高香奇 李誠叢 周 星海南省藥物研究所，海南 海口 570311

黎藥裸花紫珠與膽木組合的藥效學研究

高香奇 李誠叢 周 星
海南省藥物研究所，海南 海口 570311

目的：篩選出黎藥裸花紫珠和膽木最佳藥效組合，為開發(fā)新藥做準備。方法：對裸花紫珠和膽木提取物的組合進行包括抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌和解熱等藥效學研究。結果：裸花紫珠和膽木的水、醇提取物的單方和組方在劑量為0.52g/kg·bw時，對小鼠均有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛作用；劑量為0.4g/kg·bw時，兩者單方對內毒素致熱家兔具有解熱作用；組方裸花紫珠醇提物-膽木醇提物(0.26g/kg:0.26g/kg)對內毒素致熱家兔的解熱效果更佳；兩者的水、醇提取物單方和組方均有一定的抑菌作用。結論：組方裸花紫珠醇提物-膽木醇提物(0.26g/kg:0.26g/kg)的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌等作用最佳。

黎藥；裸花紫珠；膽木；最佳組合；藥效學

裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.et Arn.)為馬鞭草科植物，主要分布在我國的廣東、廣西和海南。裸花紫珠的藥用歷史悠久，在海南黎族民間也廣泛的應用，海南黎族稱裸花紫珠為“雅介龍”，應用在各種創(chuàng)傷流血、婦科炎癥、腰骨痛及皮膚疥瘡等[1]。裸花紫珠含有黃酮甙、酚類等多種成分，研究表明，裸花紫株可抑制毛細血管通透性，對早期的炎癥滲出、腫脹有明顯的抗炎性反應作用[2]；能明顯縮短出、凝血時間，止血效果顯著[3-4]；還能抑制多種細菌，可預防繼發(fā)性感染的發(fā)生[4]。

膽木(NaucleaofficenalisPierre ex Pitard)為茜草科植物，其枝、樹皮等具有藥用價值，主要分布于廣東、海南及廣西等省區(qū)，含有黃酮苷、酚類，主要用于外感發(fā)熱、急性黃疸、胃痛、急性扁桃體炎及咽喉炎等。從莖分離物(主要為生物堿)具有一定的抑菌作用。

裸花紫珠和膽木一般都單獨使用，這在很大程度上限制了二者在臨床上的廣泛應用，本研究將對二者組合的藥效學進行研究，針對性地協(xié)同增強二者的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌等主要功效，篩選出二者的最佳藥效學組合，增強藥效的同時，以其減少藥物使用量?，F(xiàn)將研究結果報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 AEG-120G型電子分析天平(島津)；UV-2401PC紫外分光光度計(島津)；YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀；HW-3智能熱原儀(天大天發(fā))。

1.2 藥物 裸花紫珠水提取物(簡稱A)、裸花紫珠60%乙醇提取物(簡稱B)、膽木水提取物(簡稱C)、膽木60%乙醇提取物(簡稱D)，以上提取物由海南省藥物研究所自制。實驗受試物根據(jù)具體實驗要求配制。陽性對照藥阿司匹林腸溶片(批號：20080106，規(guī)格：25mg/片，昆明云健制藥有限公司)。

1.3 動物 SPF級昆明種小鼠、普通級家兔，由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實驗動物科技服務部提供，生產許可證號：SCXK(湘)2009-0012。

2 方法

2.1 組方抗炎作用篩選實驗

2.1.1 小鼠腹腔毛細血管通透性試驗[5]取小鼠240只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機分成24組，每組10只，依次為陰性對照組、陽性對照組、A～D四種提取物的各劑量(0.26g/kg、0.52g/kg和1.04g/kg)組和A∶C(0.39g/kg∶0.13g/kg)、A∶C(0.35 g/kg∶0.17 g/kg)、A∶C(0.26 g/kg∶0.26 g/kg)、A∶C(0.17 g/kg∶0.35 g/kg)、A∶C(0.13 g/kg∶0.39 g/kg)、B∶D(0.39 g/kg∶0.13 g/kg)、B∶D(0.35 g/kg∶0.17 g/kg)、B∶D(0.26 g/kg∶0.26 g/kg)、B∶D(0.17 g/kg∶0.35 g/kg)、B∶D(0.13 g/kg∶0.39 g/kg)等各組合組各組分別按20mL/kg的容積灌胃給藥，灌服相應的藥液，每天1次，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥3d。末次給藥后1h，各鼠尾靜脈注射0.5%伊文思藍生理鹽水0.1mL/10g，隨即腹腔注射0.6%醋酸0.2mL/只。20min后小鼠脫臼處死。剖開腹腔，用6mL生理鹽水數(shù)次沖洗腹腔，收集并合并沖洗液于離心管內，加入生理鹽水至于10mL，以3000r/min，離心15min，取出上清液于分光光度計590nm波長處比色，以吸光度表示伊文思藍滲出量。

