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        金邊螞蟥提取物大鼠亞急性毒性試驗

        2017-05-18 01:43:08許振朝宋茹雪宋延坤張雄勝僥偉源
        關鍵詞:螞蟥金邊血液學

        許振朝,宋茹雪,宋延坤,張雄勝,覃 壬,僥偉源

        (1.廣西南寧市凈雪皇生物工程有限公司研究中心,廣西 南寧 530000;2.廣西中醫(yī)藥研究院藥理所,廣西 南寧 530000)

        金邊螞蟥提取物大鼠亞急性毒性試驗

        許振朝1,宋茹雪1,宋延坤1,張雄勝1,覃 壬1,僥偉源2

        (1.廣西南寧市凈雪皇生物工程有限公司研究中心,廣西 南寧 530000;2.廣西中醫(yī)藥研究院藥理所,廣西 南寧 530000)

        金邊螞蟥收載于廣西壯族自治區(qū)藥材標準第二卷。本文為第一次報道金邊螞蟥的亞急性毒性試驗結(jié)果,供臨床及實驗研究參考。方法實驗以金邊螞蟥提取物1.0 g、0.5 g/kg/d分別給大鼠灌胃給藥(分別相當于臨床擬用日劑量0.01 g/kg/d的100倍、50倍),連續(xù)1個月。結(jié)果動物的外觀體征、行為活動無異常,各組動物飼料日消耗量無明顯差異;體重增長正常,各組無明顯差異;血液學檢查、血液生化學檢查、主要臟器組織學檢查,未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性反應發(fā)生。提示金邊螞蟥提取物對大鼠灌胃給藥安全劑量是1.0 g/kg體重。結(jié)論按此劑量應用應是安全的。

        金邊螞蟥;提取物;大鼠亞急性毒性試驗

        Phnom Penh contained in the Guangxi Zhuang Autonomous Region medicinal leech standard in second volumes.The test results of subacute toxicity experiments are reported for the first time in Phnom Penh leech and reference for clinical and experimental research.Methods Phnom Penh leech exteact at the dose of 1.0 g/kg/d、0.5 g/kg/d were given to rats by gastric perfusion (Respectively is equivalent to clinical decodes daily dose of 0.01 g/kg/d 100 times,50 times ), for a month.Results No abnormal behavior and the appearance of the animal signs,each animal feed consumption had no significant difference; the weight growth is normal,there was no significant difference between groups;hematological examination,blood biochemistry examination,main organs,found no significant toxicity.Phnom Penh leech extract on rats intragastric administration of safe dose is 1 g/kg (weight). Conclusion the dosage should be safe.

        1 背 景

        金邊螞蟥的基原菲牛蛭(Hirudinaria manillensis Lesson)隸屬無吻蛭目,是一種珍貴的醫(yī)用水蛭。有破血通經(jīng)逐瘀消癥之功效,用于血瘀經(jīng)閉,癥瘕痞訣,中風偏癱。未見有關金邊螞蟥亞急性毒性試驗的文獻報道,本實驗考察連續(xù)重復給藥對動物所產(chǎn)生的毒性反應及其嚴重程度,實驗結(jié)果可供臨床及實驗研究參考。(金邊螞蟥提取物由南寧市凈雪皇生物工程有限公司提供)

        試驗目的:考察本品連續(xù)重復給藥對動物所產(chǎn)生的毒性反應及其嚴重程度,為臨床安全用藥提供參考。

        受試物:金邊螞蟥提取物,批號:20140910,抗凝血活性為4000 ATU/g。設臨床日劑量為金邊螞蟥提取物0.6 g(2400 ATU)/d,即0.01 g(40 atu)/kg/d。金邊螞蟥提取物為棕灰色粉末,臨用時以蒸餾水配成溶液供試驗用。

        受試物的制備:取廣西南寧市郊所產(chǎn)金邊螞蟥,水洗凈,勻漿,以10倍及8倍水提取兩次,分別提取2 h及1 h,取水提液,加少量淀粉后冷凍干燥即得金邊螞蟥提取物。按抗凝血活性計,金邊螞蟥提取物毎g相當于原生藥材18.2 g。

        試驗劑量設計:經(jīng)預試,設定大鼠ig劑量為1.0 g/kg、0.5 g/kg金邊螞蟥提取物,相當于臨床擬用日劑量的100倍、50倍。連續(xù)ig1個月。

        試驗動物:Wistar雌雄大白鼠,普通級,廣西醫(yī)科大學實驗動物室提供(SCXK桂2009-0002),每籠10只,喂標準顆粒料,實驗室溫度(23±2)℃,相對濕度(70±5)%。

        2 試驗方法

        選取健康雌性大白鼠60只(雌雄各半),體重180~300 g,隨機分為3個組,每組20只。給藥方法模擬本品臨床給藥途徑(口服),采用灌胃給藥,每天一次,每次20 ml/kg體重。劑量設置分別為臨床日劑量的100倍、50倍,即1 g/kg/日、0.5 g/kg/日2個劑量組。另設對照組給水。藥后每周稱一次體重,按體重調(diào)整給藥量。給藥期間觀察動物進食、活動、糞便等一般表現(xiàn)及毒性反應情況。給藥滿1個月時,末次藥后第二天,每組處死10只大鼠,取血檢測血液學和血液生化學指標。用BC1800型全自動血細胞分析儀測血液學指標;用羅氏7600型全自動生化分析儀測定血液生化學指標。并取各動物的主要臟器稱重,計算每100 g體重相應臟器系數(shù)。同時留取各動物的主要臟器作病理組織學檢查。剩余動物停藥觀察2周按同樣方法檢測上述指標。各給藥組測定值與蒸餾水組比較,用t值法或校正t值法進行統(tǒng)計學分析,測定結(jié)果綜合評價藥物的安全性。

