馬騰茂，強宇靖，羅奎元，劉 飛，吳國泰,2，高慧琴*

1.730000甘肅省蘭州市，甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2.730000甘肅省蘭州市，甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點實驗室

·論著·

·中醫(yī)·中西醫(yī)結(jié)合研究·

秦艽不同配伍藥對對風(fēng)寒濕痹類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠血清炎性因子及踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變的影響

馬騰茂1，強宇靖1，羅奎元1，劉 飛1，吳國泰1,2，高慧琴1*

1.730000甘肅省蘭州市，甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2.730000甘肅省蘭州市，甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點實驗室

目的 觀察秦艽不同配伍藥對對風(fēng)寒濕痹類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)模型大鼠血清炎性因子及踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變的影響，闡釋中藥藥性-病證-療效之間的關(guān)聯(lián)性。方法 2015年3—12月將80只SFP級SD大鼠隨機分為空白組、模型組(單純Ⅱ型膠原誘導(dǎo))、病證模型組(Ⅱ型膠原誘導(dǎo)+風(fēng)寒濕環(huán)境誘導(dǎo))、陽性藥組(雷公藤多苷干預(yù))、單味秦艽組、秦艽威靈仙組(秦威組)、秦艽桑寄生組(秦桑組)和秦艽防己組(秦防組)。采用Ⅱ型膠原誘導(dǎo)加風(fēng)寒濕環(huán)境因素刺激制備風(fēng)寒濕痹RA大鼠模型，造模結(jié)束后各給藥組按15 ml/kg給予對應(yīng)的藥液灌胃，空白組、模型組及病證模型組給予等量0.9%氯化鈉溶液，連續(xù)28 d。觀察各組大鼠一般狀況、足跖腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)評分變化及踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變情況，檢測各組大鼠血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平。結(jié)果 模型組、病證模型組大鼠AI評分高于空白組(P<0.05)，各給藥組大鼠AI評分低于模型組及病證模型組(P<0.05)，秦威組大鼠AI評分低于單味秦艽組、秦桑組、秦防組(P<0.05)。病證模型組大鼠血清TNF-α水平高于空白組、模型組、陽性藥組、單味秦艽組、秦威組(P<0.05)，單味秦艽組、秦威組大鼠血清TNF-α水平低于秦防組(P<0.05)。模型組、病證模型組大鼠血清IL-1β水平高于空白組(P<0.05)，除秦防組外的其他給藥組大鼠血清IL-1β水平均低于模型組(P<0.05)，各給藥組大鼠血清IL-1β水平均低于病證模型組(P<0.05)。踝關(guān)節(jié)病理學(xué)顯示，各給藥組滑膜增生減輕，其中秦威組關(guān)節(jié)組織形態(tài)改善較好，秦防組較差。結(jié)論 對于風(fēng)寒濕痹RA，平溫相配效果優(yōu)于平平、平寒相配及單味藥，實驗結(jié)果符合中醫(yī)臨床“療寒以熱藥”的治療原則，平溫相配治療風(fēng)寒濕痹RA的機制可能與其能夠降低炎性因子TNF-α、IL-1β的水平，減輕滑膜增生及軟骨破壞有關(guān)。

關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕；模型，動物；腫瘤壞死因子α；踝關(guān)節(jié)；風(fēng)寒濕痹

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為主的全身性自身免疫性疾病，以慢性、對稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)。本病具有較高的發(fā)病率和致殘率，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量[1-2]。由于RA病因尚不明確，目前尚無根治的藥物，且常用藥物多有較嚴(yán)重的不良反應(yīng)。因此，中藥在RA治療中的作用日趨受到重視。

本課題組前期對治療RA的經(jīng)方、驗方及相關(guān)文獻進行整理歸納，發(fā)現(xiàn)祛風(fēng)濕類中藥使用頻率最高[3-4]，并從寒熱藥性角度篩選出該類藥中使用頻數(shù)較多、療效較好的藥物[5-6]——秦艽、威靈仙、桑寄生、防己。前期實驗以平性祛風(fēng)濕藥秦艽為基本藥，分別配伍威靈仙、桑寄生、防己，組成平溫相配(秦艽+威靈仙)、平平相配(秦艽+桑寄生)、平寒相配(秦艽+防己)的配伍關(guān)系，并對秦艽不同配伍藥對的抗炎鎮(zhèn)痛作用及其對風(fēng)濕痹證模型大鼠(包括風(fēng)寒濕痹和風(fēng)濕熱痹)血清炎性因子的影響進行研究，取得了一定成果[7-9]。本實驗繼續(xù)探討秦艽不同配伍藥對對風(fēng)寒濕痹RA模型大鼠一般狀況、

