曲長欣+楊青

摘 要：本實驗對清熱解毒顆粒的質(zhì)量標準進行研究。含量測定方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（5：25：70）為流動相，檢測波長為277nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，連翹苷在0.05～12.8mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。鑒別方法：硅膠G薄層板，甲苯-丙酮（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，8%香草醛無水乙醇溶液與硫酸溶液（7→10）的混合液（0.5：5），在100℃加熱至斑點顏色清晰。結論：本法簡便、準確，可作為清熱解毒顆粒的質(zhì)量標準。

關鍵詞：清熱解毒顆粒；質(zhì)量標準；研究

清熱解毒顆粒由金銀花、連翹、水牛角、黃連、地黃、知母、玄參等組成。清熱解毒顆粒具有清熱解毒，養(yǎng)陰生津，瀉火的功效。清熱解毒顆粒常用于風熱型感冒、流行性腮腺炎及輕、中型乙型腦炎。連翹具有清熱，解毒，散結，消腫等功效。連翹主要用于溫熱、丹毒、斑疹、癰瘍腫毒、瘰疬等。連翹具改善學習記憶障礙、舒張血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解熱、防護耳毒性等廣泛的藥理作用[1-5]。《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“主寒熱，鼠痿，瘰疬，癰腫惡瘡，癭瘤，結熱。”知母，性苦寒，具有有滋陰降火、潤燥滑腸、利大小便之效。《藥性論》記載：“主治心煩躁悶，骨熱勞往來，生產(chǎn)后蓐勞，腎氣勞，憎寒虛損，患人虛而口干，加而用之?！北緦嶒瀸η鍩峤舛绢w粒的質(zhì)量標準進行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：半自動點樣儀LINOMAT Ⅳ（瑞士CAMAG）；756PC紫外可見分光光度計（四川匯巨儀器設備有限公司）；EX1600高效液相色譜儀（上海棱譜儀器儀表有限公司）；FR124CN萬分之一電子天平（安慶昌嘉電子產(chǎn)品有限公司）；HWY-D28恒溫低溫水?。ㄉ虾Ｓ鹜▋x器儀表廠）；雙槽展開缸 PF 562C（瑞士CAMAG）；DHG-9240A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海和呈儀器制造有限公司）；實驗室高純水機（上海技舟化工科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所），菝葜皂苷元對照品（中國藥品生物制品檢定所）。

1.4 試劑：甲醇（江蘇聯(lián)海生物科技有限公司）、乙腈（廣州市西隴化工有限公司）、香草醛（深圳市永熙化工有限公司）、苯（北京亞太龍興化工有限公司）、硫酸（上海海曲化工有限公司）、乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）、鹽酸（北京亞太龍興化工有限公司）、甲苯（廣州市西隴化工有限公司）、丙酮（北京亞太龍興化工有限公司）、無水乙醇（廣州市西隴化工有限公司）。

1.5 試藥：清熱解毒顆粒

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：乙腈-甲醇-水（5：25：70）為流動相，檢測波長：277nm，流速：1.0ml·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按連翹苷峰計算應不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取連翹苷對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取清熱解毒顆粒適量，研細，精密稱定，加20毫升甲醇超聲提取30分鐘，過濾，蒸干濾液，殘渣加流動溶解轉移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 專屬性試驗

取金銀花、水牛角、大青葉、黃連、地黃、知母、玄參等藥材按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，按上述實驗方法檢測，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液按上述色譜條件，精密吸取20μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.65%，表明本方法精密度良好。

2.6 對照品的線性考察

精密稱取適量連翹苷對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取20μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，連翹苷在0.05～12.8mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.7 重現(xiàn)性試驗

稱取同一批的清熱解毒顆粒樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.66%，結果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 準確度試驗

取對照品適量分別精密加入清熱解毒顆粒中，按含量測定進行測定，計算回收率為99.3%，RSD為0.69%。

3 鑒別

取清熱解毒顆粒適量，加乙醇20ml，加熱回流40min后取上清液，加鹽酸1ml加熱回流1h，取提取液10ml，濃縮至約5ml，加水10ml，用苯20ml振搖提取，提取液蒸干，殘渣加苯2ml使溶解，作為供試品溶液。另取知母對照藥材2g，加乙醇20ml，加熱回流40min后取上清液，加鹽酸1ml加熱回流1h，取提取液10ml，濃縮至約5ml，加水10ml，用苯20ml振搖提取，提取液蒸干，殘渣加苯2ml使溶解，作為對照品溶液。取除知母以外藥材按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，按上述方法制成陰性對照樣品。吸取上述溶液，點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮（9：1）為展開劑，展開、取出、晾干，噴以8%香草醛無水乙醇溶液與硫酸溶液（7→10）的混合液（0.5：5），在100℃加熱至斑點顏色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性對照無干擾。

4 結論

本實驗分離效果好、方法簡便、快捷、準確、專屬性好，可用于清熱解毒顆粒中連翹苷的含量測定。樣品與知母對照藥材對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。該鑒別方法專屬性強，操作簡單，可用于清熱解毒顆粒中知母的鑒別。

參考文獻

[1]王憶杭，肖培根，劉新民.連翹酯苷對擬AD復合動物模型小鼠學習記憶的改善作用及其機制研究[J].中國實驗動物學報，2011（05）.

[2]孟祥樂，李俊平，李丹，孫習鵬，李顏，余奇，萬麗麗，郭澄.連翹的化學成分及其藥理活性研究進展[J].中國藥房，2010（43）.

[3]秦宇，張文麗，林媛媛，楊默媛.連翹化學成分與抗氧化活性研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013（10）.

[4]張杲.連翹（Forsythia suspensa）葉藥用價值及其藥用活性組分的初步研究[D].陜西師范大學，2006.

[5]歐陽輝，謝麗艷，黃小方，羅莎，楊世林.貫葉連翹的化學成分與藥理研究進展及前景展望[J].江西中醫(yī)藥，2010（07）.