        試驗周期:亞急性毒性試驗時間為1個月(恢復期停藥觀察2周)。

        3 觀察指標

        3.1 一般表現(xiàn)

        外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞便、飼料日消耗量、體重、給藥局部反應等。

        3.2 血液學指標

        紅細胞計數(shù)(RBC)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞容積(MCV)、血紅蛋白(HB)、平均紅細胞血紅蛋白(MCHC)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCH)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(RC)、血小板計數(shù)(PLT)、白細胞計數(shù)(WBC)及其分類:淋巴細胞(LYM)、單核細胞(MID)、粒細胞(Gran)、凝血酶原時間(PT)。

        3.3 生化學指標

        谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血清總膽紅素(TBIL)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總膽固醇(CHOL)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、甘油三脂(TG)、肌酸磷酸激酶(CK)。

        3.4 病理組織學檢查

        主要臟器心、肝、脾、肺、腎、胃、小腸、大腸、腎上腺、胸腺、子宮卵巢、睪丸的肉眼和組織學檢查。并對心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、子宮、卵巢、睪丸稱重,計算其臟器系數(shù)(臟器重量/體重)。

        4 試驗結(jié)果

        4.1 一般情況

        給藥組動物的外觀體征、腺體分泌、呼吸、糞便、飼料日消耗量、給藥局部反應等均未見異常。飼料日消耗量隨體重增長而增加,隨體重增大和時間的延長而趨于穩(wěn)定或減少(高劑量組平均(14.9±2.1)g/只/日、低劑量組平均(15.4±2.0)g/只/日)。給藥組體重增長正常(表1)。

        4.2 血液學檢查

        給藥1個月和停藥2周,給藥組指標在正常值范圍。凝血酶原時間PT(秒)有延長。見表2。

        4.3 血液生化學檢查

        給藥1個月及停藥2周,各檢測值給藥組指標在正常值范圍。對照組血清總蛋白(TP)、甘油三脂TG(mmol/L)、總膽固醇CHOL(mmol/L)均有所降低;但都尚在正常范圍內(nèi)。見表3。

        表1 金邊螞蟥提取物1個月大鼠體重增長情況(s,g)

        表1 金邊螞蟥提取物1個月大鼠體重增長情況(s,g)

        組別 藥前體重 藥后體重增加值1 W 2 W 3 W 4 W 停藥2周高劑量 237±63 25±10 59±20 66±28 87±22 102±29低劑量 242±70 28±9 61±18 76±23 95±15 110±32對照組 241±61 29±11 63±21 76±29 93±25 107±33

        表2 金邊螞蟥提取物血液學測定值(s)

        表2 金邊螞蟥提取物血液學測定值(s)

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        續(xù)表2.1

        續(xù)表2.2

        表3 金邊螞蟥提取物大鼠血液生化測定值(s)

        表3 金邊螞蟥提取物大鼠血液生化測定值(s)

        組 別 T-P(g/L) ALB(g/L) TBIL(umol/L) ALT(u/L) CK(u/L)高劑量 76.4±4.0 31.1±3.9 3.20±0.35 44.5±4.0 139±22給藥結(jié)束 低劑量 79.0±3.5 34.5±4.3 3.69±0.36 44.8±8.9 142±40對照組 82.3±4.6 33.7±4.9 3.69±0.36 44.8±8.9 142±40高劑量 75.9±4.6 40.1±3.0 3.80±0.17 52.5±15.1 138±16恢復期 低劑量 74.5±3.5 38.0±2.2 3.42±0.27 50.2±12.2 139±42對照組 80.6±4.2 39.1±2.9 3.53±0.31 50.9±14.4 141±39

        續(xù)表3.1

        續(xù)表3.2

        4.4 臟器系數(shù)檢查

        給藥1個月及停藥后2周,給藥組大鼠的臟器系數(shù)差異無顯著性意義。見表4。

        4.5 主要臟器的病理組織學檢查

        未見因藥物毒性引起的病理改變。

        5 結(jié) 語

        金邊螞蟥收于廣西壯族自治區(qū)藥材標準第二卷,原藥材金邊螞蟥含量測定項規(guī)定抗凝血活性不低于220 atu/g。本金邊螞蟥提取物分別以1.0及0.5 g/kg/d(分別相當于臨床擬用日劑量40 atu/kg/d的100倍、50倍)給大鼠灌胃給藥,連續(xù)1個月。結(jié)果給藥組外觀體征、腺體分泌、呼吸、糞便、飼料日消耗量、給藥局部反應等均未見異常。飼料日消耗量隨體重增長而增加,隨體重增大和時間的延長而趨于穩(wěn)定或減少。給藥組體重增長正常,血常規(guī)及血液生化檢查、主要臟器的病理組織學檢查,均未見因藥物毒性引起的明顯改變。以上結(jié)果提示金邊螞蟥提取物對大鼠灌胃給藥的安全劑量是1 g藥材/kg。

        表4 金邊螞蟥提取物大鼠主要臟器系數(shù)值(s,g/100 g體重)

        表4 金邊螞蟥提取物大鼠主要臟器系數(shù)值(s,g/100 g體重)

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        續(xù)表4.1

        [1] 廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標準第二卷[C].2011.12.

        [2] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物長期毒性試驗技術指導原則[M].2005.

        [3] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.新藥(中藥)臨床前研究指導原則[M].1993.

        [4] 袁伯俊,王治喬.新藥臨床前安全性評價與實踐[M].北京:軍事醫(yī)學科學出版社,1997:24.

        本文編輯:吳 衛(wèi)

        S948

        A

        ISSN.2095-8242.2017.14.2759.03

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