胡云峰，崔 潔,雷 俠，張鴻毅

1.延安大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤科(延安716099)，2.西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外腫瘤科(西安 710077)， 3.延安大學(xué)附屬醫(yī)院婦科(延安 716099)，4.西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科(西安710077)

富含亮氨酸蛋白LRP130抗體在惡性腫瘤中的表達(dá)和臨床意義*

胡云峰1，崔 潔2,雷 俠3，張鴻毅4△

1.延安大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤科(延安716099)，2.西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外腫瘤科(西安 710077)， 3.延安大學(xué)附屬醫(yī)院婦科(延安 716099)，4.西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科(西安710077)

目的：探討富含亮氨酸蛋白LRP130抗體(LRPPRC)在胃癌、宮頸癌和前列腺癌的表達(dá)和臨床意義。方法：應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)120例胃癌、80例宮頸癌和198例前列腺癌組織中LRPPRC的表達(dá)；分析LRPPRC的表達(dá)和臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果：胃癌和正常胃組織LRPPRC的高表達(dá)率分別為71.7% (86/120)和 21.7% (13/60)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；宮頸癌和正常宮頸組織LRPPRC的高表達(dá)率分別為76.3% (61/80)和27.5% (11/40)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；前列腺癌和前列腺增生組織LRPPRC的高表達(dá)率分別為61.6% (122/198)和18.0% (18/100)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。LRPPRC的高表達(dá)與前列腺癌患者的Gleason評(píng)分、血清PSA水平、雄激素阻斷治療后PSA下降水平和轉(zhuǎn)移部位的數(shù)量相比呈顯著正相關(guān) (P<0.05)。結(jié)論：惡性腫瘤組織LRPPRC表達(dá)增高；晚期前列腺癌LRPPRC的高表達(dá)預(yù)示惡性程度高和多發(fā)轉(zhuǎn)移。

@LRPPRC

目前，全球惡性腫瘤的發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)逐年上升的特點(diǎn)，在我國(guó)，惡性腫瘤的發(fā)病率在40歲以后呈現(xiàn)快速上升的趨勢(shì)，高峰發(fā)病年齡為80歲[1-2]。惡性腫瘤如果早期被發(fā)現(xiàn)，手術(shù)是主要治療方法，治療失敗和患者死亡的主要原因是局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[3]。研究新型的分子生物學(xué)標(biāo)志物，明確惡性腫瘤的分子分型，并根據(jù)分子分型來(lái)判斷預(yù)后并確定治療方案，對(duì)于改善惡性腫瘤的預(yù)后，具有十分重要的意義。

線粒體自噬的失調(diào)在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[4]。富含亮氨酸的蛋白抗體[LRPPRC (LRP 130)]是PPR家族的主要成員之一，在哺乳動(dòng)物中，LRPPRC主要定位于線粒體，在線粒體自噬中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用[5]。本研究通過(guò)檢測(cè)前列腺癌、胃癌和宮頸癌組織LRPPRC的表達(dá)，并分析LRPPRC與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系，探討其是否能夠作為惡性腫瘤的分子生物標(biāo)志物判斷預(yù)后。

材料與方法

1 組織標(biāo)本 收集2013年1月至2015年1月延安大學(xué)附屬醫(yī)院胃腺癌組織標(biāo)本120例，和正常胃組織標(biāo)本60例；2005年1月至2011年8月延安大學(xué)附屬醫(yī)院和西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院晚期前列腺癌組織198例，和前列腺增生組織100例；收集2007年1月至2009年1月延安大學(xué)附屬醫(yī)院宮頸鱗癌組織標(biāo)本80例，和正常宮頸組織標(biāo)本40例?；颊吣挲g26 ～89歲，中位年齡49歲。

2 主要試劑 LRPPRC小鼠抗人單克隆抗體購(gòu)自Abcam公司(Cambridge, United Kingdom)；二抗生物素化山羊抗小鼠IgG/兔IgG試劑盒、鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(SABC)試劑盒、DAB顯色液均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

