■文/山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當(dāng)山東費(fèi)縣梁邱獸醫(yī)站 范貴瑞

一起豬瘟與藍(lán)耳病混合感染并繼發(fā)傳染性胸膜肺炎病例的綜合診斷與防控

■文/山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當(dāng)山東費(fèi)縣梁邱獸醫(yī)站 范貴瑞

山東某小規(guī)模自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)生一起以斷奶仔豬和育肥豬為主的急性呼吸道病疫情，病豬表現(xiàn)高熱、氣喘、被毛粗亂、弓背瘦弱、先便秘后腹瀉等病癥，呈明顯窩發(fā)特點(diǎn)，幾乎全群發(fā)病，病死率高達(dá)60%。通過(guò)病死豬剖檢診斷、細(xì)菌分離鑒定、組織病理學(xué)檢查和分子生物學(xué)檢測(cè)，確診為豬瘟與藍(lán)耳病毒混合感染并繼發(fā)胸膜肺炎病例。通過(guò)加強(qiáng)生物安全措施，未發(fā)病豬群對(duì)相關(guān)病毒性疾病進(jìn)行了緊急免疫，并經(jīng)藥敏試驗(yàn)篩選敏感藥物，對(duì)豬群實(shí)施藥物防治，使該豬場(chǎng)疫情得以迅速控制。

豬瘟；藍(lán)耳?。恍啬し窝追啪€桿菌；診斷；防治

豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征(俗稱“藍(lán)耳病”)是危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要病毒性疾病。近年來(lái)，規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)均高度重視豬瘟和藍(lán)耳病的免疫防控，使兩種疫病的防控取得了顯著成效，但一些小規(guī)模豬場(chǎng)或散養(yǎng)戶因?yàn)槊庖叱绦虿缓侠砘虿僮鞑灰?guī)范等因素導(dǎo)致這兩種疾病仍然時(shí)有發(fā)生，給豬群健康生產(chǎn)帶來(lái)了嚴(yán)重危害。且常成為其他病毒或細(xì)菌性疾病發(fā)生的“導(dǎo)火索”，進(jìn)而給豬場(chǎng)造成更大的經(jīng)濟(jì)損失。下面就一起豬瘟與藍(lán)耳病混合感染并繼發(fā)傳染性胸膜肺炎的重癥疫情進(jìn)行分析討論，為類似疾病的診治提供參考借鑒。

1 發(fā)病背景

山東某小規(guī)模自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)現(xiàn)有存欄經(jīng)產(chǎn)母豬30余頭，于2016年12月初發(fā)生一起嚴(yán)重的傷亡疫情。病豬表現(xiàn)高熱(40.5～41.5℃)、氣喘、被毛粗亂、弓背瘦弱、先便秘后腹瀉，有的出現(xiàn)耳尖發(fā)紺、腹部及四肢末端呈青紫色病癥，主要集中于20～30kg保育豬群，50～80kg肥豬也有發(fā)病死亡，呈明顯窩發(fā)特點(diǎn)且傳播迅速，發(fā)病率近乎100%，病死率高達(dá)60%。豬場(chǎng)使用國(guó)內(nèi)某廠家偽狂犬疫苗3日齡滴鼻，14日齡藍(lán)耳經(jīng)典弱毒苗肌肉注射，30日齡豬瘟細(xì)胞苗一次免疫，豬瘟與藍(lán)耳病母豬均為跟胎免疫。發(fā)病后緊急投服氟苯尼考、強(qiáng)力霉素抗生素及注射板藍(lán)根針劑，效果不明顯，遂前來(lái)就診。

2 綜合診斷

2.1 病豬臨床檢查

送檢病豬主要表現(xiàn)高熱、氣喘、耳尖發(fā)紺、耳部及臀部皮膚潮紅發(fā)紫、背部皮膚密布針尖大出血點(diǎn)、被毛粗亂、眼瞼腫脹出血(圖1-A)。

