姚艷玲

摘要[目的]比較不同聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)在食品源性分析中的應(yīng)用，分析引物、熒光染料和探針的特點(diǎn)及其發(fā)展前景。[方法]介紹PCR、熒光定量PCR技術(shù)，比較該技術(shù)及熒光標(biāo)記基團(tuán)的特性，及其在食品源性成分鑒定方面的實(shí)際應(yīng)用。[結(jié)果]通過(guò)完善DNA提取方法、優(yōu)化反應(yīng)體系、設(shè)計(jì)特異性引物或探針均能有效提高PCR檢測(cè)的靈敏度及準(zhǔn)確性。[結(jié)論]采用PCR、熒光定量PCR技術(shù)能有效地實(shí)現(xiàn)食品中源性成分鑒定，且方法具有高靈敏度、高特異性、高效率等優(yōu)勢(shì)，能滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)食品中源性成分的檢測(cè)分析。

關(guān)鍵詞聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；源性成分

中圖分類號(hào)TS207.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A文章編號(hào)0517-6611（2017）09-0098-03

Application of Polymerase Chain Reaction in Food Derived Materials Determination

YAO Yanling

（Jiaxing Testing Institute for Food and Drug Control，Jiaxing，Zhejiang 314001）

Abstract[Objective] The application of different polymerase chain reactions（PCRs） in food derived materials′ determination were compared，in order to analyze the diversification and prospect of the primer，dye and probe in PCR.[Method] The techniques of PCR and fluorogenic quantitative PCR were introduced，and the characters and the applications of these techniques in the determination of food derived materials were compared.[Result] The sensitivity and availability of the technology of PCR can be improved by improving extraction methods of DNA，optimizing the reaction systems，and designing the distinct primes or probes.[Conclusion] The technologies of PCR and fluorogenic quantitative PCR can be used in the determinations of food derived materials，and they have the characteristics of sensitive，efficient and specific.

Key wordsPolymerase chain reaction；Fluorogenic quantitative PCR；Derived materials

近年來(lái)，食品中摻假、造假事件屢見(jiàn)不鮮，以鴨肉代替牛羊肉，用果葡糖漿充當(dāng)蜂蜜，以海藻酸鈉、明礬、明膠等為主要原料制作的假雞蛋，用地溝油代替食用植物油等事件屢遭曝光，卻屢禁不止。為了追求更高的商業(yè)利益，制造商不惜鋌而走險(xiǎn)，不僅破壞了市場(chǎng)消費(fèi)信譽(yù)，降低了人們對(duì)食品安全的信心，很大程度上也增加了食品安全監(jiān)管的壓力。目前，對(duì)摻假食品的檢驗(yàn)方法還不盡完善，甚至還有缺失。

對(duì)于物種源性鑒別常采用感官檢驗(yàn)和免疫學(xué)方法，但肉奶制品經(jīng)熱加工處理，導(dǎo)致其感官性狀、蛋白質(zhì)成分和其他免疫原性物質(zhì)被破壞而難以鑒別[1]，而聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)剛好可以彌補(bǔ)這個(gè)缺陷。正確選擇物種的特異性基因進(jìn)行源性成分鑒定，不受食品深加工工藝的影響，大大提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和有效性。PCR技術(shù)早在1985年由科學(xué)家Kary Mullis和Cetus研究發(fā)明，是最基本的擴(kuò)增DNA或增加樣品中特殊核苷酸片段數(shù)量的方法[2]，它可看作是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的原理在體外酶促合成特異DNA片段[3] ，在短時(shí)間內(nèi)使微量DNA呈指數(shù)型增長(zhǎng)，從而達(dá)到檢測(cè)目的。該技術(shù)快速準(zhǔn)確、靈敏度高，已被廣泛應(yīng)用于食品源性分析的研究中，為完善食品源性成分鑒定檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)體系積累了一定的技術(shù)基礎(chǔ)。

