李江 邱雁 邱梁

混合型抗體EZH2/34βE12/p63在前列腺穿刺標(biāo)本中的診斷意義

李江 邱雁 邱梁

目的 探討混合型抗體EZH2/34βE12/p63在不同前列腺病變穿刺標(biāo)本中的表達(dá)及其意義。 方法 在一張切片上采用免疫組織化學(xué)方法同時檢測EZH2、34βE12、p63在前列腺癌(PCa)、良性前列腺增生(BPH)、高度上皮內(nèi)瘤變(HGPIN)、非典型腺瘤樣增生(AAH)中的表達(dá)。 結(jié)果 52例PCa標(biāo)本中，EZH2主要表達(dá)于前列腺腺上皮細(xì)胞核，陽性率為98.1%。60例BPH、10例HGPIN和14例AAH標(biāo)本中，34βE12主要表達(dá)于前列腺基底細(xì)胞胞質(zhì)，在上述病變中的陽性率分別為96.7%、100.0%和85.7%；p63主要表達(dá)于前列腺基底細(xì)胞胞核，在上述病變中的陽性率分別為98.3%、90.0%和92.9%。EZH2、34βE12和p63在PCa中表達(dá)與BPH、HGPIN、AAH中兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 聯(lián)合檢測混合型抗體EZH2/34βE12/p63 3種免疫學(xué)指標(biāo)，在前列腺穿刺標(biāo)本中對PCa與其他病變的鑒別診斷具有一定參考價值。

前列腺癌； EZH2； 34βE12； p63

前列腺癌(PCa)是男性泌尿系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤，隨著我國人均壽命的延長，PCa日益受到重視[1]。前列腺穿刺活檢技術(shù)已廣泛應(yīng)用于臨床，為PCa的病理診斷開拓了新的領(lǐng)域。由于前列腺癌的異質(zhì)性，以及穿刺技術(shù)的局限性，前列腺病變良惡性的鑒別常常成為臨床病理診斷中的難題，因此，尋找有效的指標(biāo)和便捷的方法使PCa得以明確診斷尤為重要。本研究擬觀察單酶標(biāo)記混合型抗體EZH2/34βE12/p63在不同前列腺疾病穿刺標(biāo)本中的表達(dá)，探討其在PCa中的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集我院2010年1月至2015年12月期間前列腺穿刺標(biāo)本136例,年齡50～86歲,平均(68.72±4.32)歲。所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛液固定,常規(guī)石蠟包埋。經(jīng)2位高年資病理醫(yī)師診斷:其中PCa 52例,良性前列腺增生(BPH)60例,前列腺高度上皮內(nèi)瘤變(HGPIN)10例,非典型腺瘤樣增生(AAH)14例。

1.2 免疫組織化學(xué)

1.2.1 免疫組化試劑:EZH2兔單克隆抗體、34βE12、p63鼠單克隆抗體為濃縮型試劑購于福州邁新公司;EnVision試劑盒為Dako公司產(chǎn)品。

1.2.2 單酶標(biāo)記混合型抗體的配制與染色[2]:吸取EZH2、34βE12和p63濃縮型試劑各10 μl,加入2000 μl抗體稀釋液中,漩渦混合器上旋轉(zhuǎn)混勻,配制成1∶200的抗體混合型工作液(4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?,行免疫組化EnVision法染色,辣根過氧化物標(biāo)記,DAB顯色。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) EZH2于前列腺腺上皮細(xì)胞核呈棕黃色判斷為陽性;34βE12和p63分別于基底細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核呈棕黃色判斷為陽性。按Masi分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行半定量分析,切片中陽性著色細(xì)胞數(shù)量,無著色或<10%為(-);10%～20%為(+);21%～75%為(++);>75%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

52例PCa中,51例癌性腺上皮細(xì)胞核EZH2呈陽性表達(dá),49例癌性腺體周圍基底細(xì)胞消失,34βE12和p63均無顯色。60例BPH中,58例腺體周圍基底細(xì)胞34βE12和p63均呈強(qiáng)陽性表達(dá),53例腺上皮EZH2陰性。10例HGPIN中,9例腺體周圍基底細(xì)胞34βE12和p63均呈強(qiáng)陽性表達(dá),7例腺上皮未表達(dá)EZH2。14例AAH中,12例腺體周圍基底細(xì)胞34βE12和p63均呈強(qiáng)陽性表達(dá),13例腺上皮未表達(dá)EZH2。EZH2、34βE12、p63在PCa中表達(dá)與其他病變兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 EZH2、34βE12、P63在前列腺不同病變組織中的表達(dá)

注:與PCa組比較,*P<0.05

3 討論

在前列腺穿刺標(biāo)本中,高分化PCa、BPH、HGPIN、AAH等,光鏡下有時難以區(qū)分和鑒別,一直是臨床病理診斷的重點(diǎn)和難點(diǎn),特別是穿刺標(biāo)本量少時更是如此。因而臨床需要尋求一種有效的鑒別指標(biāo)和克服穿刺標(biāo)本局限的有效方法。