3 免疫組化法 在60℃烘箱內(nèi)烘烤石蠟組織切片60min；然后將石蠟切片置于二甲苯溶液進(jìn)行脫蠟，在不同梯度的酒精中脫水；應(yīng)用3%過(guò)氧化氫去離子水封閉切片，放置在室溫下孵育15min；應(yīng)用高壓方式進(jìn)行熱修復(fù)；每張切片分別滴加1滴山羊血清在37℃下孵育40min；然后滴加一抗(抗人LRPPRC抗體)，在4℃冰箱中孵育過(guò)夜；放置在室溫下30min進(jìn)行復(fù)溫；滴加二抗，在37℃下孵育30min；滴加SABC，在37℃下孵育30min；應(yīng)用DAB試劑盒進(jìn)行顯色，蘇木素進(jìn)行復(fù)染。

4 結(jié)果判定 LRPPRC在胞漿表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)定義為棕黃色均勻染色。應(yīng)用陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分的和來(lái)進(jìn)行蛋白表達(dá)的分級(jí)，低表達(dá)：0-3分；高表達(dá)：≥4分。在10×20倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)評(píng)分，分別在每個(gè)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)，平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與總計(jì)數(shù)細(xì)胞之比(0:0%; 1:1%～25%; 2: 26%～50%; 3: 51%～75%; 4:>75%)。然后對(duì)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：0分, 陰性; 1+, 淡黃色; 2+, 黃色; 3+, 棕黃色[8]。采用盲法獨(dú)立閱片，由兩位病理科醫(yī)生完成。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)數(shù)資料分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 LRPPRC在惡性腫瘤組織的表達(dá) 見(jiàn)圖1。LRPPRC在細(xì)胞胞漿表達(dá)，陽(yáng)性染色為棕黃色均勻染色。胃癌和正常胃組織LRPPRC的高表達(dá)率分別為71.7% (86/120)和 21.7% (13/60)，胃癌組織LRPPRC的表達(dá)顯著高于正常胃組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；宮頸癌和正常宮頸組織LRPPRC的高表達(dá)率分別為76.3% (61/80)和27.5% (11/40)，宮頸癌組織LRPPRC的表達(dá)顯著高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；前列腺癌和前列腺增生組織LRPPRC的高表達(dá)率分別為61.6% (122/198)和18.0% (18/100)，前列腺癌組織LRPPRC的表達(dá)顯著高于前列腺增生組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

A ：胃癌組織LRPPRC高表達(dá)；B：正常胃組織LRPPRC低表達(dá); C：宮頸癌組織LRPPRC高表達(dá); D：正常宮頸組織LRPPRC低表達(dá) ；E：前列腺癌組織LRPPRC高表達(dá)；F：前列腺增生組織LRPPRC低表達(dá)

圖1 惡性腫瘤組織LRPPRC表達(dá)的免疫組化圖(蘇木素復(fù)染×100)

2 LRPPRC表達(dá)的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。LRPPRC的高表達(dá)與前列腺癌患者的Gleason評(píng)分、血清PSA水平、雄激素阻斷治療后PSA下降水平和轉(zhuǎn)移部位的數(shù)量呈顯著正相關(guān)性(P<0.05)，而與年齡和前列腺體積無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。LRPPRC的高表達(dá)與胃癌和宮頸癌患者的年齡、腫瘤分化程度、侵犯深度、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和pTNM分期均無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。

表1 198例轉(zhuǎn)移性前列腺癌LRPPRC表達(dá)和臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