1PCR技術(shù)

1.1PCR反應(yīng)體系

PCR技術(shù)是對(duì)特定核苷酸片斷進(jìn)行指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，在擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束之后，通過(guò)凝膠電泳的方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定性或定量分析，進(jìn)而對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序比對(duì)。該方法迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用源于反應(yīng)體系的建立，PCR反應(yīng)體系主要包括緩沖液、氯化鎂溶液、dNTP、Taq DNA聚合酶（Taq DNA Polymerase）、引物和DNA模板等。其中的Taq酶具有熱穩(wěn)定性，在PCR循環(huán)的高溫條件下仍能保持較高的活性，促進(jìn)體外擴(kuò)增有效進(jìn)行，大大提高了擴(kuò)增的效率，使PCR技術(shù)得到快速發(fā)展。反應(yīng)體系中的特異性引物是目標(biāo)DNA擴(kuò)增的直接影響因子，通常試驗(yàn)者利用軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。目前常用的引物設(shè)計(jì)軟件有Premier Primer、Oligo 6、Vector NTI Suit、DNAsis、Omiga和Dnastar等，這些軟件都帶有引物自動(dòng)搜索功能，同時(shí)結(jié)合人工分析便能更有效地設(shè)計(jì)特異性引物。除了引物和Taq酶以外，dNTP、DNA模板和Mg2+的含量均會(huì)影響擴(kuò)增結(jié)果。因此，在建立PCR反應(yīng)體系時(shí)，可以通過(guò)優(yōu)化各反應(yīng)條件，以得到更高的靈敏度和準(zhǔn)確性。

1.2熒光定量 PCR

熒光定量 PCR是在普通PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的分析方法，該方法在反應(yīng)體系中加入熒光染料或探針等熒光物質(zhì)，通過(guò)對(duì) PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物的熒光信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性分析。根據(jù)熒光化學(xué)模式不同，可分為熒光染料法和熒光探針?lè)?，常?jiàn)的熒光標(biāo)記基團(tuán)的特性見(jiàn)表1。

SYBR Green I是應(yīng)用最廣泛的一種熒光染料，能結(jié)合所有DNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長(zhǎng)的染料。在游離狀態(tài)下，SYBR Green I發(fā)出微弱的熒光，一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強(qiáng)，而未結(jié)合的染料不能發(fā)射熒光信號(hào)。但是，在做染料法熒光定量PCR時(shí)，要注意區(qū)分假陽(yáng)性現(xiàn)象，非特異性擴(kuò)增和引物二聚體均能結(jié)合SYBR Green I而干擾檢驗(yàn)結(jié)果。目前的熒光染料除了SYBR Green I以外，還有LC Green TM1和Pico Green等新型熒光染料[4]。

目前應(yīng)用最廣泛的熒光探針是TaqMan水解探針，探針上5′端和3′端分別標(biāo)記了1個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和1個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。在反應(yīng)初始時(shí)，系統(tǒng)激發(fā)供體而產(chǎn)生的熒光信號(hào)被

鄰近的淬滅基團(tuán)吸收，所以此時(shí)檢測(cè)不到供體熒光信號(hào)；而

當(dāng)PCR過(guò)程中聚合酶擴(kuò)增到探針結(jié)合模版的位點(diǎn)時(shí)，其5′～3′核酸外切酶酶切探針5′端的報(bào)告基團(tuán)，此時(shí)游離的報(bào)告基團(tuán)遠(yuǎn)離淬滅基團(tuán)，產(chǎn)生熒光信號(hào)而被檢測(cè)到。該水解探針?lè)ㄖ?，一旦?bào)告基團(tuán)水解離開(kāi)淬滅基團(tuán)，就一直游離于反應(yīng)體系中可被檢測(cè)，所以檢測(cè)的是累積熒光，信號(hào)不可逆。而雜交探針FRET不同，上游探針的3′端和下游探針的5′端分別標(biāo)記供體熒光基團(tuán)和受體熒光基團(tuán)，復(fù)性時(shí)2條特異性探針雜交到模板上，相互靠近而產(chǎn)生熒光信號(hào)；升溫變性時(shí)2條特異性探針又遠(yuǎn)離模板，此時(shí)供體和受體熒光基團(tuán)分開(kāi)，熒光信號(hào)消失，所以利用該法檢測(cè)到的是實(shí)時(shí)信號(hào)，而非累積信號(hào)，信號(hào)可逆。除了以上兩者以外，熒光探針還有TaqMan MGB探針、分子信標(biāo)等[5]。

