王繼雯，岳丹丹，趙俊杰，劉莉，慕琦，李冠杰，甄靜，鞏濤，楊文玲，杜志敏，陳國(guó)參*

（1.河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司，河南鄭州450008；2.河南省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南鄭州450008）

兩株芽孢桿菌混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢條件的優(yōu)化

王繼雯1，2，岳丹丹1，2，趙俊杰1，2，劉莉1，2，慕琦1，李冠杰1，2，甄靜1，2，鞏濤1，2，楊文玲1，2，杜志敏1，2，陳國(guó)參1，2*

（1.河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司，河南鄭州450008；2.河南省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南鄭州450008）

為了探索地衣芽孢桿菌（Baclicus lincheniformis）DY-1和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）XK混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的最佳條件，該研究采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)進(jìn)行了優(yōu)化；利用Eppendorf 7.5 L發(fā)酵罐在最佳條件下進(jìn)行了混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢試驗(yàn)。結(jié)果表明，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的最佳發(fā)酵條件為：膠凍樣芽孢桿菌XK和地衣芽孢桿菌DY-1種子液的接種比例為4∶1（V/V），培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)時(shí)間60 h，pH 8.0。在此條件下，進(jìn)行Eppendorf 7.5 L發(fā)酵罐混菌發(fā)酵試驗(yàn)，其芽孢數(shù)可高達(dá)1.1×1011CFU/mL，高于搖瓶發(fā)酵所產(chǎn)芽孢數(shù)（2.0×1010CFU/mL）。

地衣芽孢桿菌混菌發(fā)酵DY-1；膠凍樣芽孢桿菌XK；產(chǎn)芽孢條件；正交試驗(yàn)

WANG Jiwen1,2,YUE Dandan1,2,ZHAO Junjie1,2,LIU Li1,2,MU Qi1,LI Guanjie1,2,ZHEN Jing1,2,GONG Tao1,2, YANG Wenling1,2,DU Zhimin1,2,CHEN Guocan1,2*
(1.Henan Academy of Sciences Institute of Biology Co.,Ltd.,Zhengzhou 450008,China; 2.Key Laboratory of Microbial Engineering of Henan Province,Zhengzhou 450008,China)

混菌發(fā)酵又稱混合發(fā)酵，指采用兩種或多種微生物的協(xié)同作用共同完成某發(fā)酵過(guò)程的一種新型發(fā)酵技術(shù)[1]?；炀l(fā)酵是純種發(fā)酵技術(shù)的新發(fā)展，也是一種不需要進(jìn)行復(fù)雜的脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）體外重組卻可取得類似效果的新型發(fā)酵技術(shù)[2]。優(yōu)點(diǎn)是可提高發(fā)酵效率甚至可形成新產(chǎn)品，與單菌株發(fā)酵相比顯著縮短了發(fā)酵時(shí)間[3]。在我國(guó)現(xiàn)代發(fā)酵工業(yè)中，設(shè)計(jì)構(gòu)建的指定菌種的多菌種混合發(fā)酵并不多見，但在食品發(fā)酵、環(huán)境保護(hù)和能源方面已有了一些研究和應(yīng)用[3-5]。微生物混菌培養(yǎng)在很多領(lǐng)域中的作用已經(jīng)得到充分肯定，部分成果已成功應(yīng)用于實(shí)踐[6-8]。隨著混菌發(fā)酵在各方面應(yīng)用研究的深入，在生物菌肥方面混菌發(fā)酵的研究也已成為熱點(diǎn)[9-11]?；炀鷥?yōu)化培養(yǎng)，不但可以提高發(fā)酵效率，節(jié)約生產(chǎn)成本，而且由它們制得的高密度芽孢菌劑或微生物肥料，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，可以減少化肥用量，緩解土壤污染，為中國(guó)的糧食安全保駕護(hù)航。

