)現(xiàn)FBP1與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，如FBP1基因表達(dá)水平的降低或缺失導(dǎo)致腎透明細(xì)胞癌的惡性程度增加、患者的預(yù)后變差[3]；FBP1在乳腺癌中和在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)水平也降低，且隨著惡性程度的增加而降低[4-5]。但在結(jié)直腸腺癌中FBP1基因的表達(dá)情況如何，目前尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本文通過(guò)免疫組化方法和qPCR技術(shù)檢測(cè)FBP1在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)情況，探討FBP1與臨床病理特征之間的關(guān)系，為結(jié)直腸腺癌早期診斷、治療及尋找潛在的靶標(biāo)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料及方法

1.1 研究對(duì)象

收集川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2014年9月至2016年2月 新鮮結(jié)直腸腺癌(該診斷均經(jīng)病理證實(shí))及對(duì)照癌旁正常組織(距腫瘤邊緣大于5 cm以上，病理未發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞)標(biāo)本46例，年齡37～79歲，平均年齡57.5歲，中位年齡59歲。標(biāo)本收集后立即置于液氮中速凍，及時(shí)提取組織總RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。收集川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2015年7月至2016年6月結(jié)直腸腺癌及癌旁正常組織標(biāo)本30例，年齡28～77歲，平均年齡56.8歲，中位年齡58歲。

1.2 主要試劑

Trizol試劑購(gòu)自Ambion公司；Revert Aid first strand cDNA Synthesis Kit 反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自Thermo Scientific公司；SYBR ?Premix ExTMTaq Ⅱ試 劑購(gòu) 自TaKaRa 公司；瓊脂糖購(gòu)自碧云天公司；Goldenview購(gòu)自于碧云天公司；Marker Ⅰ 購(gòu)自 Tiangen 公司；MS anti-FBP1 購(gòu)自abcom 公司，Goat anti-MS購(gòu)自abcom 公司，免疫組化(SP)試劑盒與DAB 顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋公司。

1.3 RNA 提取及反轉(zhuǎn)錄

取新鮮組織 50～80 mg， 液氮中研磨均勻成末， 按照Trizol說(shuō)明書(shū)操作提取組織總RNA，按照 Revert Aid first strand cDNASynthesis Kit 反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將細(xì)胞總RNA逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。

1.4 qPCR引物設(shè)計(jì)

按照qPCR引物設(shè)計(jì)原則，運(yùn)用 Primer 3.0 軟件設(shè)計(jì)引物，經(jīng)驗(yàn)證成功設(shè)計(jì)的基因序列見(jiàn)表1。qPCR 反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性3 min， 94 ℃變性10 s，54 ℃退火10 s，72 ℃延伸10 s， 40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)結(jié)束后進(jìn)行熒光信號(hào)收集。為判斷PCR產(chǎn)物的特異性，在擴(kuò)增程序結(jié)束后，加設(shè)一個(gè)溶解程序，來(lái)形成熔解曲線， 溶解溫度設(shè)置為65～90 ℃,每0.5 ℃為一個(gè)梯度，進(jìn)行熒光信號(hào)收集。每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，取Ct平均值進(jìn)行計(jì)算。ΔCt=Ct FBP1-Ct GAPDH， ΔCt值越小說(shuō)明該目的基因的表達(dá)量越高，反之亦然。2-ΔCt表示目的基因相對(duì)于內(nèi)參基因的表達(dá)量；本實(shí)驗(yàn)用2-ΔCt來(lái)表示46個(gè)樣本中FBP1基因的表達(dá)量。

表1 qPCR引物(5’to 3’)

1.5 免疫組化檢測(cè)

所有蠟塊由川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科代為切片，SP 法染色，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，其中 一抗和二抗的濃度均為1∶200 ，DAB 顯色，蘇木素復(fù)染。高倍鏡下選取 9個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞，按著色深淺評(píng)分：無(wú)顯色0分，弱著色1分，中等著色2分和強(qiáng)著色3分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞數(shù)的百分比評(píng)分：<25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。取兩項(xiàng)評(píng)分的乘積作為總積分，>5分為高表達(dá)，≤4分則為低表達(dá)。以高表達(dá)判為陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

SPSS 19.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 卡方檢驗(yàn)檢測(cè)FBP1蛋白在30例結(jié)直腸腺癌組織與對(duì)照癌旁組織中表達(dá)陽(yáng)性率的差異；配對(duì)t檢驗(yàn)檢測(cè)FBP1 基因在結(jié)直腸腺癌中與對(duì)照癌旁組織中表達(dá)水平的差異；獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)檢測(cè)FBP1 基因表達(dá)水平差異與結(jié)直腸腺癌患者的年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性；方差檢驗(yàn)檢測(cè)FBP1表達(dá)水平差異與結(jié)直腸腺癌患者Duke’s 分期、腫瘤分化類型的相關(guān)性。P< 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FBP1蛋白在組織中的表達(dá)情況