本文創(chuàng)新點：

(1)本文中將西醫(yī)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)疾病模型(CIA模型)與中醫(yī)痹證的“風(fēng)寒濕”證候因素相結(jié)合，建立了病證結(jié)合的風(fēng)寒濕痹RA大鼠模型，該模型既有西醫(yī)疾病的病理特點，又有中醫(yī)證候的特征，在一定程度上能夠模擬人類風(fēng)寒濕痹的特點。(2)文中通過觀察藥性不同的配伍藥對對寒證的療效差異，探討藥性-疾病-療效之間的關(guān)系，為中藥藥性研究提供新的思路與方法。

足跖腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)評分、血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平、白介素1β(IL-1β)水平及踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變的影響，從病證結(jié)合動物模型層次上探討藥性-病證-療效之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 2015年3—12月選取SPF級SD大鼠80只，雌雄各半，平均體質(zhì)量(150±20)g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供〔合格證號：SCXK(甘)2015-0002〕。80只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，稱重，采用隨機數(shù)字表法分為空白組、模型組、病證模型組、陽性藥組、單味秦艽組、秦艽威靈仙組(秦威組)、秦艽桑寄生組(秦桑組)、秦艽防己組(秦防組)，共8組，每組10只。

1.2 藥物與試劑 秦艽、威靈仙、桑寄生、防己4味中藥飲片均購自蘭州惠仁堂大藥房，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李成義教授鑒定均為正品。陽性藥為雷公藤多苷片(遠(yuǎn)大醫(yī)藥黃石飛云制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z42021212)；天然牛Ⅱ型膠原(CⅡ，北京索萊寶科技有限公司，批號1122D053)；完全弗氏佐劑(CFA，美國Sigma公司，批號SLBK1731V)；冰醋酸(北京索萊寶科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%)；滅菌注射用水(國藥集團容生制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H41024923)；多聚甲醛(北京索萊寶科技有限公司，批號20151218)；大鼠TNF-α、IL-1β試劑盒(北京博奧拓達科技有限公司，批號TOPEL01913)。

1.3 主要儀器設(shè)備 改裝后的RXZ智能型人工氣候箱(寧波江南儀器廠)，在人工氣候箱內(nèi)加裝3個風(fēng)扇，使其風(fēng)速達5 m/s，用于模擬自然環(huán)境中風(fēng)的刺激；0～150 mm數(shù)顯游標(biāo)卡尺(上海申韓量具有限公司)；INFINITE 200 PRO酶標(biāo)儀(瑞士TECAN集團公司)。

1.4 CⅡ乳劑的制備 精密吸取0.3 ml 98.5%冰醋酸置于50 ml容量瓶中，加滅菌注射用水定容，搖勻，得到濃度為0.1 mol/L的醋酸溶液。將5 mg CⅡ置于25 ml容量瓶中，用0.1 mol/L醋酸溶液溶解，在冰水浴中定容，搖勻，置于4 ℃冰箱中過夜。注射當(dāng)天將25 ml CⅡ溶液與CFA等體積混合，在冰水浴中充分?jǐn)嚢枞榛罱K配成質(zhì)量濃度為0.1 mg/ml的CⅡ乳劑。

1.5 造模 造模方法參考文獻[8]，實驗第1天，除空白組外，其余各組大鼠取背部2點(背部脊柱兩側(cè))、尾根部1點，剃毛，皮內(nèi)注射0.1 ml CⅡ乳劑進行初次免疫，共0.3 ml。實驗第12天，除空白組外，其余各組大鼠于左后足跖皮內(nèi)注射0.1 ml CⅡ乳劑進行二次免疫，空白組在相同部位注射等量0.9%氯化鈉溶液。從首次注射CⅡ乳劑的第2天起，除空白組和模型組外，其余各組均使用改造后的人工氣候箱進行風(fēng)寒濕環(huán)境因素刺激。所用風(fēng)寒濕環(huán)境條件為：溫度4 ℃，風(fēng)速5 m/s，相對濕度≥90%，同時加冰水浸沒大鼠足跖。1次/d，30 min/次，連續(xù)28 d。以大鼠畏寒蜷縮，足跖腫脹、麻木僵硬、不能負(fù)重，腫脹局部暗紅為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。

