聶建芳

[摘要]目的 探討免疫制劑鹽酸左旋咪唑配合外用貝復濟治療復發(fā)性口腔潰瘍的臨床效果。方法 選取2014年1月～2015年12月我院接診的復發(fā)性口腔潰瘍患者130例，按就診前后隨機分成觀察組和對照組，各65例，觀察組采用鹽酸左旋咪唑片配合貝復濟無菌噴霧劑外用，對照組單純采用鹽酸左旋咪唑。通過治療前后血清T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+細胞；血清輔助性T淋巴細胞（helper T cell，Th），Th1（IFN-γ、TNF-α、IL-2）和Th2（IL-4、IL-6、IL-10）類細胞因子的表達水平及臨床療效的比較，分析鹽酸左旋咪唑片配合貝復濟外用的臨床效果。結果 觀察組T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+治療前后檢測結果比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），對照組治療前后比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。兩組治療后CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。觀察組輔助T淋巴細胞、Th1（IFN-γ、TNF-α、IL-2）、Th2（IL-4、IL-6、IL-10）、IFN-γ/IL-4治療前后檢測結果比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01），對照組治療前后IL-6比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），其他指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。兩組治療后INF-α、IL-6、比較，差異無統(tǒng)計學意義（P<0.05），其他差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。觀察組臨床總有效率為92.08%，復發(fā)率為9.23%，對照組有效率為73.85%，復發(fā)率為36.92%，兩組總療效比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結論 鹽酸左旋咪唑片配合貝復濟外用能有效改善復發(fā)性口腔潰瘍患者T淋巴細胞亞群及血清輔助性T淋巴細胞的表達，提高復發(fā)性口腔潰瘍的治療效果，降低復發(fā)率。

[關鍵詞]復發(fā)性口腔潰瘍；左旋咪唑；貝復濟；T淋巴細胞亞群；輔助T淋巴細胞；臨床療效

[中圖分類號] R781.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）12（c）-0091-04

Efficacy analysis of immunosuppressive agents with topical Recombinant bovine basic fibroblast growth factor on recurrent oral ulcers

NIE Jian-fang

Department of Stomatology，the Third Hospital of Nanchang City in Jiangxi Province，Nanchang 330009，China

[Abstract]Objective To analyze clinical efficacy of recurrent oral ulcers treated by immune agents Levamisole hydrochloride with topical rb-bFGF （recombinant bovine basic fibroblast growth factor）.Methods 130 patients with recurrent oral ulcers from January 2014 to December 2015 in our hospital were randomly divided into observation group and control group according to treatment around，65 cases in each group.The patients in observation group were treated by Levamisole hydrochloride tablets with rb-bFGF sterile topical sprays，patients in control group were treated by Lvamisole hydrochloride.CD3+，CD4+，CD8+ cells in T lymphocytes；helper T lymphocytes （helper T cell Th），Th1（IFN-γ，TNF-α，IL-2），Th2（IL-4，IL-6，IL-10） in the serum and the clinical efficacy were compared before and after treatment，the clinical effects of Levamisole hydrochloride tablets with rb-bFGF topical was analyzed for patients with recurrent oral ulcers.Results CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+ of T lymphocytes in patients of observation group were significant differenres before and after treatment（P<0.01），no significant difference in the control group after treatment（P>0.05）.After treatment，CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+ were significant differences between two groups（P<0.05）.The helper T lymphocytes，Th1（IFN-γ，TNF-α，IL-2），Th2（IL-4，IL-6，IL-10），IFN-γ/IL-4 in observation group were significant differences before and after treament（P<0.01），in addition to IL-6 was significant differece in the control group（P<0.01），others were no significant differences（P>0.05）.After treatment，INF-α，IL-6，were no significant differences，others were significant differenles（P<0.05）. Clinical total effective rate was 92.08%，the recurrence rate of 9.23% in observation group，the control group was 73.85%，the recurrence rate of 36.92%，there was significant difference between two groups（P<0.01）.Conclusion Treatment by Levamisole hydrochloride tablets with b-bFGF topical can effectively improve T lymphocyte subsets and serum helper T lymphocytes expressing for the patients with recurrent oral ulcers and reduce their the recurrence rate.