2.1.2 小鼠鼠耳腫脹試驗[6]取小鼠240只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機分成24組，每組10只，各組分別按20mL/kg的容積灌胃給藥，灌服相應的藥液，每天1次，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥3d。末次給藥后1h，給小鼠右耳涂以二甲苯0.03mL/只，左耳作對照，20min后處死小鼠，用直徑6mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，精密稱量，按以下公式計算各值。腫脹度=右耳重量-左耳重量。每組劑量均以浸膏計。

2.2 組方鎮(zhèn)痛作用篩選實驗[7]

2.2.1 熱板法 小鼠篩選：調節(jié)恒溫燙傷儀，使溫度控制在(55±0.5)℃，取雌性小鼠300只，每次1只放在熱板上，測自小鼠放入在熱板上至出現(xiàn)舔足所需時間，作為該鼠的痛閾值，凡舔后足時間小5s或大于30s或跳躍者棄之不用，選合格小鼠240只。取合格小鼠240只，分為24組，每組10只。實驗前各組每只小鼠測其正常痛閾值。試驗時各組小鼠按擬定劑量灌胃，1次/d，連續(xù)3d，末次給藥后60min將小鼠放在熱板上(55±0.5)℃測其痛閾值，如60s仍無反應，則痛閾值以60s計，計算鎮(zhèn)痛率，鎮(zhèn)痛率=(給藥組痛閾值一對照組痛閾值)/對照組痛閾值×100%。

2.2.2 扭體實驗 取健康小鼠240只，隨機分成24組，每組10只，雌雄各半。各組小鼠每日按0.4mL/20g的容積灌胃1次，連續(xù)給藥3d，于末次給藥后60min，腹腔注射0.5%醋酸0.2mL/只，觀察15min內各組小鼠由醋酸引起的扭體次數(shù)。

2.3 組方的體外抗菌作用篩選研究[6]實驗菌株：大腸埃希菌(2株)、金黃色葡萄球菌(2株)、鏈球菌(1株)、白色假絲酵母菌(2株)、解脲支原體(2株)，均來自海南醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科臨床微生物室。培養(yǎng)基采用血瓊脂平板、沙保弱平板和M-H肉湯。試驗方法采用肉湯稀釋法。藥物濃度依次為0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125g/mL。

2.4 組方的解熱作用篩選[8]取家兔，雌雄不限(雌兔應未孕)，實驗前對家兔進行預選，家兔單獨裝盒，只固定頸部，探頭插人直腸，深度約6cm，測溫探頭整個實驗過程中均保持在家兔直腸內；室溫保持在20℃，每隔30min記錄體溫1次，共測8次，選取體溫在38.0～39.6℃之間，體溫波動不大于0.4℃的家兔96只，隨機分成16 組，每組6只，實驗當日停食2h，相隔30min測量2次體溫，取平均值作為初始體溫，然后分別按相應劑量灌胃給藥1次，0.5h后靜脈注射致熱劑 (取細菌內毒素工作標準品，用氯化鈉注射液溶解，配成10 EU/mL溶液) 1mL/kg，于注射致熱劑給藥后每30min記錄體溫1次，共測8次，計算每只家兔各個時間的溫度與其初始體溫的差值，即為體溫的變化值，若為負值，計為0 ℃，計算各組體溫的變化值。

2.5 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)用SPSS 10.0軟件處理,以平均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用方差分析法，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 組方抗炎作用篩選實驗

3.1.1 小鼠腹腔毛細血管通透性試驗 除劑量為0.26g/kg的A～D組以外，其余各組與溶劑對照組比較，明顯抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的增高，減少滲出(P<0.05)；阿司匹林組，劑量為1.04 g/kg 的A～D各組、 D組(劑量0.52g/kg)和B∶D(1∶1)組的效果明顯(P<0.01)。見表1。