2.2 病豬剖檢病變

下頜淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)等出血腫大，切面黑白相間呈大理石樣(圖1-B)；喉頭黏膜出血(圖1-C)；腎表面散布針尖大出血點(diǎn)(圖1-D)；肺尖葉、心葉及兩側(cè)膈葉上部暗紅色實(shí)變，間質(zhì)增寬伴有輕微水腫(圖1-E)；心外膜出血(圖1-F)；脾臟淤血；膀胱黏膜點(diǎn)狀出血；腦膜充血、出血。

圖1 病豬臨床及剖檢病變

2.3 組織病理學(xué)病變

對(duì)剖檢豬的淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、心臟、肺臟、腦組織采樣，10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)方法制作石蠟切片，H.E染色，鏡檢。淋巴結(jié)發(fā)生出血性壞死性淋巴結(jié)炎病變(圖2-A)；肺臟高度充血，被膜下淋巴竇顯著擴(kuò)張，充滿漿液、纖維素及嗜中性白細(xì)胞，肺泡內(nèi)漿液、纖維素滲出，肺泡壁毛細(xì)血管顯著充血，部分肺組織呈典型間質(zhì)性肺炎病變(圖2-B、C)；心內(nèi)膜下出血，伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和漿液、纖維素滲出，心肌纖維變性壞死(圖2-D)；腎臟間質(zhì)出血，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2-E)。軟黏膜充血、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，神經(jīng)元變性壞死并發(fā)生噬神經(jīng)現(xiàn)象，血管周?chē)g隙淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，膠質(zhì)細(xì)胞灶狀增生，呈病毒性腦炎病變(圖2-F)。

2.4 病原學(xué)檢查

對(duì)剖檢病豬的腦、脾臟、肝臟、腎臟、淋巴結(jié)及扁桃體采樣，液氮保存，將凍存于液氮中的組織病料解凍后取適量組織加入滅菌PBS液并研磨成勻漿，9,000rpm離心4min，取上清液，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit(批號(hào)為J30723)提取病毒核酸。根據(jù)GenBank中公布的序列分別設(shè)計(jì)豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病經(jīng)典毒株的特異性引物，片段大小分別為599bp和372bp，用PCR/RT-PCR方法擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，根據(jù)紫外凝膠成像儀下條帶位置判定病豬的病原感染狀況。

2.5 細(xì)菌分離鑒定及藥物敏感試驗(yàn)

采集肺組織劃線接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/mL)的TSA培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24～48h后挑取疑似菌落進(jìn)行傳代純化，培養(yǎng)24～48h后可見(jiàn)圓整、中央凸起，閃光不透明，直徑1～2mm的小菌落，革蘭氏染色鏡檢，觀察到菌體呈革蘭氏陰性，多為球桿菌或短桿菌，初步診斷疑似胸膜肺炎放線桿菌(APP)。同時(shí)，挑取細(xì)小單菌落接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/ mL)的TSB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌，37℃，12h后挑取菌液進(jìn)行PCR鑒定。根據(jù)Genbank公布的序列設(shè)計(jì)胸膜肺炎放線桿菌(APP)的特異性引物，片段大小346bp，經(jīng)驗(yàn)證具有較好的特異性和擴(kuò)增效率，用PCR/RT-PCR方法擴(kuò)增后，將擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，紫外凝膠成像儀下根據(jù)條帶位置判定病豬的病原感染狀況。