討 論

細(xì)胞正常的能量代謝是維持存活的基礎(chǔ)，線粒體在能量代謝中發(fā)揮重要作用。外界的致癌因素或細(xì)胞自身代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧會(huì)損傷線粒體的功能，對(duì)細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。線粒體自噬通過(guò)清除被損傷的線粒體，減少活性氧的產(chǎn)生，保護(hù)細(xì)胞不被外界因素或自身代謝廢物所損傷，在維持正常的線粒體功能中發(fā)揮重要作用。LRPPRC主要定位于線粒體，在線粒體RNA的代謝中發(fā)揮重要作用。研究表明：LRPPRC在線粒體自噬中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，抑制LRPPRC導(dǎo)致線粒體膜電位降低并激活線粒體自噬，加速被損傷的線粒體降解。我們應(yīng)用免疫組化法在胃癌、宮頸癌和前列腺癌組織中檢測(cè)了LRPPRC的表達(dá)，研究結(jié)果顯示：胃癌、宮頸癌和前列腺癌組織LRPPRC的表達(dá)顯著高于正常胃組織、宮頸組織和前列腺增生組織。并且，LRPPRC的高表達(dá)與前列腺癌患者的Gleason評(píng)分、血清PSA水平、雄激素阻斷治療后PSA下降水平和轉(zhuǎn)移部位的數(shù)量有顯著正相關(guān)性。一項(xiàng)研究分析了253例胃癌及癌旁組織LRPPRC的表達(dá)，結(jié)果顯示：胃癌組織中LRPPRC的表達(dá)顯著高于癌旁組織；LRPPRC高表達(dá)患者總生存率顯著低于低表達(dá)的患者；LRPPRC表達(dá)是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素[6]。另一項(xiàng)研究分析了112例前列腺腺癌和38例良性前列腺增生組織LRPPRC的表達(dá)，結(jié)果顯示與前列腺增生比較，前列腺癌LRPPRC的表達(dá)水平顯著增高，大于75%的前列腺癌患者呈現(xiàn)高水平的LRPPRC表達(dá)，而只有10%的良性前列腺增生癥患者被發(fā)現(xiàn)LRPPRC高表達(dá)；LRPPRC水平與腫瘤分級(jí)、是否轉(zhuǎn)移和血清PSA水平呈正相關(guān)，與術(shù)后兩年激素治療的敏感性和總生存期呈負(fù)相關(guān)；在前列腺特異性PTEN敲除小鼠和前列腺癌細(xì)胞株中進(jìn)一步證實(shí)了LRPPRC高表達(dá)預(yù)示較晚分期和激素治療不敏感[7]。在前列腺癌細(xì)胞中下調(diào)LRPPRC的表達(dá)，顯著抑制了前列腺癌細(xì)胞的侵襲能力并促進(jìn)線粒體介導(dǎo)的凋亡。研究結(jié)果提示：LRPPRC在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，LRPPRC的高表達(dá)提示腫瘤惡性程度高，增殖能力和抗凋亡能力強(qiáng)，容易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，LRPPRC可能成為一個(gè)新型的分子生物學(xué)標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

LRPPRC的高表達(dá)提示惡性腫瘤細(xì)胞的線粒體自噬被抑制。致癌因素對(duì)線粒體造成損傷，而被抑制的線粒體自噬無(wú)力清除被損傷和畸形的線粒體，造成異常線粒體和ROS在細(xì)胞中大量堆積，影響基因組的穩(wěn)定性，促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。因此，抑制LRPPRC能夠增強(qiáng)細(xì)胞通過(guò)自噬清除異常線粒體的能力， 維持線粒體的穩(wěn)定性，抑制惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

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(收稿：2016-10-17)

Expressions and clinical significance of LRPPRC in cancer

Hu Yunfeng，Cui Jie，Lei Xia, et al.

Department of Oncology, The Affiliated Hospital of Yan’an University(Yan’an716099)

Objective: To investigate the expressions and clinical significance of LRPPRC in cancer. Methods: Immunohistochemistry was performed to analyze the LRPPRC expression in 120 of gatric cancer tissues, 80 of cervical cancer tissues and 198 of prostate cancer tissues. The associations between LRPPRC and clinicopathological parameters were analyzed. Results: Gastric cancer and normal gastric tissues highly expressed LRPPRC in 71.7% (86/120) and 21.7% (13/60) of patients, respectively (P<0.001); Cervical cancer and normal cervical tissues highly expressed LRPPRC in 76.3% (61/80)and 27.5% (11/40) of patients, respectively (P<0.001); Prostate cancer and prostate hyperplasia tissues highly expressed LRPPRC in 61.6% (122/198) and 18.0% (18/100) of patients, respectively (P<0.001). A significant associations between the expressions of LRPPRC and Gleason scores (P<0.001), serum PSA levels (P=0.002), serum PSA levels after androgen deprivation therapy (P<0.022)and the numbers of metastasis position (P<0.001) were observed. Conclusion: There is higher LRPPRC expression in cancer tissues. The high expression of LRPPRC predicted high degree of malignant and more metastasis positions in late stage of prostate cancer patients.

Stomach neoplasms/pathology Prostatic neoplasms/pathology Antibodies/metabolism

*陜西省延安市科技惠民計(jì)劃項(xiàng)目(2015HM-11)

胃腫瘤/病理學(xué) 前列腺腫瘤/病理學(xué) 抗體/代謝 @亮氨酸蛋白

R735.2

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.05.057

陜西省延安市常見(jiàn)惡性腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究科技創(chuàng)新

項(xiàng)目(2015CXTD-07)

△通訊作者