2PCR在物種源性成分鑒定方面的應(yīng)用

2.1利用PCR進(jìn)行物種源性成分分析

動(dòng)物源性分析時(shí)主要針對(duì)其各自線粒體基因保守序列設(shè)計(jì)引物，優(yōu)化反應(yīng)體系，建立分析方法。于衛(wèi)霞等[6]利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)對(duì)魚(yú)種進(jìn)行鑒定。試驗(yàn)人員從基因庫(kù)中找到8種海魚(yú)以及其他12種參照海魚(yú)魚(yú)種的線粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞基III基因（MT-co3），通過(guò)比對(duì)分析自行設(shè)計(jì)通用引物進(jìn)行DNA擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆、測(cè)序，然后根據(jù)生物信息軟件提供的限制性內(nèi)切酶酶切信息，篩選出Nla III和Hinf I 2種內(nèi)切酶組合體系，對(duì)10種海魚(yú)的PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切分析，獲得了各種魚(yú)類特異的酶切片段圖譜。試驗(yàn)結(jié)果表明，引物MT-co3對(duì)10種海洋魚(yú)的通用性較高，經(jīng)測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，選用MT-co3基因作為分子標(biāo)記鑒定的魚(yú)種與形態(tài)學(xué)鑒定的魚(yú)種相似度不低于99%，同時(shí)試驗(yàn)獲得了基因庫(kù)中未找到的另外2種海魚(yú)的MT-co3全序列。通過(guò)酶切圖譜分析，使用單一的Hinf I或Nla III酶切都不能將10種海魚(yú)進(jìn)行區(qū)分，但依次使用Hinf I或Nla III 2種酶酶切，可將這10種海魚(yú)進(jìn)行有效區(qū)分。該試驗(yàn)方法首次采用MT-co3基因作為分子標(biāo)記，采用PCR技術(shù)進(jìn)行魚(yú)類種屬的鑒別，結(jié)合適宜的限制性內(nèi)切酶酶切分析技術(shù)，可對(duì)10種海魚(yú)進(jìn)行種源性鑒別。

尚柯等[7]通過(guò)在基因庫(kù)中分析和比對(duì)豬、牛、羊的線粒體基因保守序列，確定了針對(duì)不同物種線粒體cyt-b基因中的特定片段，分別設(shè)計(jì)相同的上游引物和具有各自物種特異性的下游引物。通過(guò)多次優(yōu)化反應(yīng)體系及引物配比，確定多重PCR試驗(yàn)條件，所擴(kuò)增得到的豬、牛、羊的基因片段大小分別為384、258和318 bp，通過(guò)基因片段大小差異對(duì)樣品肉的源性進(jìn)行鑒定。同時(shí)，他們還進(jìn)行了檢測(cè)限試驗(yàn)，通過(guò)設(shè)定不同的模板比例，最終確定該多重PCR體系對(duì)豬牛肉、豬羊肉混合樣品的最低檢測(cè)限可達(dá)10%。該研究確定了針對(duì)以上3種動(dòng)物的共同序列及其特異性序列，建立了這3類常見(jiàn)畜肉的特異性檢測(cè)引物體系，能有效進(jìn)行豬、牛、羊源性分析。

