邊志穎 孫 倩 王 君 胡艷云 郄海靜 趙新翠 尹 超

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糖尿病腎病患者血清血小板反應(yīng)蛋白-1水平變化及與相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

邊志穎 孫 倩 王 君 胡艷云 郄海靜 趙新翠 尹 超

目的：分析糖尿病腎病(DN)患者血清血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)水平變化及與血脂和糖尿病有關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。方法：108例2型糖尿病(T2DM)患者，按其是否合并DN分為單純T2DM組(T2DM組，n=52)和DN組(n=56)，另選50例體檢健康者為正常對(duì)照(對(duì)照組)。各組均抽取空腹肘靜脈血，檢測(cè)血清TSP-1、空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹胰島素(FINS)、血脂指標(biāo)甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和血漿纖維蛋白原(Fib)水平；計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、胰島β細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-β)。比較各指標(biāo)在三組間的差異，分析TSP-1與其它相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性，回歸分析TSP-1的獨(dú)立危險(xiǎn)因素及TSP-1與DN的關(guān)系。結(jié)果：三組間血清TSP-1、FBG、HbA1c、LDL-C、血漿Fib水平及FINS、HOMA-IR、HOMA-β有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且多數(shù)表現(xiàn)為對(duì)照組

糖尿病腎病；血小板反應(yīng)蛋白-1；血糖；血脂；胰島素

糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病(DM)最為常見(jiàn)和嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎病和腎臟替代治療的常見(jiàn)病因。DM患者體內(nèi)代謝紊亂，高血糖、高血脂、氧化應(yīng)激、血管內(nèi)皮損傷等多種病理因素刺激均可導(dǎo)致血管病變的發(fā)生和發(fā)展。血小板反應(yīng)蛋白(Thrombospondins，TSP)是多功能細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，涉及調(diào)節(jié)新生血管生成、增殖、細(xì)胞凋亡、一氧化氮-環(huán)磷酸苷(NO-cGMP)依賴性蛋白激酶通路和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(Transforming Growth Factor-β，TGF-β)激活等。其家族成員中的TSP-1與腎臟疾病關(guān)系密切[1,2]，在腎臟疾病的病理生理變化過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[3]，而具體到TSP-1與DN的關(guān)系以及影響TSP-1作用的相關(guān)因素的研究所見(jiàn)較少。所以，本文檢測(cè)分析了DN患者TSP-1和血糖、血脂、血胰島素等指標(biāo)水平變化及其相關(guān)性，探討TSP-1與DN發(fā)生的關(guān)系和影響因素，為DN的早期臨床干預(yù)提供新靶標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象和分組

選取2015-09-2016-01于保定市第一中心醫(yī)院內(nèi)分泌三科就診的2型糖尿病(T2DM)患者108例(均符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[4])。根據(jù)是否合并DN，分為單純T2DM組(T2DM組，n=52，男28例，女24例，年齡30-68歲)和DN組(n=56例，男26例，女30例，年齡32-72歲)。另選同期門(mén)診健康體檢者50例為正常對(duì)照(對(duì)照組，男26例，女24例，年齡30-68歲)。三組性別、年齡、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)等基本資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。排除1型糖尿病(T1DM)患者、T2DM伴嚴(yán)重急慢性感染者、妊娠及哺乳期糖尿病患者及原發(fā)性心、肝、腎臟等系統(tǒng)性疾病者、腫瘤性疾病者，且均無(wú)糖皮質(zhì)激素用藥史及其它內(nèi)分泌疾病史。實(shí)驗(yàn)前1周均未使用或停用抗血小板藥物、抗凝藥物和擴(kuò)血管藥物等。本研究已獲本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有對(duì)象本人或親屬簽署知情同意書(shū)。

表1 各組基本資料比較

1.2 觀察指標(biāo)和方法

三組均空腹12h后，于清晨抽取肘靜脈血4ml，3 000r/min離心10min分離血清。取2ml血清置于-70℃冰箱凍存，室溫解凍后采用ELISA批檢TSP-1濃度，試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司(批號(hào)20151220)。剩下標(biāo)本分別上機(jī)測(cè)定以下指標(biāo)：采用Olympus AU2700型全自動(dòng)生化分析儀和配套試劑檢測(cè)空腹血糖(FBG)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、采用日本Sysmex CA7000型自動(dòng)血凝儀和配套試劑檢測(cè)血漿纖維蛋白原(Fib)；采用日本愛(ài)科HA8180型高效液相色譜分析儀和配套試劑測(cè)定糖化血紅蛋白(HbA1c)，采用美國(guó)羅氏Cobas e601型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)定空腹胰島素(FINS)，操作嚴(yán)格遵照儀器和試劑說(shuō)明書(shū)。計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FBG(mmol/L)×FINS/22.5和胰島β細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-β)=20×FINS(mU/L)/(FBG-3.5)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 各組TSP-1、血糖、胰島素及血脂指標(biāo)比較

