張?jiān)?李海濤 劉榮梅 高繼國(guó)

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

蘇云金芽胞桿菌cry2Ab34基因的克隆、表達(dá)和殺蟲(chóng)活性分析

張?jiān)?李海濤 劉榮梅 高繼國(guó)

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

旨在對(duì)蘇云金芽胞桿菌cry2Ab34基因進(jìn)行分子鑒定和生物活測(cè)定，從殺蟲(chóng)活性高的Bt BJH500 菌株中提取基因組DNA，通過(guò) PCR 法克隆得到cry2Ab34基因（GenBank 登錄號(hào)為KX357382）。這個(gè)基因序列已被國(guó)際Bt基因命名委員會(huì)正式命名為 cry2Ab34，結(jié)果顯示，對(duì)cry2Ab34基因進(jìn)行表達(dá)，獲得大小約70 kD的表達(dá)產(chǎn)物，將該基因在大腸桿菌E.coli BL21中表達(dá)之后進(jìn)行生物活性測(cè)定，結(jié)果表明對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)小菜蛾（Plutella xyllostella）和棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpa armigera）都具有一定的殺蟲(chóng)活性，其校正死亡率10 μg/mL為31.25 %，100 μg/mL為62.5 %和校正死亡率10 μg/mL為29.4%，100 μg/mL為52.9 %。

蘇云金芽胞桿菌；cry2Ab34基因；殺蟲(chóng)晶體蛋白；殺蟲(chóng)活性；小菜蛾；棉鈴蟲(chóng)

蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis，Bt）是一種能夠產(chǎn)生多種殺蟲(chóng)晶體蛋白（Cry）的土壤細(xì)菌［1，2］，其形成芽胞的過(guò)程中，形成一個(gè)或多個(gè)伴胞晶體（parasporal crystal）。大多數(shù)這種伴胞晶體具有殺蟲(chóng)活性，所以又稱殺蟲(chóng)晶體蛋白（ICPs）或 δ-內(nèi)毒素（δ-endotoxin）。該菌具有高效、對(duì)人畜和環(huán)境安全且對(duì)標(biāo)靶寄主特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，是化學(xué)殺蟲(chóng)劑的重要替代品之一［3］，已成為目前世界上開(kāi)發(fā)產(chǎn)量最大、時(shí)間最長(zhǎng)、應(yīng)用最廣的生物殺蟲(chóng)劑，總占生物殺蟲(chóng)劑量的90% 以上，已有60多個(gè)國(guó)家登記了120多個(gè)品種，期間取得了巨大的經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和社會(huì)效益［4］。Bt 蛋白殺蟲(chóng)活性對(duì)非靶標(biāo)生物無(wú)害，因此被制成生物殺蟲(chóng)劑廣泛地應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、林業(yè)以及衛(wèi)生害蟲(chóng)的防治［5，6］。Bt的cry基因已成功轉(zhuǎn)入很多主要農(nóng)作物包括玉米、棉花、番茄等，使它們具有抗蟲(chóng)特性［7-10］。原理是因?yàn)镃ry 晶體溶解后，原毒素由昆蟲(chóng)中腸蛋白酶降解成約60 kD、具有蛋白酶抗性的活性毒素［11］，而多數(shù)鱗翅目昆蟲(chóng)中腸的蛋白酶為胰蛋白酶類(lèi)［11］或胰凝乳蛋白酶類(lèi)［12］。所以，原毒素的激活過(guò)程與殺蟲(chóng)特異性有一定的關(guān)系。如Cry1Ab7用鱗翅目昆蟲(chóng)的中腸液激活后對(duì)鱗翅目昆蟲(chóng)表現(xiàn)出活性；蚊子的中腸液激活，則對(duì)雙翅目昆蟲(chóng)表現(xiàn)出殺蟲(chóng)活性［13］。有發(fā)現(xiàn)Cry1 類(lèi)殺蟲(chóng)晶體蛋白對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)具有特異毒性，在微生物和植物基因工程中得到了廣泛的應(yīng)用，但其存在著殺蟲(chóng)譜狹窄、昆蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性等問(wèn)題［14，15］。而Cry2類(lèi)蛋白在結(jié)構(gòu)和殺蟲(chóng)機(jī)制方面不同于Cry1 類(lèi)，如 Cry2Aa既對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)有毒性又能殺害雙翅目害蟲(chóng)［16］。

