姚艷玲
摘要[目的]比較不同聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)在食品源性分析中的應(yīng)用,分析引物、熒光染料和探針的特點(diǎn)及其發(fā)展前景。[方法]介紹PCR、熒光定量PCR技術(shù),比較該技術(shù)及熒光標(biāo)記基團(tuán)的特性,及其在食品源性成分鑒定方面的實(shí)際應(yīng)用。[結(jié)果]通過(guò)完善DNA提取方法、優(yōu)化反應(yīng)體系、設(shè)計(jì)特異性引物或探針均能有效提高PCR檢測(cè)的靈敏度及準(zhǔn)確性。[結(jié)論]采用PCR、熒光定量PCR技術(shù)能有效地實(shí)現(xiàn)食品中源性成分鑒定,且方法具有高靈敏度、高特異性、高效率等優(yōu)勢(shì),能滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)食品中源性成分的檢測(cè)分析。
關(guān)鍵詞聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);源性成分
中圖分類號(hào)TS207.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼
A文章編號(hào)0517-6611(2017)09-0098-03
Application of Polymerase Chain Reaction in Food Derived Materials Determination
YAO Yanling
(Jiaxing Testing Institute for Food and Drug Control,Jiaxing,Zhejiang 314001)
Abstract[Objective] The application of different polymerase chain reactions(PCRs) in food derived materials′ determination were compared,in order to analyze the diversification and prospect of the primer,dye and probe in PCR.[Method] The techniques of PCR and fluorogenic quantitative PCR were introduced,and the characters and the applications of these techniques in the determination of food derived materials were compared.[Result] The sensitivity and availability of the technology of PCR can be improved by improving extraction methods of DNA,optimizing the reaction systems,and designing the distinct primes or probes.[Conclusion] The technologies of PCR and fluorogenic quantitative PCR can be used in the determinations of food derived materials,and they have the characteristics of sensitive,efficient and specific.
Key wordsPolymerase chain reaction;Fluorogenic quantitative PCR;Derived materials
近年來(lái),食品中摻假、造假事件屢見(jiàn)不鮮,以鴨肉代替牛羊肉,用果葡糖漿充當(dāng)蜂蜜,以海藻酸鈉、明礬、明膠等為主要原料制作的假雞蛋,用地溝油代替食用植物油等事件屢遭曝光,卻屢禁不止。為了追求更高的商業(yè)利益,制造商不惜鋌而走險(xiǎn),不僅破壞了市場(chǎng)消費(fèi)信譽(yù),降低了人們對(duì)食品安全的信心,很大程度上也增加了食品安全監(jiān)管的壓力。目前,對(duì)摻假食品的檢驗(yàn)方法還不盡完善,甚至還有缺失。
