陳黨生,屈 沖,王九妹

(1.松原市公安消防支隊 衛(wèi)生隊，吉林 松原138000;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院;3.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院)

*通訊作者

SIRT6蛋白在非浸潤性膀胱癌中的表達及意義

陳黨生1,屈 沖2,王九妹3*

(1.松原市公安消防支隊 衛(wèi)生隊，吉林 松原138000;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院;3.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院)

世界范圍內(nèi)，膀胱癌的發(fā)病率及死亡率均居較高地位，每年大約有13000人因此死亡[1]。在我國，膀胱癌的發(fā)生率居泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第一位，并呈逐年上升趨勢[2]。且有較高的復(fù)發(fā)率及死亡率[3]。因此探索膀胱癌的有效預(yù)后性指標對降低其死亡率有重要意義。SIRT6是在哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的酵母沉默信息調(diào)節(jié)蛋白2(Sir2)同系物,具有乙酰化酶活性和ADP-核酸轉(zhuǎn)移酶活性，參與腫瘤生長調(diào)控、基因損害修復(fù)、穩(wěn)態(tài)的維持和有氧酵解，在部分腫瘤發(fā)生、發(fā)展的抑制方面有重要作用，且可增強部分抗腫瘤藥物的腫瘤抑制作用[4-6]，研究表明：敲除鼠SIRT6后,體內(nèi)增加了腫瘤的數(shù)量,大小,和侵襲性[4]。直腸癌患者中SIRT6表達水平降低。SIRT6異常表達與肝癌和胰腺癌，乳腺癌發(fā)病也有關(guān)系[7，8]。然而，SIRT6蛋白在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及治療中的作用尚不明確。本研究的目的是探討SIRT6表達是否可作為膀胱癌患者的預(yù)后指標，為膀胱癌患者的靶向治療提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

1995年1月-2015年8月期間在牡丹江腫瘤醫(yī)院治療的311例僅接受尿道切除術(shù)和表阿霉素治療的非浸潤性膀胱癌患者。收集其相關(guān)臨床及病理資料，并于術(shù)后第一年的3、6、9、12月及以后的每6個月隨訪一次，用膀胱鏡檢記錄他們首次復(fù)發(fā)及死亡時間。此次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準并與病人簽署了知情同意書。

1.2 方法

SIRT6免疫組織化學(xué)染色按照試劑盒說明進行操作。由兩位對病理分級和臨床分期不知情的病理科醫(yī)生，在光鏡下對染色進行評估，大部分病例評估結(jié)果一致，對有差異的部分也達成了共識。根據(jù)陽性細胞數(shù)目及染色強度判斷結(jié)果。按染色強度分為三組:0(無染色)、1(弱)、2(中度)、3(強)；按陽性細胞百分比分為四組：0(無陽性細胞)、1(<10%)，2(10-50%)，3(51-80%)，和4(>80%)。每張玻片按染色強度分與陽性細胞百分比分乘積作為免疫反應(yīng)評分:最大可能12,l-5判斷為是陰性，而6-12判斷為陽性。

1.3 統(tǒng)計分析

無病生存期(DFS)定義為從隨訪開始至膀胱癌復(fù)發(fā)或由于疾病進展導(dǎo)致患者死于膀胱癌的時間。疾病特異性生存率(DSS)被定義為從確定診斷到死于膀胱癌的時間。對腫瘤患者定期隨訪，根據(jù)病人最后一次隨訪結(jié)果評估病人的復(fù)發(fā)和死亡情況。采用Pearsonχ2檢驗分析SIRT6表達組與分變量之間關(guān)聯(lián),采用Log-rank檢驗和Cox比例風(fēng)險回歸進行無復(fù)發(fā)生存率分析。Kaplan-Meier進行生存曲線估計；所有的統(tǒng)計檢驗均為雙側(cè)，統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 5.0軟件進行,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌患者SIRT6的免疫組織學(xué)特征

離散性核染色觀察到SIRT6廣泛的表達在樣本的細胞核和細胞質(zhì)中。在正常的膀胱組織的細胞中，觀察到SIRT6的增強染色(圖1A)。膀胱癌組織區(qū)域中SIRT6表現(xiàn)出顯著的降低染色或未染色(圖1B)。進一步研究顯示，同膀胱癌組織相比，SIRT6在正常膀胱組織中表達顯著增強(圖1C)。同時發(fā)現(xiàn)不同癌癥等級(1D)和階段(1E)SIRT6的表達存在顯著的差異性。