有研究發(fā)現(xiàn)cry2類(lèi)基因可以編碼對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)有活性的毒素蛋白，Cry2A毒素蛋白的大小約65-70 kD，其殺蟲(chóng)活性范圍寬。Cry2Aa［17］、Cry2Ag［18］對(duì)鱗翅目和雙翅目的幼蟲(chóng)都有有毒性。而已報(bào)道Cry2Ab［17］和Cry2Ac［19］只對(duì)鱗翅目有毒性。此外，還報(bào)道了Cry1A不與Cry2A分享膜上的結(jié)合位點(diǎn)［20］，因此，新分離的蛋白具有不同的序列，具有更高的毒性和更廣泛的殺害蟲(chóng)范圍。目前的研究表明，Cry2Al1有廣闊的殺蟲(chóng)活性，對(duì)斜紋夜蛾（LC50= 2.448 μg/mL）和棉鈴蟲(chóng)（LC50= 3.374 μg/mL）都有一定的殺蟲(chóng)活性。據(jù)報(bào)道，Cry2Aa14蛋白對(duì)斜紋夜蛾的殺蟲(chóng)活性LC50為694 ng/cm2和122 ng/cm3［21］，而且Cry2Aa蛋白有71.4%的殺蟲(chóng)死亡率和濃度在81%-99%時(shí)，有嚴(yán)重體重抑制作用，進(jìn)行1周殺蟲(chóng)活性測(cè)定，對(duì)棉鈴蟲(chóng)的幼蟲(chóng)體重抑制作用為2.3 μg/μL［22］。據(jù)相關(guān)的研究表明Cry2Ab毒素蛋白基因單獨(dú)轉(zhuǎn)化植物表達(dá)載體PSR784d，為進(jìn)一步轉(zhuǎn)化植物和研究其單價(jià)轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲(chóng)性奠定了基礎(chǔ)［23］。Cry2Ab，Cry2Ae，Cry2Af蛋白僅對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)有活性，其中Cry2Ab蛋白對(duì)棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpa armigera）、大豆食心蟲(chóng)（Leguminivora glycinivorella）、小菜蛾（Plutella xylostella）和水稻二化螟（Chilo suppressalis）等鱗翅目害蟲(chóng)具有高毒力［24］。基于以上研究背景，本研究采用分離Bt菌株進(jìn)行高活性的篩選與基因鑒定的方法，來(lái)發(fā)掘?qū)π〔硕旰兔掴徬x(chóng)具有高效殺蟲(chóng)活性的菌株， 為解決農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)的防治提供了新的微生物資源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和質(zhì)粒 Bt BJH500菌株由本實(shí)驗(yàn)室分離得到，表達(dá)菌株E. coli BL21與載體 pEB 由本實(shí)驗(yàn)室自己保存。

1.1.2 培養(yǎng)基 液體LB 培養(yǎng)基：胰蛋白胨5 g、酵母提取物2.5 g、氯化鈉 5 g、蒸餾水 500 mL、pH7.0，121℃高溫高壓滅菌20 min。 固體 LB 培養(yǎng)基：在液體 LB 培養(yǎng)基中加 13 g/L 的瓊脂。固體 1/2LB 培養(yǎng)基：胰蛋白胨5 g、酵母提取物2.5 g、氯化鈉5 g、瓊脂13 g、蒸餾水1 000 mL，pH7.0，121℃高溫高壓滅菌20 min。

KOD酶、Taq DNA聚 合 酶、pMD19-T Simple Vector、Amp、X-Gal、IPTG、DNA Marker、蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)均購(gòu)自TaKaRa公司。質(zhì)粒DNA提取試劑盒、膠回收試劑盒購(gòu)自美國(guó)Axygen公司。引物由金維智生物有限公司（北京）有限公司合成。分析純化學(xué)試劑均為市售。