分別挑取兩種細(xì)菌及培養(yǎng)基其他形態(tài)菌落均勻涂布于新鮮血瓊脂平板上，選取頭孢噻呋鈉、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、阿莫西林、慶大霉素、丁胺卡那霉素、林可霉素藥敏片，每片藥物含量10μg。無(wú)菌鑷子將藥敏片按一定間隔分別平貼于培養(yǎng)基表面，于37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。根據(jù)抑菌圈直徑(φ)判定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感程度，判定標(biāo)準(zhǔn)為：φ≥25mm為極度敏感；15mm≤φ＜25mm為高度敏感；10mm≤φ＜15mm為中度敏感；φ＜10mm為低度敏感；無(wú)抑菌圈則為耐藥。結(jié)果顯示：頭孢噻呋鈉、恩諾沙星極度敏感；丁胺卡那霉素、慶大霉素高度敏感，氟苯尼考、阿莫西林中度敏感，強(qiáng)力霉素、林可霉素低度敏感。

圖2 組織病理學(xué)變化

3 結(jié)論

綜合分析上述試驗(yàn)結(jié)果，此次疫情可能是豬瘟與藍(lán)耳病混合感染并繼發(fā)豬傳染性胸膜肺炎所致。該豬場(chǎng)在有疫苗免疫保護(hù)的情況下卻暴發(fā)嚴(yán)重疫情，可能與以下3方面因素有關(guān)，①該場(chǎng)免疫存在漏洞，初生仔豬豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬病僅免疫一次，同樣母豬僅跟胎免疫一次，顯然這樣的免疫強(qiáng)度難以提供較好的免疫保護(hù)。②該養(yǎng)殖戶在疫苗免疫和藥物肌肉注射時(shí)，沒(méi)有執(zhí)行“一豬一針”原則，而是一個(gè)針頭打一窩，致使本次疫情呈明顯的窩發(fā)特點(diǎn)。③該場(chǎng)豬舍條件簡(jiǎn)陋，冬季御寒能力差，加之生物安全措施不完善，是造成細(xì)菌性疾病滋生和蔓延的又一因素。

圖3 1.5%瓊脂糖凝膠電泳注：M：DL-2000 Marker；+：陽(yáng)性對(duì)照，-：陰性對(duì)照；右側(cè)S：檢測(cè)樣品。

圖4 分離菌株革蘭氏染色 200X

圖5 1.5%瓊脂糖凝膠電泳

4 防控

4.1 加強(qiáng)生物安全舉措封閉豬場(chǎng)，嚴(yán)禁外來(lái)人員進(jìn)出，立即淘汰無(wú)治療價(jià)值病豬，全場(chǎng)實(shí)行帶豬消毒，加強(qiáng)豬場(chǎng)衛(wèi)生消毒。

4.2 藥物防治和緊急免疫

4.2.1 發(fā)病豬只豬干擾素肌肉注射。4.2.2 全群包被恩諾沙星和黃芪多糖拌料，飲水添加電解質(zhì)和多種維生素，

連用3～5d。 4.2.3 選用高效豬瘟細(xì)胞苗對(duì)發(fā)病豬群緊急免疫，劑量為正常免疫的3～5倍，保證一豬一針，防治交叉感染。

4.3 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

清潔豬舍環(huán)境衛(wèi)生，降低豬只飼養(yǎng)密度，提高豬舍溫度，保證新鮮空氣流通，均衡飼料營(yíng)養(yǎng)，定期帶豬消毒，減少各類應(yīng)激反應(yīng)。

4.4 調(diào)整豬群免疫程序

4.4.1 對(duì)胎次較高、產(chǎn)能低下母豬進(jìn)行淘汰，母豬群豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬病的疫苗免疫由跟胎免疫改為3～4次/年普免。

4.4.2 新生仔豬進(jìn)行豬瘟超免，首免1月后進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫；偽狂犬病出生當(dāng)天滴鼻，使用專用霧化噴頭，保障滴鼻效果；同時(shí)加強(qiáng)保育仔豬藍(lán)耳病疫苗免疫。

經(jīng)實(shí)施上述防治措施，使得該豬場(chǎng)疫情得以快速控制，及時(shí)遏制了經(jīng)濟(jì)損失，豬場(chǎng)恢復(fù)穩(wěn)定生產(chǎn)?！?/p>