[Key words]Recurrent oral ulcers；Levamisole；Recombinant bovine basic fibroblast growth factor（rb-bFGF）；T lymphocyte subsets；Helper T lymphocytes；Clinical efficacy

復發(fā)性口腔潰瘍又稱復發(fā)性阿弗他性口炎，是口腔黏膜中最常見的疾病?？谇粷兊牡湫吞卣鳛闇\表性、疼痛性、復發(fā)性[1]，常好發(fā)于唇、頰、舌側黏膜?；疾∫蛩赜羞z傳、過敏、藥物、激素、焦慮、免疫異常等，其中20%源于患者T細胞介導的免疫反應引起[2]。本病一年四季均能發(fā)生，10 d左右可以自愈，據(jù)統(tǒng)計患病率達20%，在特定人群中可高達60%，兒童發(fā)病率約15%，成年人發(fā)病率約85%[3]。

復發(fā)性口腔潰瘍發(fā)病機制尚未明確，由于反復發(fā)作，潰瘍疼痛引起患者飲食困難，對患者的日常生活、營養(yǎng)狀況、工作、學習造成不良的影響，同時外界反復刺激所致的口腔潰瘍存在癌變的風險。雖然臨床上治療該病的方法很多，但目前還無比較理想的方法[4]。本研究根據(jù)該病發(fā)病原理，采用免疫制劑左旋咪唑配合貝復濟（rb-bFGF）外用，觀察其臨床療效，探索一種復發(fā)性口腔潰瘍比較好的治療方法。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年1月～2015年12月來我院就診的復發(fā)性口腔潰瘍患者130例，按就診前后隨機分成觀察組與對照組，各65例，觀察組中男23例，女42例；年齡（24.71±8.14）歲；病程（5.51±3.32）年。對照組中男25例，女40例；年齡（25.12±7.54）歲，病程（6.07±3.16）年，兩組性別、年齡、病程等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。具有可比性。

1.2 入選標準

①口腔表面出現(xiàn)滲出以及灼痛的感覺，大小不等的圓形、橢圓形潰瘍；②間歇性地發(fā)作；③單發(fā)或多發(fā)性，經(jīng)常發(fā)生在唇、臉頰以及舌頭等處，數(shù)目 1～5個，直徑≥5 mm；④局部疼痛，潰瘍充血，邊緣整齊，基部不硬，中心稍凹，其上覆以灰黃色或淺黃白色纖維素性假膜；⑤多數(shù)患者無全身的表現(xiàn)，但是潰瘍直徑一般在10～30 mm深及黏膜下層甚至肌層，治好后會留下瘢痕；⑥所有患者均為口腔潰瘍反復發(fā)作>1年，發(fā)病間隔時間<1個月，其中輕型發(fā)作≤72 h，重型抽血時口內至少存在1個月以上潰瘍；⑦簽署知情同意書；⑧經(jīng)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.3排除標準

①白血病、貧血、消化性潰瘍、克隆病、急性感染性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤患等；②妊娠期婦女；③24 h內使用鎮(zhèn)痛藥，1個月內使用抗生素，3個月內使用免疫制劑；④3個月內吸煙者、嗜酒者。

1.4方法

觀察組采用鹽酸左旋咪唑片（武漢新贏和醫(yī)藥化工有限公司，片劑25 mg/片），3次/d， 50 mg/次，連服2 d后停5 d，連續(xù)2周。rb-bFGF無菌噴霧劑（含bFGF 36 000 AU），4次/d，1～2噴/次。對照組只采用鹽酸左旋咪唑片，用法同上。連續(xù)2周進行療效評價。

1.5觀察指標與評價方法

比較血清T淋巴細胞亞群CD3+、 CD4+、CD8+細胞；血清輔助性T淋巴細胞（helper T cell Th） Th1 （IFN-γ、TNF-α、IL-2）和Th2 （IL-4、IL-6、IL-10）類細胞因子的表達水平。 清晨9點以前空腹抽外周靜脈血5 ml，1500 r/min離心15 min后提取上清液，迅速置于-80℃低溫冰箱保存。采用流式細胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+細胞和IFN-γ，TNF-α，IL-2、IL-4、IL-6、IL-10。試劑盒購自Beckman Coulter， Inc. 中國有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進行。根據(jù)患者潰瘍面的恢復情況，具體如下。①顯效：潰瘍面消退>60%，口腔潰瘍基本愈合。②有效：潰瘍面消退30%～60%，口腔潰瘍雖然時有復發(fā)，但數(shù)量減少，程度減輕。③無效：口腔潰瘍癥狀及潰瘍無明顯好轉，潰瘍面無消退或加重?？傆行?（顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.6統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用 χ2 檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組患者治療前后T淋巴細胞亞群檢測結果的比較

觀察組T淋巴細胞亞群CD3+、 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+ 治療前后的檢測結果比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01），對照組治療前后比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。兩組治療后CD3+、 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2兩組患者治療后前輔助T淋巴細胞檢測結果的比較

觀察組輔助T淋巴細胞Th1 （IFN-γ、TNF-α、IL-2）、Th2 （IL-4、IL-6、IL-10）、IFN-γ/IL-4治療前后檢測結果比較，差異均有統(tǒng)計學差異（P<0.01），對照組治療前后IL-6比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），其他差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。兩組治療后INF-α、IL-6比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），其他差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表2）。