2.2 膀胱癌臨床病理特征及SIRT6表達情況

311例非浸潤性膀胱癌組織中SIRT6陰性表達率為63%,陽性率為37%；比較發(fā)現(xiàn)SIRT6的表達與腫瘤的病理分級、臨床分期、大小、單多發(fā)呈明顯的正相關(guān)，見表1。

2.3 SIRT6蛋白表達與膀胱癌患者預(yù)后間的關(guān)系

311例病例數(shù)據(jù)進行Kaplan-Meier生存分析顯示SIRT6陽性的腫瘤患者較陰性者有更好的DFS和DSS(10年無病生存率：73%比57%，P=0.013；10年疾病特異性生存率：92% vs 82%，P=0.031，見圖2A和2B。對患者進行病理分級和臨床分期發(fā)現(xiàn)，SIRT6表達陽性比陰性者DFS和DSS明顯提高(圖2C和2D)。這些數(shù)據(jù)表明SIRT6表達水平是判斷膀胱癌預(yù)后的獨立指標。利用多因素分析評價SIRT6和其他臨床病理狀態(tài)與膀胱癌預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示，這311例患者的病理分級，臨床分期，單多發(fā)都不是影響預(yù)后的因素。而SIRT6表達是影響預(yù)后的因素(DFS：HR=0.875；95% CI，0.799-0.959；P=0.004；DSS：HR=0.765；95% CI，0.643-0.910；P=0.002)。

圖1 A：正常的膀胱組織細胞，SIRT6染色增強。B：膀胱癌組織細胞SIRT6表達情況。C：膀胱癌組織與正常膀胱組織中SIRT6表達情況比較。D：不同癌癥病理分級SIRT6表達情況；E：不同臨床分期SIRT6的表達情況。

表1 淺表性膀胱癌臨床病理特征及SIRT6表達情況(n=311)

3 討論

SIRT6有脫乙酰蛋白酶活性,作為腫瘤抑制因子在腫瘤生成過程發(fā)揮重要作用[9]。已有研究表明,SIRT6主要位于細胞核[9,10];然而,在研究中,我們發(fā)現(xiàn)SIRT6在膀胱癌和癌旁正常組織的細胞核和細胞質(zhì)中均有表達,且在膀胱癌組織內(nèi)的表達水平較正常癌旁組織有下調(diào)。提示：SIRT6在腫瘤組織與癌旁正常組織中呈現(xiàn)異質(zhì)性表達。同時我們還發(fā)現(xiàn)：SIRT6表達與膀胱癌臨床分期和病理分級呈正相關(guān)。隨腫瘤類型的不同、腫瘤發(fā)生發(fā)展的不同階段,SIRT6的表達也相差甚遠,SIRT6發(fā)揮的作用也不相同。引起這種差異的原因還有待于進一步研究。

此外，我們還發(fā)現(xiàn)SIRT6高表達者膀胱癌復(fù)發(fā)風(fēng)險和病死率降低,而且在Ta,G1,2期和T1,G3期腫瘤患者中SIRT6高表達者較陰性表達者DFS和DSS均顯著提高。因此，我們推測SIRT6在膀胱癌患者預(yù)后中起著重要作用，并可作為判斷膀胱癌患者預(yù)后的標記物。最近研究表明，SIRT6能夠誘導(dǎo)大量的癌細胞凋亡不會對正常細胞造成威脅，可通過誘導(dǎo)DNA損傷修復(fù)增強表阿霉素的抗腫瘤作用[11]。且目前表阿霉素仍是膀胱癌患者聯(lián)合手術(shù)治療的一線化療藥物，因此：SIRT6的研究為膀胱癌患者的個體化治療提供了一定的理論依據(jù)。然此觀點尚需進一步的研究與證實。

圖2A和2B Kaplan-Meier生存分析311例患者中SIRT6陽性組與陰性組間DFS和DSS的差異；圖2C和2D：311例患者的不同病理分級和臨床分期，SIRT6陽性組與陰性組間DFS和DSS的差異

本研究表明：SIRT6在正常膀胱組織中表達明顯高于膀胱癌組織，且與腫瘤的病理分級、臨床分期、大小、單多發(fā)呈明顯的正相關(guān)；生存分析：SIRT6表達陽性組比陰性組有更長的術(shù)后DFS和DSS,提示：SIRT6蛋白可作為膀胱癌預(yù)后評估的有效評價指標。對膀胱癌的診斷和靶向治療有一定的科學(xué)意義。

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1007-4287(2017)05-0859-03

王九妹(1986-)，住院醫(yī)師，碩士學(xué)位，研究方向：免疫性皮膚病與性病，腫瘤分子生物學(xué)。

2016-08-17)