對(duì)于物種源性鑒別常采用感官檢驗(yàn)和免疫學(xué)方法,但肉奶制品經(jīng)熱加工處理,導(dǎo)致其感官性狀、蛋白質(zhì)成分和其他免疫原性物質(zhì)被破壞而難以鑒別[1],而聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)剛好可以彌補(bǔ)這個(gè)缺陷。正確選擇物種的特異性基因進(jìn)行源性成分鑒定,不受食品深加工工藝的影響,大大提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和有效性。PCR技術(shù)早在1985年由科學(xué)家Kary Mullis和Cetus研究發(fā)明,是最基本的擴(kuò)增DNA或增加樣品中特殊核苷酸片段數(shù)量的方法[2],它可看作是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的原理在體外酶促合成特異DNA片段[3] ,在短時(shí)間內(nèi)使微量DNA呈指數(shù)型增長(zhǎng),從而達(dá)到檢測(cè)目的。該技術(shù)快速準(zhǔn)確、靈敏度高,已被廣泛應(yīng)用于食品源性分析的研究中,為完善食品源性成分鑒定檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)體系積累了一定的技術(shù)基礎(chǔ)。
1PCR技術(shù)
1.1PCR反應(yīng)體系
PCR技術(shù)是對(duì)特定核苷酸片斷進(jìn)行指數(shù)級(jí)擴(kuò)增,在擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束之后,通過(guò)凝膠電泳的方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定性或定量分析,進(jìn)而對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序比對(duì)。該方法迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用源于反應(yīng)體系的建立,PCR反應(yīng)體系主要包括緩沖液、氯化鎂溶液、dNTP、Taq DNA聚合酶(Taq DNA Polymerase)、引物和DNA模板等。其中的Taq酶具有熱穩(wěn)定性,在PCR循環(huán)的高溫條件下仍能保持較高的活性,促進(jìn)體外擴(kuò)增有效進(jìn)行,大大提高了擴(kuò)增的效率,使PCR技術(shù)得到快速發(fā)展。反應(yīng)體系中的特異性引物是目標(biāo)DNA擴(kuò)增的直接影響因子,通常試驗(yàn)者利用軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。目前常用的引物設(shè)計(jì)軟件有Premier Primer、Oligo 6、Vector NTI Suit、DNAsis、Omiga和Dnastar等,這些軟件都帶有引物自動(dòng)搜索功能,同時(shí)結(jié)合人工分析便能更有效地設(shè)計(jì)特異性引物。除了引物和Taq酶以外,dNTP、DNA模板和Mg2+的含量均會(huì)影響擴(kuò)增結(jié)果。因此,在建立PCR反應(yīng)體系時(shí),可以通過(guò)優(yōu)化各反應(yīng)條件,以得到更高的靈敏度和準(zhǔn)確性。
1.2熒光定量 PCR
熒光定量 PCR是在普通PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的分析方法,該方法在反應(yīng)體系中加入熒光染料或探針等熒光物質(zhì),通過(guò)對(duì) PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物的熒光信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè),實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性分析。根據(jù)熒光化學(xué)模式不同,可分為熒光染料法和熒光探針?lè)?,常?jiàn)的熒光標(biāo)記基團(tuán)的特性見(jiàn)表1。