芽孢是產(chǎn)芽孢細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中形成的一種抗逆休眠體，它的形成受營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境因素等的綜合影響[12]。芽孢最主要的特點(diǎn)就是抗性強(qiáng)，對(duì)高溫、紫外線、干燥、電離輻射和很多有毒的化學(xué)物質(zhì)都有很強(qiáng)的抗性。自由存在的芽孢沒有明顯的代謝作用，只保持潛在的萌發(fā)力，稱為隱藏的生命。一旦環(huán)境條件合適，芽孢便可以萌發(fā)成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。一般認(rèn)為，芽孢是在生長(zhǎng)后期、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏時(shí)形成的，因而是適應(yīng)不良環(huán)境的產(chǎn)物。但實(shí)際上，可能不完全是如此。有研究人員在培養(yǎng)枯草芽孢桿菌時(shí)，曾作過(guò)追蹤觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在接芽孢種培養(yǎng)4 h后即有芽孢生成；以后每隔4 h觀察一次，芽孢數(shù)均呈比例增長(zhǎng)；至24 h時(shí)，約半數(shù)產(chǎn)生芽孢；48 h后，全部變成芽孢，表明在此情形下營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)向芽孢形成有一定的概率，芽孢開始形成不必等到生長(zhǎng)后期，更不必等到生長(zhǎng)完全停止[13]。一般情況下，當(dāng)菌體處于不利條件時(shí)才產(chǎn)生芽孢，如果營(yíng)養(yǎng)條件太差，雖然芽孢形成率高，但芽孢總數(shù)過(guò)低；營(yíng)養(yǎng)條件過(guò)好時(shí)，雖有利于菌體生長(zhǎng)但不易形成芽孢，在短時(shí)間內(nèi)無(wú)法達(dá)到高芽孢形成率。所以進(jìn)行產(chǎn)芽孢條件研究非常必要[14]。因此，本研究以無(wú)拮抗反應(yīng)的并具有解磷解鉀作用的促生菌株地衣芽孢桿菌（Baclicus lincheniformis）DY-1和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）XK為混菌發(fā)酵研究對(duì)象，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)這兩株混菌發(fā)酵的最佳產(chǎn)芽孢的條件進(jìn)行優(yōu)化，以期為工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)和復(fù)合微生物肥料的研制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌種

地衣芽孢桿菌（Baclicus lincheniformis）DY-1和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）XK：河南省科學(xué)院生物研究所保藏菌種。

1.1.2 培養(yǎng)基

YMA液體培養(yǎng)基：甘露醇10 g/L，酵母粉1 g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，NaCl0.1g/L，CaSO40.2g/L，Rh微量元素液4 mL/L（Rh微量元素液：H3BO35 g/L，Na2MnO45 g/L），pH 6.8～7.0.

混菌發(fā)酵培養(yǎng)基：可溶性淀粉5g/L，豆粕0.75g/L，KNO30.75g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4·7H2O0.25g/L，NaCl0.1g/L，MnSO4·2H2O 0.25g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.25g/L，CaSO40.2g/L，Rh微量元素液4 mL/L，pH 7.0～8.0。

LB固體培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，瓊脂粉5 g，用5 mol/L NaOH溶液調(diào)pH至7.0，用去離子水定容至1 L。

硅酸鹽細(xì)菌搖瓶固體培養(yǎng)基：淀粉5.0g，酵母浸粉1 g，K2HPO42.0 g，MgSO40.5 g，CaCO30.1g，F(xiàn)eCl35 mg，瓊脂粉5 g，用蒸餾水定容至1 000 mL。

1.2 儀器與設(shè)備

JA1103N電子天平：上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司；LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌鍋：上海申安醫(yī)療器械廠；EMS-4A磁力攪拌器：上海鷹迪儀器設(shè)備有限公司；XMTD-8222恒溫水浴鍋：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；HYG-A恒溫?fù)u床：江蘇太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；303A-1型恒溫培養(yǎng)箱：上海榮豐科學(xué)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌株之間的拮抗試驗(yàn)