免疫組化的結(jié)果(圖1)顯示，F(xiàn)BP1在結(jié)直腸細(xì)胞中主要分布于細(xì)胞核和細(xì)胞膜，其在30例癌旁正常組織中表達(dá)為陽(yáng)性有25例，陽(yáng)性表達(dá)率為83.33%；FBP1在30例結(jié)直腸腺癌組織中表達(dá)為陽(yáng)性有8例，陽(yáng)性表達(dá)率為26.67%(表2)?？ǚ綑z驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，二者陽(yáng)性率表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.461,P=0.000)，這提示FBP1的低表達(dá)可能與結(jié)直腸腺癌的發(fā)生有關(guān)。

表2 FBP1在結(jié)直腸腺癌及癌旁正常組織中的表達(dá)情況

組別FBP1的表達(dá)陽(yáng)性陰性總計(jì)陽(yáng)性率(%)結(jié)直腸腺癌8223026．67癌旁正常組織2553083．33

2.2 qPCR結(jié)果與臨床病理特征

2.2.1 擴(kuò)增曲線及溶解曲線 qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，內(nèi)參基因 GAPDH 及目的基因FBP1 的擴(kuò)增曲線均有明顯的四個(gè)時(shí)期呈現(xiàn)為S型且Ct值均小于40，提示基因均得到擴(kuò)增；陰性對(duì)照組(CN)Ct值0～40幾乎為一條直線，說(shuō)明陰性對(duì)照組沒(méi)有擴(kuò)增。擴(kuò)增曲線符合實(shí)驗(yàn)要求(圖2A、2B)。內(nèi)參基因 GAPDH 及目的基因FBP1 的溶解曲線均只有一個(gè)峰值，說(shuō)明擴(kuò)增產(chǎn)物是單一的，符合實(shí)驗(yàn)的要求(圖2C、2D)。

2.2.2 qPCR 結(jié)果與臨床病理特征的關(guān)系 qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)BP1基因在結(jié)直腸腺癌組織的表達(dá)水平(0.257 5±0.035 7)低于其在癌旁正常組織中的表達(dá)水平(0.469 9±0.095 1)，配對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果顯示二者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.934，P=0.006)，提示FBP1低表達(dá)與結(jié)直腸腺癌的發(fā)生有關(guān)。 FBP1 基因在46 例結(jié)直腸腺癌組織中及癌旁正常組織中的表達(dá)水平見(jiàn)圖3；FBP1基因表達(dá)水平差異與患者的臨床病理特征之間的關(guān)系詳見(jiàn)表3。

通過(guò)檢測(cè)FBP1 基因在不同分化程度的結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BP1在12例高分化結(jié)直腸腺癌組織中表達(dá)水平為(0.463±0.036)，在22例中分化結(jié)直腸腺癌組織中為(0.254±0.023)，在12例低分化結(jié)直腸腺癌組織中為(0.059±0.009)，且其表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=13.267,P=0.000) (圖4B)，提示FBP1 在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)水平隨著結(jié)直腸腺癌腫瘤惡性程度的增加而降低 。

FBP1 基因在不同Duke’s 分期的結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)水平如下：Duke’s B 期(16例)中為(0.422±0.034)，Duke’s C 期(22例)中為(0.229±0.038)，Duke’s D 期(8例)中為(0.004±0.001)。方差檢驗(yàn)的結(jié)果顯示，F(xiàn)BP1 在不同Duke’s 分期的結(jié)直腸腺癌中表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=15.864,P=0.000) (圖4C)， 提示FBP1 在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)水平隨著結(jié)直腸腺癌腫瘤Duke’s 分期的增加有逐漸降低的趨勢(shì)。

FBP1 基因在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸腺癌組織的表達(dá)水平低于其在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)水平[(0.004 5±0.000 4)VS(0.310 8±0.021 9)]，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.285,P=0.000)(圖4D)，提示FBP1 基因與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

FBP1 基因與結(jié)直腸腺癌患者的年齡無(wú)相關(guān)性(t=0.622，P=0.547) ，同時(shí)，在男性患者的結(jié)直腸腺癌組織中FBP1 基因的表達(dá)水平有高于女性患者的趨勢(shì)[(0.309± 0.057)vs.(0.206±0.047)]，但其表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.483,P=0.165)(圖4A)。

表3 FBP1 基因的表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

因素FBP1上調(diào)下調(diào)性別 男814 女420年齡(歲) ≥601014 <60220Duke s分期 B412 C715 D17分化類型 高48 中616 低210淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú)1226 有08