1.6 藥液制備

1.6.1 水煎液由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥劑實驗室協(xié)助制備。單味秦艽組：秦艽300 g，第一次加10倍量水煎煮1 h，第二次加8倍量水煎煮30 min，藥液過濾，合并兩次水煎液，濃縮為1.67 g生藥/ml的單味秦艽水煎液。按1∶1的比例分別稱取秦艽與威靈仙、秦艽與桑寄生、秦艽與防己各150 g，按上述操作進行，作為秦威組、秦桑組、秦防組的藥液，放入4 ℃冰箱內(nèi)儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.6.2 陽性藥-雷公藤多苷溶液制備。實驗時先將雷公藤多苷片碾碎，然后加入適量0.9%氯化鈉溶液，配成濃度為0.33 mg/ml的混懸液。

1.7 灌胃給藥 實驗第29天，陽性藥組、單味秦艽組、秦威組、秦桑組、秦防組按15 ml/kg給予對應(yīng)的藥液灌胃，空白組、模型組及病證模型組給予等量0.9%氯化鈉溶液，1次/d，連續(xù)28 d。

1.8 觀察指標(biāo)及方法

1.8.1 大鼠一般狀況 每天觀察各組大鼠的活躍度、毛發(fā)、飲食飲水、足跖腫脹、二便情況等，并做好記錄。

1.8.2 大鼠足跖腫脹度 于實驗前1 d采用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測量大鼠左后足跖厚度，每3 d測量1次，計算足跖腫脹度。足跖腫脹度=(Ct-C0)/C0，其中，C0表示致炎前足跖厚度，Ct表示致炎后足跖厚度。

1.8.3 大鼠AI評分 實驗第56天，對各組大鼠進行AI評分，采用5級評分法[10]：0分為正常(無關(guān)節(jié)炎)；1分為足趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)輕度發(fā)紅或腫脹；2分為足趾或踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)中度腫脹；3分為踝關(guān)節(jié)嚴(yán)重腫脹或踝關(guān)節(jié)以下全部腫脹；4分為整個足爪全部腫脹或關(guān)節(jié)嚴(yán)重變形，不能負(fù)重。每只大鼠4只足爪評分之和作為最終的AI評分。

1.8.4 大鼠血清TNF-α、IL-1β水平 實驗第56天，末次給藥后1 h，取大鼠股動脈血5 ml，靜置2 h，3 000 r/min離心20 min，分離血清，用大鼠TNF-α、IL-1β試劑盒測定大鼠血清TNF-α、IL-1β水平，具體操作嚴(yán)格按說明書步驟進行。

1.8.5 踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變 實驗第56天取血后，頸椎脫臼處死大鼠，每組取2只大鼠左后肢踝關(guān)節(jié)，4%多聚甲醛固定，脫鈣，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般狀況比較 空白組大鼠活躍度高，精神狀態(tài)良好，毛發(fā)有光澤、觸之柔順，飲食飲水多，足跖未見腫脹。模型組大鼠毛發(fā)較柔順，活動較少，喜聚集，足跖腫脹明顯，偶見拖行。病證模型組大鼠毛發(fā)稀疏，精神不振，反應(yīng)遲鈍，活動少，喜蜷縮聚集，飲食飲水明顯減少，足跖腫脹十分明顯，僵硬，拖行、不能負(fù)重。治療10d后各給藥組大鼠精神狀態(tài)有所好轉(zhuǎn)，毛發(fā)較柔順，飲食飲水增多，足跖腫脹均有不同程度的消退，其中秦威組足跖腫脹消退比較明顯，觸之柔軟，拖行減輕；單味秦艽組、秦威組、秦桑組、秦防組均出現(xiàn)小便增多、大便濕潤偏稀的現(xiàn)象。