曲莉等[8]采用改良鹽析法和柱層析法有效提取鴨肉、雞肉、豬肉、牛肉、羊肉、馬肉和驢肉的mtDNA，通過(guò)在GenBank中下載綠頭鴨線粒體細(xì)胞色素b（AY676201.1）基因序列，進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，通過(guò)反復(fù)梯度PCR試驗(yàn)，確定最佳退火溫度為62 ℃；同時(shí)，以提取的7種肉類mtDNA為模板，驗(yàn)證所設(shè)計(jì)的鴨肉引物的特異性。結(jié)果表明，設(shè)計(jì)的引物僅在鴨肉模板上有明顯擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為223 bp。該研究改良了2種DNA提取方法，采用PCR技術(shù)對(duì)肉類產(chǎn)品中的鴨源性成分進(jìn)行鑒定，比起商品化試劑盒的提取更能縮短提取時(shí)間、降低試驗(yàn)成本。

國(guó)外在這方面的研究比國(guó)內(nèi)開(kāi)展得更早，如Tartaglia等[9]根據(jù)牛線粒體DNA中的特異性序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)試驗(yàn)后建立了適用于飼料中牛源性成分的檢測(cè)方法，該方法靈敏度可達(dá)0.125%。Arslan等[10]以經(jīng)烹飪、蒸烤、壓力等處理過(guò)的牛肉制品為研究對(duì)象，經(jīng)試驗(yàn)證明經(jīng)水烹飪過(guò)后的牛肉制品仍可提取其線粒體DNA片段，后經(jīng)PCR擴(kuò)增可以對(duì)其牛源性成分進(jìn)行鑒別，因此以牛線粒體DNA為模板，采用PCR技術(shù)可以對(duì)經(jīng)水烹飪后的牛肉制品進(jìn)行牛源性分析。

綜上所述，采用PCR技術(shù)可對(duì)魚(yú)類、畜肉、禽肉、熟肉制品和飼料等進(jìn)行肉源性分析，方法檢出限、靈敏度均能滿足要求。但該方法后續(xù)均需進(jìn)行凝膠電泳，并對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行成像分析，使用試劑多、耗時(shí)長(zhǎng)，不能實(shí)時(shí)檢測(cè)，對(duì)日常監(jiān)督檢驗(yàn)要求來(lái)說(shuō)顯得較為冗長(zhǎng)滯后。

2.2利用熒光定量PCR進(jìn)行物種源性成分分析熒光定量PCR主要采用熒光染料或者標(biāo)記各種不同熒光基團(tuán)及熒光淬滅基團(tuán)的探針來(lái)實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)。

楊麗霞等[11]根據(jù)鴨線粒體基因序列的位點(diǎn)差異設(shè)計(jì)特異性引物，采用SYBR Green I染料，通過(guò)溶解曲線分析，建立熒光定量PCR檢測(cè)方法。試驗(yàn)以鴨肉、牛肉混合樣品為試驗(yàn)對(duì)象，結(jié)果表明，試驗(yàn)針對(duì)鴨線粒體基因設(shè)計(jì)的引物特異性較好，擴(kuò)增試驗(yàn)中僅鴨線粒體DNA有擴(kuò)增，其Ct值為12.82，而牛線粒體DNA未擴(kuò)增；鴨基因組檢測(cè)靈敏度為1 pg DNA；溶解曲線試驗(yàn)顯示，鴨DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的溶解溫度為79.15 ℃，可以有效區(qū)分目的片段、非特異性擴(kuò)增和引物二聚體。試驗(yàn)將牛肉、鴨肉以9∶1的比例混合后在100 ℃加熱15 min，采用試驗(yàn)中建立的方法進(jìn)行檢測(cè)，鴨肉DNA擴(kuò)增Ct值為26.99，產(chǎn)物溶解溫度亦為79.15 ℃，說(shuō)明該方法也適用于熟鴨肉的檢測(cè)，靈敏度及特異性均可滿足實(shí)驗(yàn)室鴨肉源性成分鑒定。