SYBR Green I是應(yīng)用最廣泛的一種熒光染料,能結(jié)合所有DNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長(zhǎng)的染料。在游離狀態(tài)下,SYBR Green I發(fā)出微弱的熒光,一旦與雙鏈DNA結(jié)合后,熒光大大增強(qiáng),而未結(jié)合的染料不能發(fā)射熒光信號(hào)。但是,在做染料法熒光定量PCR時(shí),要注意區(qū)分假陽(yáng)性現(xiàn)象,非特異性擴(kuò)增和引物二聚體均能結(jié)合SYBR Green I而干擾檢驗(yàn)結(jié)果。目前的熒光染料除了SYBR Green I以外,還有LC Green TM1和Pico Green等新型熒光染料[4]。
目前應(yīng)用最廣泛的熒光探針是TaqMan水解探針,探針上5′端和3′端分別標(biāo)記了1個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和1個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。在反應(yīng)初始時(shí),系統(tǒng)激發(fā)供體而產(chǎn)生的熒光信號(hào)被
鄰近的淬滅基團(tuán)吸收,所以此時(shí)檢測(cè)不到供體熒光信號(hào);而
當(dāng)PCR過(guò)程中聚合酶擴(kuò)增到探針結(jié)合模版的位點(diǎn)時(shí),其5′~3′核酸外切酶酶切探針5′端的報(bào)告基團(tuán),此時(shí)游離的報(bào)告基團(tuán)遠(yuǎn)離淬滅基團(tuán),產(chǎn)生熒光信號(hào)而被檢測(cè)到。該水解探針?lè)ㄖ?,一旦?bào)告基團(tuán)水解離開(kāi)淬滅基團(tuán),就一直游離于反應(yīng)體系中可被檢測(cè),所以檢測(cè)的是累積熒光,信號(hào)不可逆。而雜交探針FRET不同,上游探針的3′端和下游探針的5′端分別標(biāo)記供體熒光基團(tuán)和受體熒光基團(tuán),復(fù)性時(shí)2條特異性探針雜交到模板上,相互靠近而產(chǎn)生熒光信號(hào);升溫變性時(shí)2條特異性探針又遠(yuǎn)離模板,此時(shí)供體和受體熒光基團(tuán)分開(kāi),熒光信號(hào)消失,所以利用該法檢測(cè)到的是實(shí)時(shí)信號(hào),而非累積信號(hào),信號(hào)可逆。除了以上兩者以外,熒光探針還有TaqMan MGB探針、分子信標(biāo)等[5]。
2PCR在物種源性成分鑒定方面的應(yīng)用
2.1利用PCR進(jìn)行物種源性成分分析
動(dòng)物源性分析時(shí)主要針對(duì)其各自線粒體基因保守序列設(shè)計(jì)引物,優(yōu)化反應(yīng)體系,建立分析方法。于衛(wèi)霞等[6]利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)對(duì)魚(yú)種進(jìn)行鑒定。試驗(yàn)人員從基因庫(kù)中找到8種海魚(yú)以及其他12種參照海魚(yú)魚(yú)種的線粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞基III基因(MT-co3),通過(guò)比對(duì)分析自行設(shè)計(jì)通用引物進(jìn)行DNA擴(kuò)增,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆、測(cè)序,然后根據(jù)生物信息軟件提供的限制性內(nèi)切酶酶切信息,篩選出Nla III和Hinf I 2種內(nèi)切酶組合體系,對(duì)10種海魚(yú)的PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切分析,獲得了各種魚(yú)類特異的酶切片段圖譜。試驗(yàn)結(jié)果表明,引物MT-co3對(duì)10種海洋魚(yú)的通用性較高,經(jīng)測(cè)序分析發(fā)現(xiàn),選用MT-co3基因作為分子標(biāo)記鑒定的魚(yú)種與形態(tài)學(xué)鑒定的魚(yú)種相似度不低于99%,同時(shí)試驗(yàn)獲得了基因庫(kù)中未找到的另外2種海魚(yú)的MT-co3全序列。通過(guò)酶切圖譜分析,使用單一的Hinf I或Nla III酶切都不能將10種海魚(yú)進(jìn)行區(qū)分,但依次使用Hinf I或Nla III 2種酶酶切,可將這10種海魚(yú)進(jìn)行有效區(qū)分。該試驗(yàn)方法首次采用MT-co3基因作為分子標(biāo)記,采用PCR技術(shù)進(jìn)行魚(yú)類種屬的鑒別,結(jié)合適宜的限制性內(nèi)切酶酶切分析技術(shù),可對(duì)10種海魚(yú)進(jìn)行種源性鑒別。