3.1.2 小鼠鼠耳腫脹試驗 除劑量為0.26g/kg的A～D組以外，其余各組與溶劑對照組比較，對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有制作用(P<0.05)；阿司匹林組，劑量為1.04 g/kg 的A～D各組、 D組(劑量0.52g/kg)、B∶D(1∶1)和B∶D(1∶2)組的效果明顯(P<0.01)。見表1。

表1 裸花紫珠和膽木提取物對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加和對二甲苯所致小鼠鼠耳腫脹的影響(n=10， x±SD) (例)

注：與溶劑對照組比較，*P﹤0.05，**P﹤0.01

3.2 組方鎮(zhèn)痛作用篩選實驗

3.2.1 熱板法 各組給藥后痛闕值與給藥前比較，各給藥組與溶劑對照組比較，給藥劑量為0.52g/kg的 C和D組、A∶C(1∶3)、B∶D(1∶1)、B∶D(1∶2)等各組均能明顯延長小鼠熱板舔足反應潛伏期(P<0.05)；阿司匹林組、給藥劑量為1.04g/kg的 C～D組和B∶D(1∶3)能顯著延長小鼠熱板舔足反應潛伏期(P<0.01)，其余各組均無明顯抑制作用。見表2。

3.2.2 扭體實驗 與溶劑對照組比較，由0.5%醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，劑量為0.52g/kg 的C和D、A∶C(1∶3)、B∶D(1∶1)、B∶D(1∶2)等各組均能明顯抑制由0.5%醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)(P<0.05)；阿司匹林組、劑量為1.04g/kg的C和D組、B∶D(1∶3)能顯著由0.5%醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)(P<0.01)；其余各組均無明顯抑制作用。見表2。

表2 裸花紫珠和膽木提取物對熱板致痛小鼠的影響和小鼠扭體反應的抑制作用 (例)

續(xù)表2 表2 裸花紫珠和膽木提取物對熱板致痛小鼠的影響和小鼠扭體反應的抑制作用 (例)

注：與溶劑對照組比較，*P﹤0.05,**P﹤0.01；與給藥前比較，ΔP﹤0.05,ΔΔP﹤0.01。

3.3 組方的體外抗菌作用篩選 試驗結果顯示，裸花紫珠和膽木提取液單方、各組方對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、白色假絲酵母菌、解脲支原體均有一定的抑菌作用。見表3。

表3 裸花紫珠和膽木提取液對臨床分離菌株的MIC結果 (g/mL)

3.4 組方的解熱作用篩選 裸花紫珠和膽木的提取液，與溶劑對照組比較，單方A、C、D(劑量：0.4 g/kg)在注射內毒素4h后，能抑制家兔體溫升高(P<0.05)；B(劑量：0.4 g/kg)在注射內毒素3h和4h后，均能抑制家兔體溫升高(P<0.05)。各組方與溶劑對照組比較，A∶C(3∶1)和B∶D(2∶1)在注射內毒素4h后，能抑制家兔體溫升高(P<0.05)；A∶C(2∶1)在注射內毒素3h和4h后，均能抑制家兔體溫升高(P<0.05)；A∶C(1∶1)和B∶D(3∶1)在注射內毒素2h～4h后，均能抑制家兔體溫升高(P<0.05)；B∶D(1∶1)在注射內毒素1～4h后，均能抑制家兔體溫升高(P﹤0.05)。結果顯示，裸花紫珠和膽木提取液單方和各組方對家兔具有一定的解熱作用，其中組方B∶D(1∶1)效果更明顯。

4 討論

本研究考察了裸花紫珠和膽木的水和醇提取物單方和組方的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱、抑菌作用。結果顯示，在體內抗炎藥理實驗中，兩者單方劑量0.52、1.04g/kg·bw和各組方(總劑量為0.52g/kg·bw)對冰醋酸引起的小鼠腹部毛細血管通透性增加和二甲苯所致的小鼠耳腫脹具有一定抑制作用，且裸花紫珠醇提物：膽木醇提物(0.26g/kg : 0.26g/kg)在抑制炎癥方面協(xié)同增效的趨勢更為明顯。在鎮(zhèn)痛藥理實驗中，采用熱板法和扭體實驗對兩者進行藥效評價，裸花紫珠水提和醇提取液無明顯的鎮(zhèn)痛作用，膽木水和醇提取液單方在劑量0.52g/kg·bw時，具有鎮(zhèn)痛作用，且鎮(zhèn)痛作用與劑量呈正關系；組方A∶C(1∶3)、B∶D(1∶1)、B∶D(1∶2)和B∶D(1∶3)均對小鼠亦有一定的鎮(zhèn)痛作用。在體外抗菌作用研究中，試驗結果顯示，裸花紫珠和膽木提取液單方、各組方對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、白色假絲酵母菌、解脲支原體均有一定的抑菌作用。在組方解熱作用篩選試驗中，總劑量為0.4g/kg·bw時，兩者單方和組方均能降低細菌內毒素致熱家兔體溫的升高(P<0.05)，裸花紫珠醇提物：膽木醇提物(0.26 g/kg∶0.26g/kg)對內毒素致熱家兔的解熱效果更佳。