小菜蛾和棉鈴蟲(chóng)為科云生物有限公司（河南）所提供的標(biāo)準(zhǔn)化試蟲(chóng)。

1.2 方法

1.2.1 土樣來(lái)源及Bt菌株的分離 土樣采自于中國(guó)海南地區(qū)，采用溫度法進(jìn)行Bt菌株的篩選［25］。

1.2.2 晶體形態(tài)觀察 將 Bt 菌株BJH500 在1/2LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h后，將胞晶混合液滴于載玻片上，涂抹均勻，烘干固定，石炭酸復(fù)紅染液染色3 min，清水沖洗，100× 油鏡進(jìn)行鏡檢［26］。

1.2.3 Bt基因組的提取 分離純化后的Bt菌在固體LB培養(yǎng)基上30℃過(guò)夜培養(yǎng)12 h，采用張彥蕊等［27］的方法提取基因組。

1.2.4 cry2Ab基因的克隆和測(cè)序 將提取基因組DNA，使用引物上游序列（5'-ATGAATAGTGTATTGAATAGCGGAA-3'）和下游序列（5'-TTAATAAAGTGG TGAAATATTAGTT-3'）擴(kuò)增cry2Ab34基因，引物設(shè)計(jì)基于cry2Ab的全長(zhǎng)序列。PCR 擴(kuò)增時(shí)使用 KOD高保真酶，PCR 反應(yīng)程序：94℃ 3 min；94℃ 30 s，51.9℃ 30 s，68℃ 2 min，30個(gè)循環(huán)；最后 68℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物的回收純化參照Axygen公司的膠回收試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。將回收的PCR 產(chǎn)物分別連接pMD19-T Simple Vector克隆載體和pEB表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入E. coli BL21中［28］，篩選陽(yáng)性克隆進(jìn)行PCR驗(yàn)證，以便確認(rèn)其是否連有目的片段。提取連接正確的重組細(xì)菌的質(zhì)粒送至吉林省庫(kù)美生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.2.5 基因誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE 分析 誘導(dǎo)表達(dá)重組的大腸桿菌菌株，誘導(dǎo)條件為：IPTG 1 mg/mL，16℃，160 r/min，震蕩培養(yǎng)12 h。將誘導(dǎo)好的培養(yǎng)液在8 000 r/min 的條件下離心5 min 并收集菌體，之后用預(yù)冷的20 mmol/L Tris-HCl（pH8.0）懸浮菌體洗兩次。最后用 5 mL 20 mmol/L Tris-HCl（pH8.0）懸浮菌體，并在冰水混合物中超聲波破碎菌體，超聲時(shí)工作3 s，間歇3 s，將破碎完全的菌液離心取上清和沉淀以備實(shí)驗(yàn)用［29］。

1.2.6 蛋白濃度的測(cè)定 參照蛋白定量試劑盒的使用手冊(cè)，以牛血清蛋白（BSA）為標(biāo)準(zhǔn)蛋白制作蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而測(cè)定上述參與蛋白SDS-PAGE定量分析的目的蛋白的濃度。再結(jié)合ImageMaster VDS軟件對(duì)目的蛋白所占比例的分析結(jié)果，計(jì)算出目的蛋白的濃度。

1.2.7 室內(nèi)生物活性的測(cè)定 小菜蛾：量取10 mL待測(cè)蛋白溶液加入滅菌的50 mL離心管中，加入0.1%家用洗滌劑，充分混合均勻；選取新鮮的甘藍(lán)葉片，均勻地浸入上述待測(cè)樣品溶液中，浸泡20 s左右，使其表面完全沾濕。將毛筆用70%的乙醇處理后，再用無(wú)菌水沖洗，然后用毛筆輕輕的接入20頭幼蟲(chóng)放入每個(gè)培養(yǎng)皿中，每個(gè)濃度梯度設(shè)3個(gè)重復(fù)，蓋緊防止幼蟲(chóng)逃逸。放置25℃光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，用光周期為16∶8，在培養(yǎng)箱中放置一水盆以調(diào)節(jié)濕度，進(jìn)行每天觀察，24、48、72 h后調(diào)查死、活蟲(chóng)數(shù)，計(jì)算死亡率。