三組血清TSP-1水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；T2DM組和DN組明顯高于對(duì)照組(t=26.107、28.514，P<0.01)，DN組高于T2DM組(t=6.039，P<0.01)。

三組FBG水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；T2DM組和DN組明顯高于對(duì)照組(t=10.027、16.470，P<0.01)，DN組高于T2DM組(t=2.605，P<0.05)。三組HbA1c水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；T2DM組和DN組較對(duì)照組顯著升高(t=12.234、15.538，P<0.01)，DN組與T2DM組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。三組FINS水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；,T2DM組和DN組較對(duì)照組升高(t=2.443、4.258，P<0.05或P<0.01)，DN組與T2DM組無(wú)明顯差異(P>0.05)。三組HOMA-IR水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；T2DM組和DN組較對(duì)照組顯著升高(t=8.153、11.322，P<0.01)，DN組較T2DM組升高更明顯(t=3.088，P<0.01)。三組HOMA-β水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；T2DM組和DN組較對(duì)照組顯著降低(t=-12.704、-16.884，P<0.01)，DN組降低更明顯(t=-2.755，P<0.01)。

血脂標(biāo)指TC、TG、HDL-C三組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，LDL-C水平三組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);DN組較對(duì)照組明顯升高(t=3.528，P<0.01)，DN組與T2DM組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

三組Fib水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；DN組明顯高于T2DM組和對(duì)照組(t=2.899、6.288，P<0.01)，T2DM組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組TSP-1、血糖、胰島素及血脂指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

注：與對(duì)照組比較，1)P<0.05，2)P<0.01；與T2DM組比較，3)P<0.05,4)P<0.01

2.2 TSP-1與其它指標(biāo)的相關(guān)性分析

Person結(jié)果顯示，TSP-1與FBG、HbA1c、LDL-C、FINS、HOMA-IR、Fib呈正相關(guān)，與HOMA-β呈負(fù)相關(guān)。見(jiàn)表3。

表3 TSP-1與其它臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.3 TSP-1與其它臨床指標(biāo)的回歸分析

Logistic多元線性逐步回歸分析提示HbA1c、FINS、HOMA-β、Fib是血清TSP-1的獨(dú)立影響因素?；貧w系數(shù)分別為0.320、0.130、-0.422、0.246(均P<0.01)。 T2DM組與DN組二分類Logistic多元回歸分析表明，TSP-1與DN的發(fā)生相關(guān)(β=0.014，P=0.022)，是DN的危險(xiǎn)因素。

3 討 論

DN為DM微血管并發(fā)癥之一，隨著DM發(fā)病率的逐年上升，DN導(dǎo)致的終末期腎功能衰竭比例也大大增加，已是腎臟替代治療的最常見(jiàn)疾病[5]。因此，如何延緩及阻止DN的發(fā)生發(fā)展成為DM研究的重點(diǎn)。