尚柯等[7]通過(guò)在基因庫(kù)中分析和比對(duì)豬、牛、羊的線粒體基因保守序列,確定了針對(duì)不同物種線粒體cyt-b基因中的特定片段,分別設(shè)計(jì)相同的上游引物和具有各自物種特異性的下游引物。通過(guò)多次優(yōu)化反應(yīng)體系及引物配比,確定多重PCR試驗(yàn)條件,所擴(kuò)增得到的豬、牛、羊的基因片段大小分別為384、258和318 bp,通過(guò)基因片段大小差異對(duì)樣品肉的源性進(jìn)行鑒定。同時(shí),他們還進(jìn)行了檢測(cè)限試驗(yàn),通過(guò)設(shè)定不同的模板比例,最終確定該多重PCR體系對(duì)豬牛肉、豬羊肉混合樣品的最低檢測(cè)限可達(dá)10%。該研究確定了針對(duì)以上3種動(dòng)物的共同序列及其特異性序列,建立了這3類常見(jiàn)畜肉的特異性檢測(cè)引物體系,能有效進(jìn)行豬、牛、羊源性分析。
曲莉等[8]采用改良鹽析法和柱層析法有效提取鴨肉、雞肉、豬肉、牛肉、羊肉、馬肉和驢肉的mtDNA,通過(guò)在GenBank中下載綠頭鴨線粒體細(xì)胞色素b(AY676201.1)基因序列,進(jìn)行引物設(shè)計(jì),通過(guò)反復(fù)梯度PCR試驗(yàn),確定最佳退火溫度為62 ℃;同時(shí),以提取的7種肉類mtDNA為模板,驗(yàn)證所設(shè)計(jì)的鴨肉引物的特異性。結(jié)果表明,設(shè)計(jì)的引物僅在鴨肉模板上有明顯擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物大小為223 bp。該研究改良了2種DNA提取方法,采用PCR技術(shù)對(duì)肉類產(chǎn)品中的鴨源性成分進(jìn)行鑒定,比起商品化試劑盒的提取更能縮短提取時(shí)間、降低試驗(yàn)成本。
國(guó)外在這方面的研究比國(guó)內(nèi)開(kāi)展得更早,如Tartaglia等[9]根據(jù)牛線粒體DNA中的特異性序列設(shè)計(jì)引物,通過(guò)試驗(yàn)后建立了適用于飼料中牛源性成分的檢測(cè)方法,該方法靈敏度可達(dá)0.125%。Arslan等[10]以經(jīng)烹飪、蒸烤、壓力等處理過(guò)的牛肉制品為研究對(duì)象,經(jīng)試驗(yàn)證明經(jīng)水烹飪過(guò)后的牛肉制品仍可提取其線粒體DNA片段,后經(jīng)PCR擴(kuò)增可以對(duì)其牛源性成分進(jìn)行鑒別,因此以牛線粒體DNA為模板,采用PCR技術(shù)可以對(duì)經(jīng)水烹飪后的牛肉制品進(jìn)行牛源性分析。
綜上所述,采用PCR技術(shù)可對(duì)魚(yú)類、畜肉、禽肉、熟肉制品和飼料等進(jìn)行肉源性分析,方法檢出限、靈敏度均能滿足要求。但該方法后續(xù)均需進(jìn)行凝膠電泳,并對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行成像分析,使用試劑多、耗時(shí)長(zhǎng),不能實(shí)時(shí)檢測(cè),對(duì)日常監(jiān)督檢驗(yàn)要求來(lái)說(shuō)顯得較為冗長(zhǎng)滯后。
2.2利用熒光定量PCR進(jìn)行物種源性成分分析熒光定量PCR主要采用熒光染料或者標(biāo)記各種不同熒光基團(tuán)及熒光淬滅基團(tuán)的探針來(lái)實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)。
楊麗霞等[11]根據(jù)鴨線粒體基因序列的位點(diǎn)差異設(shè)計(jì)特異性引物,采用SYBR Green I染料,通過(guò)溶解曲線分析,建立熒光定量PCR檢測(cè)方法。試驗(yàn)以鴨肉、牛肉混合樣品為試驗(yàn)對(duì)象,結(jié)果表明,試驗(yàn)針對(duì)鴨線粒體基因設(shè)計(jì)的引物特異性較好,擴(kuò)增試驗(yàn)中僅鴨線粒體DNA有擴(kuò)增,其Ct值為12.82,而牛線粒體DNA未擴(kuò)增;鴨基因組檢測(cè)靈敏度為1 pg DNA;溶解曲線試驗(yàn)顯示,鴨DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的溶解溫度為79.15 ℃,可以有效區(qū)分目的片段、非特異性擴(kuò)增和引物二聚體。試驗(yàn)將牛肉、鴨肉以9∶1的比例混合后在100 ℃加熱15 min,采用試驗(yàn)中建立的方法進(jìn)行檢測(cè),鴨肉DNA擴(kuò)增Ct值為26.99,產(chǎn)物溶解溫度亦為79.15 ℃,說(shuō)明該方法也適用于熟鴨肉的檢測(cè),靈敏度及特異性均可滿足實(shí)驗(yàn)室鴨肉源性成分鑒定。