棉鈴蟲(chóng)：稱10 g人工飼料置于滅菌培養(yǎng)皿中，加入2 mL待測(cè)樣品稀釋液，充分與飼料攪拌混勻，放入室溫中，用毛筆分裝于培養(yǎng)板中，接入生理狀況一致的棉鈴蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)，每個(gè)接20頭，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，用Tris-HCl處理飼料作為對(duì)照，置于26℃光照培養(yǎng)箱中保持其適當(dāng)濕度，培養(yǎng)7 d后調(diào)查死、活蟲(chóng)數(shù)，并檢測(cè)幼蟲(chóng)取食情況。

2 結(jié)果

2.1 晶體形態(tài)觀察

Bt BJH500菌株產(chǎn)生的晶體形態(tài)，在光學(xué)顯微鏡（圖 1）下箭頭所示，從左到右依次為芽胞和晶體。

圖1 光學(xué)顯微鏡下Bt BJH500的晶體形態(tài)

2.2 cry2Ab34基因的克隆和序列分析

PCR 擴(kuò)增結(jié)果（圖2）所示，將測(cè)序結(jié)果提交到 GenBank，獲得登錄號(hào)為KX357382。該基因序列已被國(guó)際Bt基因命名委員會(huì)正式命名為cry2Ab34。cry2Ab34序列全長(zhǎng)為1 902 bp，編碼633個(gè)氨基酸殘基。cry2Ab34與其他來(lái)源于GenBank報(bào)道的Bt cry2Ab34基因有99% 的相似度。

圖2 cry2Ab34全長(zhǎng)基因擴(kuò)增結(jié)果

2.3 Cry2Ab34蛋白結(jié)構(gòu)分析

由DNA序列推導(dǎo)的氨基酸序列結(jié)果，Cry2Ab34蛋白由633個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量為158 921.4。其中亮氨酸 Leu（L）、天冬酰胺 Asn（N）、絲氨酸 Ser（S）、蘇氨酸Thr（T）較多，分別為10.3%、11.4% 、9.0%和8.2% 。該蛋白等電點(diǎn) pH 5.01，為弱酸性蛋白。通過(guò)NCBI Conserved Domain對(duì)cry2Ab34基因分析結(jié)果（圖3）所示，該基因所編碼的蛋白的 Domain I由N端第142-786位共644個(gè)氨基酸組成，Domain II由第799-1 416 位，共617個(gè)氨基酸組成，Domain III由第 1 480-1 884 位，共404個(gè)氨基酸組成。故Cry2Ab34蛋白的活性區(qū)域估計(jì)在N端的142-1 884個(gè)氨基酸附近。Cry2家族含有芽胞桿菌產(chǎn)生的殺蟲(chóng)毒素，在芽胞形成過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生晶體蛋白，其蛋白質(zhì)的N末端和C末端的延伸部分會(huì)裂解出一些成分，一旦激活內(nèi)毒素結(jié)合到腸上皮細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞裂解死亡。該激活區(qū)域δ-內(nèi)毒素是由3個(gè)結(jié)構(gòu)域，N末端的螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域插入膜的孔隙形成過(guò)程中，第2個(gè)和第3個(gè)區(qū)域參與受體結(jié)合，結(jié)合到昆蟲(chóng)特異性受體的腸道上皮細(xì)胞中。

圖3 Cry2Ab34蛋白的保守結(jié)構(gòu)域分析

2.4 cry2Ab34在大腸桿菌中的表達(dá)

對(duì)cry2Ab34基因進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，提取蛋白并進(jìn)行SDS-PAGE 電泳檢測(cè)。結(jié)果（圖 4）顯示，表達(dá)產(chǎn)物的大小約 70 kD。以空質(zhì)粒pEB 轉(zhuǎn)入E.coli BL21菌株作為陰性對(duì)照，未發(fā)現(xiàn) 70 kD 的蛋白，說(shuō)明在大腸桿菌中成功表達(dá)Cry2Ab34蛋白。