TSP-1是重要的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，也是主要的內(nèi)源性血管新生抑制物，與多種腎臟疾病關(guān)系密切[1]。TSP-1最初發(fā)現(xiàn)于血小板α顆粒內(nèi)，隨后研究證明體內(nèi)多種細(xì)胞均可產(chǎn)生。TSP-1能強(qiáng)烈抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，并直接、獨(dú)立地驅(qū)動(dòng)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，激活TGF-β1等[6]。而TGF-β1可導(dǎo)致腎小球足細(xì)胞凋亡[7]。越來(lái)越多的證據(jù)表明，TSP-1在多種腎臟疾病中扮演重要角色，包括缺血-再灌注腎損傷、肥胖和DM相關(guān)性腎病[8]。Sen等[9]發(fā)現(xiàn)在高糖培養(yǎng)大鼠足細(xì)胞中，TSP-1基因表達(dá)水平明顯增加；艾娜等[10]的研究進(jìn)一步證實(shí)持續(xù)高血糖狀態(tài)可誘導(dǎo)DM大鼠腎臟TSP-1基因和蛋白表達(dá)增加，并發(fā)現(xiàn)TSP-1可能參與DM大鼠腎臟功能改變及病理?yè)p害的全過(guò)程。在高糖環(huán)境下，TSP-1不僅激活TGF-β，TGF-β也可促進(jìn)TSP-1的合成，二者形成正反饋效應(yīng)[11]。TSP-1上調(diào) TGF-β表達(dá)與TGF-β受體信號(hào)通路有關(guān)，通過(guò)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子smad2/3磷酸化而實(shí)現(xiàn)[12]。正常人腎臟幾乎不表達(dá)TSP-1，但高血糖患者血管內(nèi)皮細(xì)胞TSP-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平均增加[13]，早期干預(yù)TSP-1表達(dá)有可能預(yù)防或控制T2DM進(jìn)展[14]。本研究回歸分析顯示， TSP-1水平升高與DN發(fā)生有關(guān)(β=0.014，P<0.05)，且受血糖指標(biāo)FBG、HbA1c和胰島素相關(guān)指標(biāo)FINS、HOMA-IR等的正相關(guān)影響，這與國(guó)內(nèi)外有關(guān)研究結(jié)果相一致。

本研究還發(fā)現(xiàn)LDL-C、Fib與TSP-1呈正相關(guān)，尤其Fib是TSP-1的獨(dú)立影響因素，提示Fib水平升高與腎小球微血栓形成有關(guān)。高凝狀態(tài)及血管損傷激活凝血-纖溶系統(tǒng)，促使腎小球局部微血栓形成，隨后釋放多種炎性因子，從而導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，引發(fā)更嚴(yán)重的病理?yè)p傷過(guò)程。盧景奎等[6]研究顯示腎小球微血栓組TSP-1蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，可能是微血栓形成的原因或表現(xiàn)之一，表明TSP-1在腎臟微血栓病變中起重要作用。微血栓形成又觸發(fā)血小板大量活化，釋放大量TSP-1進(jìn)一步加重疾病進(jìn)展。

綜上所述，TSP-1水平明顯升高是發(fā)生DN的危險(xiǎn)因素。TSP-1水平又受FBG、FINS、HbA1c、HOMA-IR、LDL-C、Fib、HOMA-β等的影響。其中HbA1c、FINS、HOMA-β、Fib的影響更重要。因此，有效下調(diào)TSP-1表達(dá)、有效調(diào)控TSP-1影響因素，對(duì)早期防治DN、延緩疾病進(jìn)展將有顯著臨床價(jià)值。

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本文第一作者簡(jiǎn)介：

邊志穎(1985-)，女，漢族，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：糖尿病及并發(fā)癥

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Level Changes and the Relationship between the Related Indicators of Serum TSP- 1 in Diabetic Nephropathy Patients

BIAN Zhi-ying，SUN Qian，WANG Jun，HU Yan-yun, QIE Hai-jing, ZHAO Xin-cui, YIN Chao

Department of Endcorionology, Baoding NO.1 Central Hospital of Hebei Province, Baoding 071000,China

Objective: To analysis the level changes and the relationship between the blood fat and indexes related to diabetes mellitus of serum thrombospondin-1 (TSP-1) in patients with diabetic nephropathy (DN).Method: 108 T2DM patients according to whether complicated with DN were divided into T2DM group (n=52) and DN group (n=56), and 50 normal healthy persons for the normal control group (the control group). Fasting venous blood was collected in each group. The TSP-1 and other clinical indicators were detected. The steady-state model was used to account for the indexes of insulin resistance(HOMA-IR)and islet beta cell function index (HOMA-β). To compare the differences between the three groups, analysis of the correlation between TSP-1 and other related indicators, and using regression analysis to evaluate the independent risk factors TSP-1 and the relationship between the TSP-1 with DN. Results: There was significant difference in serum TSP-1，F(xiàn)BG，HbA1C，LDL-C，F(xiàn)ib，F(xiàn)INS，HOMA-IR level among the three group, and most performance as the control group

Diabetic nephropathies; Thrombospondin-1; Blood glucose; Blood lipid; Insulin

河北省保定市第一中心醫(yī)院東院內(nèi)分泌三科，保定 071000

本文2017-02-28收到，2017-04-19修回

R587.2

A

1005-1740(2017)02-0055-05