2.3兩組患者治療后臨床效果的比較

兩組臨床療效觀察結果顯示，觀察組總有效率為92.08%，復發(fā)率為9.23%，對照組有效率為73.85%，復發(fā)率為36.92%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表3）。

3結果

復發(fā)性口腔潰瘍在一般人群中的發(fā)病率≤10%，在特定人群中，其發(fā)病率達50%～60%[5]。目前復發(fā)性口腔潰瘍的病因尚不甚清楚，因此治療原則是防止繼發(fā)感染，減輕疼痛與促進愈合、縮短療程[6]。復發(fā)性口腔潰瘍的病因不明，大多學者認為復發(fā)性口腔潰瘍病因與免疫功能紊亂有關，T細胞介導的免疫反應被認為與該病發(fā)病機制密切相關[7]。近來一些研究表明[8-12]，復發(fā)性口腔潰瘍是一種自身免疫性疾病，其病理過程與機體本身免疫，Th1/Th2失衡、CD4-、CD25-Foxp3-Trey減少、細胞因子分泌紊亂、膜抗體形成、變態(tài)反應等一系列免疫紊亂反應有關。1969年，Lehner等首次發(fā)現(xiàn)復發(fā)性口腔潰瘍前驅期病損部位有大量T淋巴細胞浸潤，潰瘍前期以T輔助細胞占多數(shù)，潰瘍期轉為以細胞毒T細胞為主，愈合期又以T輔助細胞為主。

本研究結果表明，采用鹽酸左旋咪唑片配合外用rb-bFGF無菌噴霧劑治療復發(fā)性口腔潰瘍的觀察組，治療前后T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+，輔助性T淋巴細胞IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ/IL-4均有統(tǒng)計學差異。單純鹽酸左旋咪唑片治療的對照組，除IL-6治療前后有統(tǒng)計學差異外，其他均無統(tǒng)計學意義。該研究進一步證明復發(fā)性口腔潰瘍中的細胞介導免疫反應與T淋巴細胞群及輔助T淋巴細胞有關。T淋巴細胞亞群的研究發(fā)現(xiàn)，復發(fā)性口腔潰瘍患者CD3+、CDQ+、CDa+以及CDQ+/CDa+亞群均有不同程度的變化，這些變化可能是導致復發(fā)性口腔潰瘍發(fā)生的誘因[13-14]。輔助T淋巴細胞分為Th1與Th2，Th1細胞主要產(chǎn)IFN-γ、TNF-α、IL-2，介導細胞免疫應答。Th2細胞主要產(chǎn)生IL-4、IL-6、IL-10，介導體液免疫應答。本研究結果顯示，Th1與Th2觀察組均有較大的變化，對照組雖然Th1與Th2的變化無統(tǒng)計學差異，但治療前后還是有一定變化，且兩組Th1與Th2與正常人有明顯的差異，與Al-Samadi等[15]發(fā)現(xiàn)復發(fā)性口腔潰瘍患者潰瘍形成主要取決于Th1型細胞免疫應答的激活，以及Th1/Th2免疫失衡的結果一致。

本研究臨床療效觀察發(fā)現(xiàn)，觀察組總有效率為92.08%，復發(fā)率為9.32%，對照組總有效率為73.85%，復發(fā)率為36.92%。兩組均采用了免疫制劑左旋咪唑片，觀察組加用了rb-bFGF無菌噴霧劑外用，有效率竟然高出對照組，與rb-bFGF外用效果有關。rb-bFGF為堿性成纖維細胞生長因子，是一種廣泛存在于人體腦內和神經(jīng)等組織的生物活性物質，具有調節(jié)蛋白和化學趨化， 促進修復和再生的作用，對傷口愈合過程中所有相關細胞的促有絲分裂原，調節(jié)蛋白和化學趨化、促進組織損傷的修復，改善局部血液循環(huán)加速創(chuàng)面愈合有促進作用[16-17]。

左旋咪唑在治療復發(fā)性口腔潰瘍中是通過誘導Ⅰ類細胞因子的釋放來激發(fā)細胞免疫、降低血清IgE的濃度，增加干擾素的生成量提高機體免疫力。進一步研究發(fā)現(xiàn)，左旋咪唑在提高脾細胞干擾素表達的同時，還能調節(jié)Ⅰ類細胞因子和Ⅱ類細胞因子的相對關系，從而調節(jié)免疫反應的平衡，從而改善復發(fā)性口腔潰瘍的發(fā)病過程中Th1、Th2細胞功能失平衡現(xiàn)象[18]。左旋咪唑還可顯著促進外周血T淋巴細胞增殖，使CD4+/CD8+淋巴細胞比值明顯升高[19-20]。但單純用左旋咪唑治療復發(fā)性口腔潰瘍效果不及左旋咪唑配合外用rb-bFGF無菌噴霧劑治療，可見在治療復發(fā)性口腔潰瘍的過程中，除改善機體免疫功能外，消炎、促進潰瘍愈合也是非常重要的一步。左旋咪唑片配合外用rb-bFGF無菌噴霧劑治療既改善了患者免疫功能，又促進潰瘍面的愈合，因此治療效果優(yōu)于單純左旋咪唑的治療。