趙冉[12] 選取GenBank上已發(fā)表的豬、牛源性mtDNA D-loop序列,在NCBI中進(jìn)行比對(duì)后,分別針對(duì)豬、牛線粒體DNA種間保守基因,設(shè)計(jì)特異性引物與TaqMan探針、豬探針報(bào)告熒光基團(tuán)ROX、熒光淬滅基團(tuán)BHQ2;牛探針報(bào)告熒光基團(tuán)HEX、熒光淬滅基團(tuán)BHQ1。通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化篩選,利用以上2種發(fā)射波長(zhǎng)相差較大的報(bào)告熒光基團(tuán),在ROX、HEX熒光通道搜集信號(hào),建立了豬、牛雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)方法。試驗(yàn)通過(guò)對(duì)16種不同來(lái)源的動(dòng)物源性核酸進(jìn)行檢測(cè),確定該方法所設(shè)計(jì)的豬牛引物的特異性,同時(shí)對(duì)豬、牛DNA模板進(jìn)行梯度稀釋,確定其方法最低檢出限均達(dá)10-5。試驗(yàn)對(duì)不同狀態(tài)的樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,建立的雙重?zé)晒釶CR法還適用于蒸煮、腌制肉制品、動(dòng)物血液、奶制品及飼料中豬牛源性分析檢測(cè)。
史艷宇等[13]以鴨線粒體基因全序列為靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物和探針,經(jīng)Blast軟件對(duì)相似序列搜索后,篩選出最優(yōu)且與常見(jiàn)畜禽肉無(wú)交叉反應(yīng)的引物及探針,所用到的探針為TaqMan水解探針,報(bào)告熒光基團(tuán)FAM,熒光淬滅基團(tuán)TAMRA,采用熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)分別用羊肉、牛肉、雞肉、鵝肉、豬肉、兔肉、馬肉和鹿肉等對(duì)引物進(jìn)行特異性試驗(yàn),同時(shí),用羊肉DNA溶液對(duì)鴨肉DNA進(jìn)行梯度稀釋,再進(jìn)行鴨肉檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)。通過(guò)優(yōu)化PCR反應(yīng)體系,最終建立了鴨源性成分檢測(cè)方法,該方法具有較強(qiáng)特異性,所設(shè)計(jì)的引物及探針對(duì)鴨肉的檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.1 μg/kg,并且高濃度羊肉成分的存在對(duì)鴨肉靈敏度檢測(cè)沒(méi)有影響。
范麗麗等[14]以雞線粒體細(xì)胞色素b為目的基因,設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan水解探針,探針的報(bào)告熒光基團(tuán)FAM,熒光淬滅基團(tuán)TAMRA。利用所設(shè)計(jì)的特異性引物對(duì)雞DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增,所得產(chǎn)物片段為110 bp。在特異性試驗(yàn)中,試驗(yàn)人員將雞、豬、牛、羊、鴨、火雞、鵪鶉和鴿子等DNA模板進(jìn)行PCR反應(yīng),結(jié)果顯示設(shè)計(jì)的引物探針體系只對(duì)雞DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增,Ct值為35,其他源性成分均未有效擴(kuò)增;靈敏度試驗(yàn)顯示該方法最低可檢測(cè)3.5 pg/μL雞肉DNA,可用于對(duì)食品中雞源性成分的摻假鑒別。