地衣芽孢桿菌（B.lincheniformis）DY-1和膠凍樣芽孢桿菌（B.mucilaginosus）XK菌株間的拮抗反應(yīng)測(cè)試采用平板擴(kuò)散對(duì)峙法，將一種菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h的菌懸液2%接種到液體YMA發(fā)酵培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)48 h，各取100 μL發(fā)酵液分別涂布YMA培養(yǎng)基平板，用打孔器打孔；然后分別將發(fā)酵液8 000 r/min離心10 min取上清，取一種菌株的發(fā)酵液上清50 μL滴加在涂布有另一種菌株的平板孔中，以無(wú)菌水作陰性對(duì)照，將2株供試菌兩兩進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，每個(gè)處理做3次重復(fù)，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h后觀察有無(wú)抑菌圈形成。

1.3.2 單因素試驗(yàn)

將膠凍樣芽孢桿菌XK和地衣芽孢桿菌DY-1種子液分別按一定接種比例以適當(dāng)?shù)慕臃N量接種于混菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于180 r/min搖床上恒溫培養(yǎng)一定時(shí)間后，取發(fā)酵液1 mL，80℃水浴20 min，將發(fā)酵液按101～106倍比稀釋后，取104、105、106涂布于LB平板，37℃培養(yǎng)24h后芽孢計(jì)數(shù)。分別考察兩種菌的接種比例（1∶1、2∶1、4∶1、6∶1、8∶1（V/V））、接種量（1%、2%、3%、4%、5%、6%）、培養(yǎng)溫度（25℃、30℃、35℃、37℃、40℃）、培養(yǎng)基初始pH（5.0、6.0、7.0、8.0、9.0）、培養(yǎng)時(shí)間（12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h）對(duì)混合發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)芽孢數(shù)的影響。

1.3.3 正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，以產(chǎn)芽孢數(shù)（Y）為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇培養(yǎng)溫度（A）、初始pH值（B）、膠凍樣芽孢桿菌XK∶地衣芽孢桿菌DY-1（C）、培養(yǎng)時(shí)間（D）為因素，采用4因素3水平的正交試驗(yàn)對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢條件進(jìn)行優(yōu)化，正交試驗(yàn)優(yōu)化因素與水平見表1。

表1 發(fā)酵產(chǎn)芽孢條件優(yōu)化正交試驗(yàn)因素與水平Table 1 Factors and levels of orthogonal experiments for spore-producing conditions optimization

1.3.4 芽孢計(jì)數(shù)

芽孢計(jì)數(shù)法參考周德慶[15]所介紹的方法，芽孢平板計(jì)數(shù)是在80℃水浴加熱20 min后采用平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)芽孢的形成數(shù)量。

1.3.5 7.5 L發(fā)酵罐中試發(fā)酵試驗(yàn)

在最優(yōu)發(fā)酵條件下，利用Eppendorf 7.5 L發(fā)酵罐，在設(shè)定發(fā)酵溫度，發(fā)酵時(shí)間，初始pH值、攪拌速度等發(fā)酵參數(shù)的條件下進(jìn)行中試混菌發(fā)酵試驗(yàn)。觀察記錄發(fā)酵參數(shù)的變化，并用涂布平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行芽孢計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株拮抗反應(yīng)測(cè)試

微生物間的拮抗作用，一般是指一種微生物的生命活動(dòng)或其代謝產(chǎn)物，抑制或干擾另一種微生物生命活動(dòng)的現(xiàn)象。通過(guò)平板對(duì)峙試驗(yàn)結(jié)果表明，地衣芽孢桿菌（Baclicus lincheniformis）DY-1和膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）XK無(wú)拮抗反應(yīng)，可以進(jìn)行混菌發(fā)酵。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 接種比例對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響

圖1 菌株XK與DY-1接種比例對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響Fig.1 Effect of inoculation proportion of strain XK and DY-1 on spore production by mixed bacteria fermentation

由圖1可知，不同接種比例對(duì)芽孢數(shù)的影響比較大，當(dāng)膠凍樣芽孢桿菌XK和地衣芽孢桿菌DY-1種子液的接種比例為4∶1（V/V）時(shí)，混菌發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)芽孢數(shù)最多，為9.65×109CFU/mL；隨著XK∶DY-1接種比例的增加，混菌發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)芽孢數(shù)開始減少。這可能是因?yàn)槟z凍樣芽孢桿菌XK生長(zhǎng)速度較地衣芽孢桿菌慢的緣故。因此，選擇膠凍樣芽孢桿菌XK和地衣芽孢桿菌DY-1種子液的最佳接種比例為4∶1（V/V）進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化。