趙冉[12] 選取GenBank上已發(fā)表的豬、牛源性mtDNA D-loop序列，在NCBI中進(jìn)行比對(duì)后，分別針對(duì)豬、牛線粒體DNA種間保守基因，設(shè)計(jì)特異性引物與TaqMan探針、豬探針報(bào)告熒光基團(tuán)ROX、熒光淬滅基團(tuán)BHQ2；牛探針報(bào)告熒光基團(tuán)HEX、熒光淬滅基團(tuán)BHQ1。通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化篩選，利用以上2種發(fā)射波長(zhǎng)相差較大的報(bào)告熒光基團(tuán)，在ROX、HEX熒光通道搜集信號(hào)，建立了豬、牛雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法。試驗(yàn)通過(guò)對(duì)16種不同來(lái)源的動(dòng)物源性核酸進(jìn)行檢測(cè)，確定該方法所設(shè)計(jì)的豬牛引物的特異性，同時(shí)對(duì)豬、牛DNA模板進(jìn)行梯度稀釋，確定其方法最低檢出限均達(dá)10-5。試驗(yàn)對(duì)不同狀態(tài)的樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，建立的雙重?zé)晒釶CR法還適用于蒸煮、腌制肉制品、動(dòng)物血液、奶制品及飼料中豬牛源性分析檢測(cè)。

史艷宇等[13]以鴨線粒體基因全序列為靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物和探針，經(jīng)Blast軟件對(duì)相似序列搜索后，篩選出最優(yōu)且與常見(jiàn)畜禽肉無(wú)交叉反應(yīng)的引物及探針，所用到的探針為TaqMan水解探針，報(bào)告熒光基團(tuán)FAM，熒光淬滅基團(tuán)TAMRA，采用熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)分別用羊肉、牛肉、雞肉、鵝肉、豬肉、兔肉、馬肉和鹿肉等對(duì)引物進(jìn)行特異性試驗(yàn)，同時(shí)，用羊肉DNA溶液對(duì)鴨肉DNA進(jìn)行梯度稀釋，再進(jìn)行鴨肉檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)。通過(guò)優(yōu)化PCR反應(yīng)體系，最終建立了鴨源性成分檢測(cè)方法，該方法具有較強(qiáng)特異性，所設(shè)計(jì)的引物及探針對(duì)鴨肉的檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.1 μg/kg，并且高濃度羊肉成分的存在對(duì)鴨肉靈敏度檢測(cè)沒(méi)有影響。

范麗麗等[14]以雞線粒體細(xì)胞色素b為目的基因，設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan水解探針，探針的報(bào)告熒光基團(tuán)FAM，熒光淬滅基團(tuán)TAMRA。利用所設(shè)計(jì)的特異性引物對(duì)雞DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，所得產(chǎn)物片段為110 bp。在特異性試驗(yàn)中，試驗(yàn)人員將雞、豬、牛、羊、鴨、火雞、鵪鶉和鴿子等DNA模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，結(jié)果顯示設(shè)計(jì)的引物探針體系只對(duì)雞DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，Ct值為35，其他源性成分均未有效擴(kuò)增；靈敏度試驗(yàn)顯示該方法最低可檢測(cè)3.5 pg/μL雞肉DNA，可用于對(duì)食品中雞源性成分的摻假鑒別。