綜上,熒光定量PCR目前較常用的熒光基團(tuán)較集中于SYBR Green I和TaqMan探針,SYBR Green I信號(hào)可逆,利用該特性結(jié)合溶解曲線分析可實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè);TaqMan探針上標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)可根據(jù)檢測(cè)通道不同分別進(jìn)行設(shè)計(jì),在同一反應(yīng)體系中加入標(biāo)記不同熒光基團(tuán)的探針也可實(shí)現(xiàn)多通道檢測(cè),因此在熒光定量PCR檢測(cè)時(shí),引物及探針的設(shè)計(jì)至關(guān)重要,在今后的工作中有待更深入的探索試驗(yàn)。在已發(fā)表的文獻(xiàn)中,利用雙雜交探針FRET、分子信標(biāo)及LUX引物在源性鑒定分析方面應(yīng)用還較少。使用雜交探針在探針合成時(shí)標(biāo)記較為復(fù)雜,且雜交時(shí)探針不能完全與模板結(jié)合,穩(wěn)定性較差;而LUX引物在合成時(shí)不需要專門設(shè)計(jì)探針,其特異性要弱于探針技術(shù),但非特異性擴(kuò)增或引物二聚體沒(méi)有影響,其特異性又優(yōu)于SYBR Green I。鑒于各染料、探針及引物的特性不同,在食品源性成分分析鑒定方面的應(yīng)用還有待更深入的研究與探索。
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2017年
3前景與展望
利用PCR、熒光定量PCR技術(shù),從分子角度進(jìn)行物種源性分析檢測(cè),是當(dāng)前食品安全檢測(cè)的新興行業(yè),近年來(lái)發(fā)展尤為迅速。PCR技術(shù)在源性成分分析時(shí),針對(duì)目標(biāo)DNA設(shè)計(jì)特異性引物以實(shí)現(xiàn)DNA模板的擴(kuò)增;多重檢測(cè)時(shí),通過(guò)設(shè)計(jì)通用性的上游引物及特異性的下游引物,或在同一反應(yīng)體系中設(shè)計(jì)各自不同的上下游引物,以實(shí)現(xiàn)物種鑒定的多重快速檢測(cè)。熒光定量PCR技術(shù)以實(shí)時(shí)、快速、簡(jiǎn)捷的特性在食品源性成分鑒定方面也得到了迅速發(fā)展。除了嵌入式熒光染料的使用外, TaqMan探針的應(yīng)用最為常見(jiàn),利用標(biāo)記不同的熒光報(bào)告基團(tuán)及淬滅基團(tuán)的TaqMan探針,可實(shí)現(xiàn)多通道實(shí)時(shí)檢測(cè)。在熒光淬滅物質(zhì)設(shè)計(jì)方面,有研究者利用一種單層的、二維的碳納米材料——氧化石墨烯作為反應(yīng)時(shí)的淬滅劑,該物質(zhì)能吸附單鏈DNA,對(duì)標(biāo)記在單鏈核酸上的熒光染料具有很強(qiáng)的淬滅作用[15],這在熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用方面又開(kāi)拓了新的發(fā)展方向。由于目前檢測(cè)儀器的通道限制,多通道檢測(cè)目前多局限于雙重或三重,在今后的研究工作中,隨著熒光標(biāo)記物質(zhì)的不斷開(kāi)發(fā),相應(yīng)儀器的檢測(cè)通道會(huì)不斷增加,多重檢測(cè)必將是PCR技術(shù)發(fā)展的主要方向。
食品源性成分檢測(cè)方法的建立,通過(guò)改良DNA提取技術(shù)以提高目標(biāo)DNA提取效率,采用限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù)以實(shí)現(xiàn)物種多態(tài)性分析,優(yōu)化擴(kuò)增反應(yīng)體系及溫度條件以提高檢測(cè)靈敏度,設(shè)計(jì)不同引物、標(biāo)記熒光基團(tuán)的探針以提高檢測(cè)專一性等,這些技術(shù)在一定程度上不斷開(kāi)發(fā)PCR技術(shù)的潛力,延伸其在物種鑒定方面的發(fā)展空間。今后,通過(guò)對(duì)雙雜交探針FRET、分子信標(biāo)及LUX引物等技術(shù)研究的不斷深入,食品源性鑒定分析的方法必將朝著多元化的方向發(fā)展。
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