圖4 Cry2Ab34表達(dá)蛋白SDS-PAGE電泳

2.5 生物活性分析

對(duì)在大腸桿菌中表達(dá)的Cry2Ab34蛋白進(jìn)行對(duì)鱗翅目昆蟲(chóng)小菜蛾幼蟲(chóng)和棉鈴蟲(chóng)幼蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性測(cè)定。利用20 mmol/L Tris-Cl溶液作為陰性對(duì)照，結(jié)果顯示對(duì)小菜蛾和棉鈴蟲(chóng)都有一定的毒力。表達(dá)活性蛋白對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)小菜蛾生測(cè)的校正死亡率為10 μg/mL為31.25 %，100 μg/mL為62.5 %。棉鈴蟲(chóng)的校正死亡率為10 μg/mL為29.4%，100 μg/mL為52.9%（表1）。

表1 Cry2Ab34蛋白濃度對(duì)供試?yán)ハx(chóng)毒力的校正死亡率

3 討論

目前，對(duì)Bt新基因的發(fā)掘是我國(guó)的重點(diǎn)研究項(xiàng)目，并多年致力于研發(fā)轉(zhuǎn)基因植物，因此充分發(fā)掘Bt菌株新基因資源是一項(xiàng)重要工作。由于土壤成分、酸堿性、含水量和植被分布情況不同，對(duì)蘇云金芽胞桿菌在土壤中的分布都存在影響，其沙壤中匱乏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)會(huì)限制 Bt的生存，與之相反，植被覆蓋率高、營(yíng)養(yǎng)豐富的土壤則有利于 Bt分布。此外，Bt 的分布也受氣候的影響，熱帶、亞熱帶土壤 Bt 分布［30］。蘇云金芽胞桿菌（Bt）菌株可以從不同的棲息地區(qū)分離出來(lái)，得到的Bt cry基因表達(dá)的蛋白有著不同的毒力和殺蟲(chóng)譜［31］，因此其成功的應(yīng)用于生物殺蟲(chóng)劑中。但隨著B(niǎo)t基因在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物中應(yīng)用的不斷擴(kuò)大，Bt抗蟲(chóng)基因在農(nóng)田應(yīng)用過(guò)程中毒性不強(qiáng)、殺蟲(chóng)譜窄、持效期不長(zhǎng)、害蟲(chóng)易產(chǎn)生抗藥性等問(wèn)題逐漸顯現(xiàn)［32］，cry基因編碼的晶體蛋白均在不同程度上引起昆蟲(chóng)抗藥性的產(chǎn)生［33］。本研究克隆了cry2Ab基因，該基因表達(dá)的Cry2Ab34蛋白是對(duì)小菜蛾有一定殺蟲(chóng)活性的毒素蛋白。對(duì)Cry2Ab34蛋白生物信息學(xué)分析，其中亮氨酸 Leu（L）、天冬酰胺 Asn（N）、絲氨酸 Ser S）、蘇氨酸Thr（T）較多，分別為10.3% 、11.4% 、9.0%和8.2%。可能是與Cry2Ab34蛋白的活性有相關(guān)性。對(duì)Cry2Ab34蛋白的跨膜區(qū)域分析發(fā)現(xiàn)，親水域與疏水域是相互交替的。Cry2Ab34蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析，其中含有3個(gè)結(jié)構(gòu)域。Bt菌株和產(chǎn)品數(shù)量還相對(duì)較少，還需深入研究其殺蟲(chóng)分子機(jī)理，同時(shí)擴(kuò)大其殺蟲(chóng)譜測(cè)定，尤其是對(duì)不同鱗翅目害蟲(chóng)的毒性篩選，并進(jìn)行田間防治劑型及應(yīng)用方式的研究，將其應(yīng)用到實(shí)踐中。