2.2.2 接種量對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響

圖2 接種量對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響Fig.2 Effect of inoculum on spore production by mixed bacteria fermentation

由圖2可知，隨著接種量的增加，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)變化不大，這可能是因?yàn)榻臃N量增加到一定在程度時(shí)，導(dǎo)致單位體積的菌體密度增大，從而影響菌株生長(zhǎng)和芽孢的形成。當(dāng)接種量為5%時(shí)，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢最多，為1.13×1010CFU/mL。因此，選擇接種量5%為最佳。

2.2.3 培養(yǎng)溫度對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響

圖3 培養(yǎng)溫度對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響Fig.3 Effect of culture temperature on spore production by mixed bacteria fermentation

由圖3可知，隨著培養(yǎng)溫度的升高，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)迅速增加，這是因?yàn)樵谝欢囟确秶鷥?nèi)，適當(dāng)提高培養(yǎng)溫度能促進(jìn)菌株的生長(zhǎng)和芽孢的形成，當(dāng)培養(yǎng)溫度在35～40℃范圍內(nèi)時(shí)，產(chǎn)芽孢較多；當(dāng)培養(yǎng)溫度為37℃時(shí)產(chǎn)芽孢最多，為1.23×1010CFU/mL。因此，選擇培養(yǎng)溫度為37℃進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化。

2.2.4 發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響

圖4 初始pH值對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響Fig.4 Effect of initial pH on spore production by mixed bacteria fermentation

由圖4可知，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值由5.0升高至8.0時(shí)，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)量逐漸增加，當(dāng)初始pH值為8.0時(shí)，產(chǎn)芽孢數(shù)最多，為1.12×1010CFU/mL；再繼續(xù)增加pH值，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)開始下降，這可能是因?yàn)閜H值增大，發(fā)酵液溶液堿性增強(qiáng)，不利于菌株的生長(zhǎng)和芽孢的形成。因此，選擇發(fā)酵培養(yǎng)基最佳初始pH值為8.0進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化。

2.2.5 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響

由圖5可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)也隨之增加，當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間＞36 h后，芽孢數(shù)增加緩慢，當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間48 h之后，產(chǎn)芽孢數(shù)逐漸趨于穩(wěn)定，當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為72 h時(shí)產(chǎn)芽孢數(shù)反而略有所減少，可能是因?yàn)殡S著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，代謝產(chǎn)物增多和菌株密度過(guò)大所致。因此，選擇培養(yǎng)時(shí)間為48 h進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化。

圖5 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢的影響Fig.5 Effect of culture time on spore production by mixed bacteria fermentation

2.3 培養(yǎng)條件的正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，接種量對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)影響不顯著，因此選擇培養(yǎng)溫度（A）、初始pH值（B）、菌株XK∶DY-1接種比例（C）、培養(yǎng)時(shí)間（D）4個(gè)因素，以產(chǎn)芽孢數(shù)（Y）為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)對(duì)混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢條件進(jìn)行優(yōu)化，正交試驗(yàn)優(yōu)化因素與水平見表2。

表2發(fā)酵產(chǎn)芽孢條件優(yōu)化結(jié)果與分析

Table 2 Results and analysis of orthogonal experiments for spore-producing conditions optimization

試驗(yàn)號(hào)ABCD芽孢數(shù)（/×108CFU·mL-）111111182.0 2122238.0 31333135.5 4213268.5 52213202.0 62321112.0 7312322.5 8323150.5 9331291.5 k1118.5091.00158.50114.80 k2127.5096.8357.5066.00 k354.83113.0084.83120.00 R72.6722.00101.0054.00