裸花紫珠又稱紫珠，主要成分為黃酮類、縮合鞣質[9]，可抑制毛細血管通透性，對早期的炎癥滲出、腫脹有明顯的抗炎性反應作用，同時可縮短出、凝血時間，止血效果顯著，還能抑制多種細菌可預防繼發(fā)性感染的發(fā)生，具有保肝降酶的作用。膽木的主要含有黃酮苷、酚類，主要用于治療外感發(fā)熱、急性黃疸、胃痛、急性扁桃體炎以及咽喉炎等，其分離物生物堿還具有一定的抑菌作用。前期通過對裸花紫珠和膽木水和60%乙醇提取物進行活性成分分析，發(fā)現(xiàn)60%乙醇提取物裸花紫珠的出膏率、總黃酮和鞣質含量均高于水的提取物；膽木的60%乙醇提取物的出膏率、總黃酮和生物堿含量均高于水的提取物。本次實驗結果顯示，裸花紫珠和膽木的60%乙醇提取物較水的提取物藥效更佳，且兩者的組合物裸花紫珠醇提物：膽木醇提物(0.26g/kg∶0.26g/kg)在抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌作用方面協(xié)同增效明顯，可減少單方使用的劑量，具有開發(fā)的潛能。因此，裸花紫珠和膽木的聯(lián)合使用可協(xié)同增強抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌作用，且與主要成分總黃酮、鞣質和生物堿含量成一定的量效關系?？煽紤]將組方裸花紫珠醇提物：膽木醇提物(0.26g/kg∶0.26g/kg)開發(fā)出復合型藥物組合物，針對性地協(xié)同增強二者的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌等主要功效，進行下一步的研究開發(fā)，開發(fā)出新品種藥物，以期能縮短病程、降低并發(fā)癥的發(fā)生率，使用方便，且無藥物不良反應，創(chuàng)立海南南藥和黎族醫(yī)藥新的品牌。

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Studies on the Pharmacodynamics of the Combination of Luohuazizhu and Danmu

GAO Xiangqi LI Chengcong ZHOU Xing

Pharmaceutical Institute of Hainan Province,Haikou 570311,China

Objective To filter out the best combination of Luohuazizhu and Danmu for the development of new drugs.Methods To study the anti-inflammatory, analgesic, antibacterial and antipyretic effects of the combination of Luohuazizhu and Danmu.Results The water / ethanol extract of Luohuazizhu or Danmu, the combination of Luohuazizhu and Danmu at the dose of 0.52g/kg·bw, the mice have a certain anti-inflammatory, analgesic effect. At the dose of 0.4g/kg·bw, the water / ethanol extract of Luohuazizhu or Danmu has anti-pyretic effect on endotoxin-induced heat rabbits, the effect of the ethanol extract of Luohuazizhu and Danmu the bark extract (1∶1) were better. The water / ethanol extract of Luohuazizhu or Danmu, the combination of Luohuazizhu and Danmu, all of them have a certain bacteriostatic effect. Conclusion The anti-inflammatory, analgesic, antipyretic and antimicrobial effects of the ethanol extract of Luohuazizhu and Danmu the bark extract (1∶1) were the best.

Hainan Li-nationality Herbal; Luohuazizhu; Danmu; The Best Combination; Pharmacodynamics

2009年海南省科學事業(yè)費項目。

高香奇(1988-)，女，漢族，本科，實習研究員，研究方向為藥理毒理和藥效學研究。 E-mail：419357272@qq.com

R285.5

A

1007-8517(2017)06-0034-05

2017-01-13 編輯：梁志慶)