3 討論

結(jié)直腸腺癌的早期不易診斷，確診時(shí)多伴有局部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致大部分患者因之復(fù)發(fā)甚至死亡，嚴(yán)重威脅人類的健康。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)部分基因與結(jié)直腸腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，如Skep2、Cdc37、p53、HER-2、Ki-67、Cyclin E、P27kipl等基因[1,6-8]，但結(jié)直腸腺癌的發(fā)病機(jī)制仍有待闡明，因此，尋找與結(jié)直腸腺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)靶基因具有重要的意義。

腫瘤代謝重組相關(guān)基因被認(rèn)為是尋找新興腫瘤標(biāo)志物[9]，腫瘤細(xì)胞以其糖代謝的改變尤為明顯，即由正常細(xì)胞的有氧氧化為主變?yōu)橐援a(chǎn)能效率較低的無(wú)氧糖酵解為主[4]。FBP1作為葡萄糖異生的限速酶之一，能夠?qū)⒐?1，6-二磷酸分解為6-磷酸果糖和磷酸，F(xiàn)BP1在機(jī)體葡萄糖的合成、輸出及調(diào)控中發(fā)揮重要作用[2]，F(xiàn)BP1基因的缺陷將導(dǎo)致果糖-1,6-二磷酸酶缺乏癥，患者表現(xiàn)為嚴(yán)重的低血糖、高乳酸血癥、代謝性酸中毒及酮癥等一系列癥狀，F(xiàn)BP1基因突變導(dǎo)致的表達(dá)降低在臨床病案中也陸續(xù)報(bào)道[10-11]。FBP1與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

FBP1基因在超過(guò)600例腎透明細(xì)胞癌(ccRCC)患者中的表達(dá)水平均一致性的降低，在FBP1基因表達(dá)缺失的患者中，其腫瘤的惡性程度更高、預(yù)后更差，因此FBP1能抑制ccRCC的進(jìn)展，其機(jī)制可能為FBP1抑制了腎小管上皮細(xì)胞(被認(rèn)為是ccRCC的起源)中的糖酵解；其次，F(xiàn)BP1在缺乏VHL的ccRCC中具有的獨(dú)立催化活性，能夠直接作用于細(xì)胞核的缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)功能區(qū)，從而抑制細(xì)胞的增值、糖酵解、磷酸戊糖途徑等[3]；臨床病理研究顯示，F(xiàn)BP1在ccRCC中的表達(dá)水平與患者的年齡、性別、T 分期、 Fuhrman 分級(jí)，以及HIF-2α和CA9的表達(dá)水平?jīng)]有相關(guān)性，但是與HIF-1α和促紅細(xì)胞生成素的表達(dá)水平顯著相關(guān)，這表明FBP1與缺氧相關(guān)基因的表達(dá)具有一定的關(guān)聯(lián)[12]。

研究表明FBP1在基底細(xì)胞樣乳腺癌(BLBC)細(xì)胞中低表達(dá)，F(xiàn)BP1表達(dá)的降低導(dǎo)致線粒體復(fù)合酶I的活性受抑，誘導(dǎo)糖酵解發(fā)生、葡萄糖攝取增加、M2型丙酮酸激酶形成、ATP在低氧條件下持續(xù)合成，這一系列的代謝重組使BLBC細(xì)胞具有干細(xì)胞的特點(diǎn)[4]。同時(shí)，F(xiàn)BP1與Wnt/β-catenin信號(hào)通路也有相關(guān)性，當(dāng)FBP1高表達(dá)時(shí)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活性度較低；當(dāng)FBP1低表達(dá)時(shí)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的活性度較高，其下游的靶點(diǎn)c-myc和MMP7的表達(dá)水平也增高[13]。

FBP1基因在肝細(xì)胞癌(HCC)中低表達(dá)，且與腫瘤分期、總生存率、腫瘤復(fù)發(fā)率相關(guān)[5]，沉默F(xiàn)BP1基因后，能顯著促進(jìn)HCC細(xì)胞集落的形成，提高肝癌細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和侵潤(rùn)的能力；過(guò)表達(dá)FBP1基因后，HCC細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和侵潤(rùn)能力受到抑制；Warburg效應(yīng)特異性抑制劑FX11能夠降低FBP1基因缺失介導(dǎo)的HCC細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和侵潤(rùn)能力，這提示FBP1可能是HCC的一個(gè)抑癌基因[9]。FBP1基因在非小細(xì)胞肺癌和胰腺導(dǎo)管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)中的表達(dá)均降低，且與患者的不良預(yù)后相關(guān)，在PDAC中的機(jī)制可能為核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1，NPM1)通過(guò)抑制FBP1的表達(dá)從而促進(jìn)PDAC的發(fā)生發(fā)展[14-15]。