有研究從玉米田中篩選出cry2+cry9 復(fù)合基因型，對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性研究及分子鑒定，發(fā)現(xiàn)其對(duì)3種不同供試鱗翅目害蟲(chóng)幼蟲(chóng)的毒力差異顯著，僅對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)具有高毒力，對(duì)黏蟲(chóng)和斜紋夜蛾幼蟲(chóng)毒力不明顯［34］，而本研究中的實(shí)驗(yàn)菌株BJH500含有一種新的cry2基因，其對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)的高毒力因素還需對(duì)其基因進(jìn)行克隆、表達(dá)研究來(lái)進(jìn)一步闡明。下一步工作需要對(duì)其基因進(jìn)行更深入的研究，來(lái)確定其基因表達(dá)特性。蘇云金芽胞桿菌的殺蟲(chóng)活性主要取決于其晶體蛋白的種類(lèi)，而在蛋白序列中N端序列決定其殺蟲(chóng)活性的多樣性［35］。研究發(fā)現(xiàn)的Cry2A新毒素蛋白與已知的晶體蛋白序列的不同主要位于其N(xiāo)端中，可能會(huì)導(dǎo)致其殺蟲(chóng)活性和殺蟲(chóng)譜的變化。在以往研究中，Cry2A毒素蛋白對(duì)鱗翅目、雙翅目多種害蟲(chóng)具有殺蟲(chóng)活性［36］。因此，在今后研究過(guò)程中可以當(dāng)增加生測(cè)試蟲(chóng)的范圍，以擴(kuò)大殺蟲(chóng)譜，為基因工程提供有益的基因資源，為生物制劑的開(kāi)發(fā)提供研究材料。

4 結(jié)論

本研究從Bt BJH500 菌株中克隆得到cry2Ab34基因，基因序列全長(zhǎng)為1 902 bp，編碼 633個(gè)氨基酸殘基，分子量約為70 kD，GenBank 登錄號(hào)為KX357382。該基因序列已被國(guó)際Bt基因命名委員會(huì)正式命名為cry2Ab34，將該基因在大腸桿菌E.coli BL21中表達(dá)，表達(dá)的Cry2Ab34蛋白對(duì)鱗翅目小菜蛾和棉鈴蟲(chóng)具有一定的殺蟲(chóng)活性，且濃度越大，殺蟲(chóng)活性越高。

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（責(zé)任編輯 狄艷紅）

Cloning，Expression，and Insecticidal Activities of Gene cry2Ab34 from Bacillus thuringiensis

ZHANG Yue LI Hai-tao LIU Rong-mei GAO Ji-guo
（College of Life Science，Northeast Agricultural University，Harbin 150030）

In order to identify and detect insecticidal activities from Bacillus thuringiensis strain，the genomic DNA was extracted from the strain Bt BJH500 with high insecticidal activity，from which the insecticidal gene cry2Ab34（GenBank accession number：KX357382）was cloned by PCR. The gene was designated as cry2Ab34 by International Gene Nomenclature Committee of Bt. Gene cry2Ab34 was expressed and the weight of expressed product was approximate 70 kD. The gene was expressed in Escherichia coli BL21 for the determination of biological activity，results showed that this gene presented certain insecticidal activity to Plutella xyllostella and Helicoverpa armigera of Lepidoptera pests，the corrected mortality of 10 μg/mL was 31.25%，of 100 μg/mL was 62.5 %，of 10 μg/mL was 29.4 %，and of 100 μg/mL was 52.9 %.

Bacillus thuringiensis；gene cry2Ab34；insecticidal crystal protein；insecticidal activity；Plutella xyllostella；Helicoverpa armigera

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.04.024

2016-09-18

轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專項(xiàng)（2014ZX0800913B-002），國(guó)家基礎(chǔ)科學(xué)人才培養(yǎng)基金資助項(xiàng)目（J1210069），國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31401812），黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（12521021）

張?jiān)?，女，碩士，研究方向：生物防治微生物功能基因的發(fā)掘、研究和利用；E-mail：1581039932@qq.com

高繼國(guó)，男，博士生導(dǎo)師，研究方向：生物大分子的分離純化，蘇云金芽胞桿菌抗性機(jī)理、生物安全性；E-mail：gaojiguo1961@ hotmail.com