34βE12是一種單克隆高分子角蛋白,可識別Moll數(shù)為1、5、10、14角質(zhì)層的57 kD及66 kD的角蛋白。34βE12作為基底細(xì)胞的特異性標(biāo)記物,在經(jīng)蛋白酶消化的石蠟包埋組織的免疫組化染色中被廣泛應(yīng)用。p63是一種核蛋白,由位于染色體3q27-29的一種與p53有同源性的基因編碼。p63在診斷PCa時與34βE12具有相似的應(yīng)用意義,而p63有時可標(biāo)記34βE12陰性的基底細(xì)胞,相對于34βE12穩(wěn)定,因而兩者結(jié)合可提高基底細(xì)胞的陽性率[3-6]。本組研究中,我們觀察到52例PCa中,49例癌性腺體周圍基底細(xì)胞消失,34βE12和p63均未顯色,而其他非癌性病變中基底細(xì)胞表達(dá)良好。

EZH2是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子,在胚胎發(fā)育早期具有活性,隨著細(xì)胞分化,其表達(dá)減少。最近研究發(fā)現(xiàn),EZH2在人類許多惡性腫瘤中出現(xiàn)基因擴(kuò)增和較高水平表達(dá),與PCa的發(fā)生和進(jìn)展有密切聯(lián)系[7]。本研究通過免疫組化發(fā)現(xiàn)52例PCa中EZH2表達(dá)98.1%,與前列腺其他病變組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

此外,前列腺穿刺標(biāo)本一般較小,尤其是微小病灶可能僅出現(xiàn)在1～2張切片上,如果常規(guī)行免疫組化染色EZH2、34βE12、p63 3個抗體至少需要3張組織切片,而實(shí)際工作中由于病灶較小再次切片時可能病變組織已經(jīng)消失,此外由于連續(xù)切片有時腺體形態(tài)也會有一些變化,不利于觀察同一個腺體3種抗原的表達(dá)情況。本試驗(yàn)采用了單酶法同時標(biāo)記EZH2、34βE12、p63混合型抗體,3種抗體可分別結(jié)合前列腺腺上皮的核抗原和基底細(xì)胞的核、質(zhì)2種抗原。該方法只需3種抗體等量混合后滴加在同一張組織切片上,進(jìn)行一次二步法的標(biāo)記和顯色即可完成。此種方法減少了試驗(yàn)步驟,縮短了染色的時間,同時切片用中性塑膠封固,結(jié)果可長期保存。該方法的缺點(diǎn)在于陽性信號均呈棕黃色,初次觀察結(jié)果有一定難度[2]。

綜上所述,應(yīng)用單酶標(biāo)記混合型抗體在前列腺穿刺活檢標(biāo)本中對提高PCa的診斷與鑒別診斷具有一定的臨床應(yīng)用價值。

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Significance of detection of mixed type antibody EZH2/34βE12/p63 in needle biopsy specimen of prostatic lesions

LIJiang,QIUYan,QIULiang.

DepartmentofPathology,JiangsuProvincialGeriatricsHospital,Nanjing210024,China

Objective To study the expression and significance of EZH2/34βE12/p63 in needle biopsy specimen of prostatic lesions. Methods Expression of EZH2,34βE12 and p63 were detected using immunohistochemical method in the biopsy specimen of 53 cases of prostate cancer (PCa), 60 cases of benign prostatic hyperplasia (BPH), 10 cases of prostatic high grade intraepithelial neoplasia (HGPIN) and 14 cases of prostatic atypical adenomotous hyperplasia (AAH) with mixed type antibody in a single paraffin section. Results EZH2 was mainly expressed in the prostatic epithelia nuclear and the positive rate was 98.1% in 52 cases of PCa. 34βE12 was mainly expressed in the prostatic basal plasma and the positive rate in 60 cases of BPH,10 cases of HGPIN and 14 cases of AAH was 96.7%, 100% and 85.7% respectively.P63 was mainly expressed in the prostatic basal nuclear and the positive rate in BPH, HGPIN and AAH was 98.3%, 90.0% and 92.9% respectively. There were significant differences in expressions of EZH2,34βE12 and p63 among PCa, BPH, HGPIN and AAH (P<0.05). Conclusions Immunohistochemical detection of EZH2,34βE12 and p63 in single paraffin sections could improve diagnostic and differential diagnostic accuracy in needle biopsy specimen of prostate lesion.

prostate cancer； EZH2； 34βE12； p63

210024江蘇省南京市，江蘇省老年醫(yī)院病理科

R 446.8

A

10.3969/j.issn.1003-9198.2017.05.016

2016-06-03)