但FBP1基因在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)情況如何，目前未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文通過(guò)免疫組化方法和qPCR技術(shù)探討FBP1在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)情況，及其與臨床病理特征之間的關(guān)系。免疫組化結(jié)果顯示，F(xiàn)BP1在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)水平明顯低于其在癌旁正組織中的表達(dá)水(P<0.05)，這與前期FBP1相關(guān)的報(bào)道結(jié)果相一致。FBP1在癌旁正常組織標(biāo)本中有5例(總30例，16.67%)呈陰性表達(dá)，這可能是FBP1對(duì)腫瘤侵潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力的體現(xiàn)，其機(jī)制可能為腫瘤的代謝重組波及了周圍癌旁正常組織，使這5例癌旁正常組織有潛在的高癌變風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致其高復(fù)發(fā)率[5]，F(xiàn)BP1是否導(dǎo)致了結(jié)直腸腺癌復(fù)發(fā)率增高需要進(jìn)一步的探討。

FBP1在8例(共30例，26.67%)結(jié)直腸腺癌組織標(biāo)本中呈陽(yáng)性表達(dá)，同時(shí)，qPCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)BP1在12例(共46例，26.09%)結(jié)直腸腺癌組織中高表達(dá)，這可能與FBP1基因的突變相關(guān)。FBP1基因在食管鱗狀細(xì)胞癌中也表現(xiàn)為高表達(dá)，但是具體原因還不明確[16]；有關(guān)FBP1的基因突變導(dǎo)致其表達(dá)水平降低已有報(bào)道[10-11]，但是不排除新的FBP1突變類型，其并不影響抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行(抗原決定簇和分子空間結(jié)構(gòu)未改變)，在代償性的高表達(dá)該基因之后而被檢測(cè)到，但是在結(jié)直腸腺癌在中是否存在新的突變有待進(jìn)一步的驗(yàn)證。

FBP1在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)水平隨著結(jié)直腸腺癌惡性程度、Duke’s分期、遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的增加呈逐漸降低的趨勢(shì)(P=0.000)，因此我們推測(cè)， FBP1的低表達(dá)可能與結(jié)直腸腺癌的分期分化、腫瘤的侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)。FBP1的低表達(dá)可能在結(jié)直腸腺癌的發(fā)生發(fā)展中有著重要作用，是結(jié)直腸腺癌治療的潛在靶標(biāo)。

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(學(xué)術(shù)編輯：羅春英)

Immunohistochemistry and qPCR to detect the expression of FBP1 in colorectal adenocarcinoma and its clinical significance

LIU Jia-you1，DENG Shi-shan1， ZHU Jian-jun1，HOU Ling-mi2，XIE Shao-li2，HUANG Bo3

( 1．AnatomyDepartment，NorthSichuanMedicalCollege;2．GeneralSurgeryDepartment，AffiliatedHospitalofNorthSichuanMedicalCollege；3.ClinicalSkillsTrainingCenterofNorthSichuanMedicalCollege，Nanchong637000,Sichuan,China)

Objective：To explore the expression of FBP1 in colorectal adenocarcinoma and its clinical significance.Methods：46 pairs of fresh human colorectal adenocarcinoma tissues and its adjacent normal tissues were collected from the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College from September 2014 to February 2016 ,Quantitative RT-PCR was used to detect the expression level of FBP1 mRNA in tissues.30 specimens of human colorectal adenocarcinoma tissues and its adjacent normal tissues were collected from the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College from July 2015 to June 2016,immunohistochemical was used to exam the level of FBP1.Results：Quantitative RT-PCR show that the expression level of FBP1 mRNA in colorectal adenocarcinoma tissues was remarkably lower than that in adjacent normal colorectal tissues (t=2.934，P=0.006) .The expression level of FBP1 decreased as the increase of malignancy degree and Duke’s stages and distant lymph metastases in colorectal adenocarcinoma (P=0.000).The expression level of FBP1 mRNA in male patients was higher than that in those females,but the difference was not significant (t=1.294,P=0.165).Immunohistochemical results show that the expession level of FBP1 in colorectal adenocarcinoma tissues was lower than that in adjacent normal colorectal tissues (χ2=19.461,P=0.000).Conclusion：The decreased expression level of FBP1 mRNA and its protein may act a critical role in colorectal adenocarcinoma and may be used as a potential therapeutic target for colorectal adenocarcinoma.

Colorectal adenocarcinoma;Fructose-1，6-bisphosphatase 1;Immunohistochemistry;qPCR

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.02.004

四川省教育廳基金項(xiàng)目(13ZB0242)；川北醫(yī)學(xué)院科研發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(CBY12-A-QN01)

2016-08-02

劉家有(1986-) ， 男， 碩士，助教。

黃波， E-mail:88207635@qq.com

時(shí)間：2017-5-5 16∶46

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20170505.1646.008.html

1005-3697(2017)02-0167-05

R735.3

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