由表2可知，極差結(jié)果分析顯示，影響混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)的因素主次關(guān)系為C＞A＞D＞B，即接種比例＞培養(yǎng)溫度＞培養(yǎng)時(shí)間＞初始pH值。其最優(yōu)組合為A2B3C1D3，即混菌發(fā)酵最佳培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度為37℃，初始pH值為8.0，膠凍樣芽孢桿菌XK和地衣芽孢桿菌DY-1種子液的接種比例為4∶1（V/V），培養(yǎng)時(shí)間60 h。在此條件下，進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢數(shù)為2.02×1010CFU/mL。

2.4 7.5 L發(fā)酵罐小試

在最優(yōu)發(fā)酵條件下，利用Eppendorf 7.5 L發(fā)酵罐進(jìn)行中試混菌發(fā)酵試驗(yàn)，具體發(fā)酵參數(shù)變化如圖6所示，由圖6可知，在發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵罐溶氧（dissolve of oxygen，DO）和發(fā)酵液pH值變化較大。在發(fā)酵約12 h時(shí)，發(fā)酵罐溶氧DO開始突然降低，此時(shí)的pH值也降低，說(shuō)明此時(shí)菌株開始進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；當(dāng)發(fā)酵約16 h后，發(fā)酵罐溶氧DO又突然升高，而此時(shí)發(fā)酵液pH值開始逐漸增加；當(dāng)發(fā)酵約19 h后，溶氧DO達(dá)到最低，發(fā)酵液pH值又開始逐漸降低，說(shuō)明混合菌株已經(jīng)開始進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期；當(dāng)發(fā)酵約25 h后，溶氧DO又逐漸升高，發(fā)酵液pH值雖有所降低，但變化不大，說(shuō)明此時(shí)混合菌株已經(jīng)達(dá)到生長(zhǎng)穩(wěn)定期，芽孢已經(jīng)開始形成。通過(guò)7.5 L發(fā)酵罐小試試驗(yàn)可以清楚地觀察到：隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，溶氧DO和發(fā)酵液pH值等發(fā)酵參數(shù)的變化，及時(shí)了解菌株生長(zhǎng)和芽孢形成情況。

圖67 .5 L發(fā)酵罐中試試驗(yàn)在40 h內(nèi)各參數(shù)的變化Fig.6 Changes of the parameters of 7.5 L fermentor pilot scale tests in 40 h

在發(fā)酵60 h后放罐，對(duì)混合發(fā)酵菌液進(jìn)行倍比稀釋，通過(guò)平板計(jì)數(shù)法計(jì)算出混菌發(fā)酵液中芽孢總數(shù)高達(dá)1.09× 1011CFU/mL，遠(yuǎn)高于搖瓶發(fā)酵所產(chǎn)芽孢數(shù)（2.02×1010CFU/mL）。

3 結(jié)論

本研究通過(guò)上述單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)得出混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢最佳條件為膠凍樣芽孢桿菌XK和地衣芽孢桿菌DY-1種子液的接種比例4∶1（V/V），培養(yǎng)溫度37℃，培養(yǎng)時(shí)間60h，pH8.0，在此最佳發(fā)酵條件下，利用Eppendorf7.5L發(fā)酵罐進(jìn)行混菌發(fā)酵產(chǎn)芽孢，其芽孢數(shù)可高達(dá)1.09×1011CFU/mL，得出了混菌發(fā)酵基本工藝參數(shù)的變化規(guī)律。采用混菌發(fā)酵模式不但可以節(jié)約發(fā)酵時(shí)間，而且還可減低生產(chǎn)成本。從而為工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)微生物肥料提供了科學(xué)依據(jù)。

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0254-5071（2017）05-0095-05

10.11882/j.issn.0254-5071.2017.05.020

2016-12-05

2012年河南省重大科技專項(xiàng)（121100110100）；2014年河南省轉(zhuǎn)制機(jī)構(gòu)研究發(fā)展專項(xiàng)[豫財(cái)政(2014)383號(hào)]；2015年河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司/中科院微生物研究所應(yīng)用微生物技術(shù)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)基金項(xiàng)目

王繼雯（1970-），女，副研究員，碩士，研究方向?yàn)檗r(nóng)業(yè)微生物。

*通訊作者：陳國(guó)參（1963-），男，研究員，碩士，研究方向?yàn)檗r(nóng)業(yè)微生物。