[參考文獻]

[1]Lewkowicz N，Lewkowicz P，Dzitko K，et al. Dysfunction of CD4+CD25 high T regulatory cells in patients with recurrent aphthous stomatitis[J].J Oral Pathol Med，2008，37（18）： 454-461.

[2]Huling LB，Baccaglini L，Choquette L，et al. Effect of stressful life events on the onset and duration of recurrent aphthous stomatitis[J].J Oral Pathol Med，2012，41（2）：149-152.

[3]Stoopler ET，Sollecito TP.Recurrent Oral Ulcers[J].JAMA，2015，313（23）：2373-2374.

[4]劉志明，張虹，毛甜甜，等.不同藥物治療復發(fā)性口腔潰瘍效用的回顧性分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2015，12（21）：3243-3245.

[5]李源媛，王新文.復發(fā)性口腔潰瘍的治療研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（11）：270-273.

[6]樊瑞斌，崔君霞，張虹.復發(fā)性阿弗他潰瘍的局部藥物治療現(xiàn)狀[J].北京口腔醫(yī)學，2011，19（2）：118-120.

[7]陳茜，王冬平，蔡揚，等.復發(fā)性阿弗它潰瘍患者血清中Th1，Th2類因子表達及意義[J].實用口腔醫(yī)學雜志，2015， 31（6）：826-829.

[8]劉好好，許子悅，謝春雨，等.復發(fā)性口腔潰瘍與T細胞免疫研究進展[J].現(xiàn)代免疫學，2016，36（1）：72-75.

[9]Akintoye SO，Ureenberg MS. Recurrent aphthous stomatitis[J].Dental Clin North America，2014，58：281-297.

[10]Basu R，Hatton RD，Weaver CT. The Th17 family； flexibility follows function[J].Immunol Rev，2013，252（1）：89-103.

[11]Lewkowicz N，Kur B，Kurnatowska A，et al.Expression of Thl-Th2/Th3-Th17-related genes in recurrent aphthous ul ？鄄cers[J].Arch Immunol The Exp（warsz），2011，59（5）：399-406.

[12]Pekiner FN，Aytugar E，Demirel GY，et al.Interleukin-2，interleukin-6 and T regulatory cells in peripheral blood of patients with Behcet′s and disease and recurrent aphthous ulcerations[J].J Oral Pathol Med，2012，41（1）：73-79.

[13]Emoto M，Shimizu T，Koike H，et al. Dissociated expression of natural killer 1.1 and T-cell receptor by invariant natural killer T cells after interleukin-12 receptor and T-cell receptor signalling[J].Immunology，2010，129（1）： 62-74.

[14]Pedersen A，Klaosen B，Hougen HP，et al.T-lymphocyte subsets in recurrent aphthous ulceration[J].J Oral Pathol Med，1989，18（1）：59-60.

[15]Al-Samadi A，Kouri VP，Salem A，et al.IL-17C and its receptor IL-17RA/IL-17RE identify human oral epithelial cell as an inflammatory cell inrecurrent aphthous ulcer[J].J Oral Pathol Med，2014，43（2）：117-124.

[16]羅成.重組牛堿性成纖維細胞生長因子治療復發(fā)性口腔潰瘍臨床觀察[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2008，46（20）：75-76.

[17]黃敏，黃冬，鄭澤榮.堿性成纖維細胞生長因子治療復發(fā)性口腔潰瘍165例[J].廣東醫(yī)學，2006，27（6）：927-928.

[18]Dalghous AM，F(xiàn)reysdottir J，F(xiàn)ortune F.Expression of cytotrines，chemokines，and chemokine receptors in oral ulcers of patients with Behcet′s disease（BD）and recurrent aphthous stomatitis is Th1-associated，although Th2-association is also observed in patients with BD[J].Scand J Rheumatol，2006，35（6）：472-475.

[19]巫志勇，吳建民.內外合治治療復發(fā)性口腔潰瘍的臨床觀察[J].中國當代醫(yī)藥，2014，21（20）：135-136.

[20]商繼仲，張燕，劉占文.中藥和左旋咪唑聯(lián)合治療復發(fā)性口腔潰瘍的療效觀察[J].上?？谇会t(yī)學，2010，19（3）：247-249.