綜上，熒光定量PCR目前較常用的熒光基團(tuán)較集中于SYBR Green I和TaqMan探針，SYBR Green I信號(hào)可逆，利用該特性結(jié)合溶解曲線分析可實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)；TaqMan探針上標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)可根據(jù)檢測(cè)通道不同分別進(jìn)行設(shè)計(jì)，在同一反應(yīng)體系中加入標(biāo)記不同熒光基團(tuán)的探針也可實(shí)現(xiàn)多通道檢測(cè)，因此在熒光定量PCR檢測(cè)時(shí)，引物及探針的設(shè)計(jì)至關(guān)重要，在今后的工作中有待更深入的探索試驗(yàn)。在已發(fā)表的文獻(xiàn)中，利用雙雜交探針FRET、分子信標(biāo)及LUX引物在源性鑒定分析方面應(yīng)用還較少。使用雜交探針在探針合成時(shí)標(biāo)記較為復(fù)雜，且雜交時(shí)探針不能完全與模板結(jié)合，穩(wěn)定性較差；而LUX引物在合成時(shí)不需要專門設(shè)計(jì)探針，其特異性要弱于探針技術(shù)，但非特異性擴(kuò)增或引物二聚體沒(méi)有影響，其特異性又優(yōu)于SYBR Green I。鑒于各染料、探針及引物的特性不同，在食品源性成分分析鑒定方面的應(yīng)用還有待更深入的研究與探索。

安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2017年

3前景與展望

利用PCR、熒光定量PCR技術(shù)，從分子角度進(jìn)行物種源性分析檢測(cè)，是當(dāng)前食品安全檢測(cè)的新興行業(yè)，近年來(lái)發(fā)展尤為迅速。PCR技術(shù)在源性成分分析時(shí)，針對(duì)目標(biāo)DNA設(shè)計(jì)特異性引物以實(shí)現(xiàn)DNA模板的擴(kuò)增；多重檢測(cè)時(shí)，通過(guò)設(shè)計(jì)通用性的上游引物及特異性的下游引物，或在同一反應(yīng)體系中設(shè)計(jì)各自不同的上下游引物，以實(shí)現(xiàn)物種鑒定的多重快速檢測(cè)。熒光定量PCR技術(shù)以實(shí)時(shí)、快速、簡(jiǎn)捷的特性在食品源性成分鑒定方面也得到了迅速發(fā)展。除了嵌入式熒光染料的使用外， TaqMan探針的應(yīng)用最為常見(jiàn)，利用標(biāo)記不同的熒光報(bào)告基團(tuán)及淬滅基團(tuán)的TaqMan探針，可實(shí)現(xiàn)多通道實(shí)時(shí)檢測(cè)。在熒光淬滅物質(zhì)設(shè)計(jì)方面，有研究者利用一種單層的、二維的碳納米材料——氧化石墨烯作為反應(yīng)時(shí)的淬滅劑，該物質(zhì)能吸附單鏈DNA，對(duì)標(biāo)記在單鏈核酸上的熒光染料具有很強(qiáng)的淬滅作用[15]，這在熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用方面又開(kāi)拓了新的發(fā)展方向。由于目前檢測(cè)儀器的通道限制，多通道檢測(cè)目前多局限于雙重或三重，在今后的研究工作中，隨著熒光標(biāo)記物質(zhì)的不斷開(kāi)發(fā)，相應(yīng)儀器的檢測(cè)通道會(huì)不斷增加，多重檢測(cè)必將是PCR技術(shù)發(fā)展的主要方向。

食品源性成分檢測(cè)方法的建立，通過(guò)改良DNA提取技術(shù)以提高目標(biāo)DNA提取效率，采用限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù)以實(shí)現(xiàn)物種多態(tài)性分析，優(yōu)化擴(kuò)增反應(yīng)體系及溫度條件以提高檢測(cè)靈敏度，設(shè)計(jì)不同引物、標(biāo)記熒光基團(tuán)的探針以提高檢測(cè)專一性等，這些技術(shù)在一定程度上不斷開(kāi)發(fā)PCR技術(shù)的潛力，延伸其在物種鑒定方面的發(fā)展空間。今后，通過(guò)對(duì)雙雜交探針FRET、分子信標(biāo)及LUX引物等技術(shù)研究的不斷深入，食品源性鑒定分析的方法必將朝著多元化的方向發(fā)展。

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