2.2 各組大鼠足跖腫脹度情況 初次免疫第6天，模型組、病證模型組及各給藥組大鼠足跖腫脹度明顯升高；第12天二次免疫后，模型組、病證模型組及各給藥組足跖腫脹度繼續(xù)升高，至實驗第21天達到高峰；第29天給藥后，各給藥組足跖腫脹度逐漸下降；至第54天，各給藥組足跖腫脹度降至最低，其中秦威組足跖腫脹度處于較低水平，秦防組足跖腫脹度處于較高水平(見圖1)。

2.3 各組大鼠AI評分比較 各組大鼠AI評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與空白組比較，其余各組大鼠AI評分均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；各給藥組大鼠AI評分低于模型組及病證模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；秦威組大鼠AI評分低于單味秦艽組、秦桑組、秦防組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

圖1 各組大鼠足跖腫脹度隨時間變化折線圖

Figure1Changesofpawswellingovertimeinthe8groupsofratsshownbyalinechart

表1 各組大鼠AI評分比較±s，分)

注：與空白組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與病證模型組比較，cP<0.05；與單味秦艽組比較，dP<0.05；與秦威組比較，eP<0.01；AI=關(guān)節(jié)炎指數(shù)

2.4 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β水平比較 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。病證模型組大鼠血清TNF-α水平高于空白組、模型組、陽性藥組、單味秦艽組、秦威組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；單味秦艽組和秦威組大鼠血清TNF-α水平低于秦防組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。模型組、病證模型組大鼠血清IL-1β水平高于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；除秦防組外的其他給藥組大鼠血清IL-1β水平低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；各給藥組大鼠血清IL-1β水平低于病證模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

表2 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β水平比較

注：與空白組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與病證模型組比較，cP<0.05；與單味秦艽組比較，dP<0.05；與秦威組比較，eP<0.05；TNF-α=腫瘤壞死因子α,IL-1β=白介素1β

2.5 各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變 空白組關(guān)節(jié)間隙正常，關(guān)節(jié)面光滑，無明顯炎性細(xì)胞浸潤，滑膜由1～2層滑膜細(xì)胞構(gòu)成，排列整齊；模型組滑膜細(xì)胞增生達3～5層，排列稀疏、紊亂，部分滑膜增生突入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，可見較多新生毛細(xì)血管及大量炎性滲出物；病證模型組滑膜增生達5層以上，排列疏松、紊亂，大量炎性細(xì)胞浸潤，軟骨表層可見明顯的組織變性、壞死，軟骨細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的退行性變，關(guān)節(jié)軟骨面嚴(yán)重毛糙、缺損、脫落；陽性藥組滑膜增生較輕，關(guān)節(jié)面較平滑，侵蝕較少；單味秦艽組滑膜增生較少，腔內(nèi)少量炎性滲出物，關(guān)節(jié)面少許破壞；秦威組滑膜增生較少，炎性滲出物減少，關(guān)節(jié)面較為光滑；秦桑組滑膜增生較少，炎性細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)少量炎性滲出物；秦防組滑膜增生較多，關(guān)節(jié)面毛糙、缺損(見圖2,本文圖2彩圖見本刊官網(wǎng)www.chinagp.net電子期刊相應(yīng)文章)。

3 討論

RA屬于中醫(yī)痹證之范疇，按病因病機不同，痹證可以分為風(fēng)寒濕痹證、風(fēng)濕熱痹證、痰瘀痹阻證、肝腎兩虛證等。風(fēng)寒濕痹證是痹證中最常見的一種證型，主要由于久居潮濕之地、嚴(yán)寒凍傷、貪涼露宿、水中作業(yè)或汗出如水等感受風(fēng)寒濕邪而引起，主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛，屈伸不利，遷延日久可致肢體拘急，甚則關(guān)節(jié)腫大。本實驗參考人類風(fēng)寒濕痹證成因，在公認(rèn)的研究RA病理機制和評價治療藥物的最佳動物模型[11-12]——CIA模型基礎(chǔ)上，輔以風(fēng)寒濕環(huán)境因素刺激，建立病證結(jié)合的風(fēng)寒濕痹RA大鼠模型。

細(xì)胞因子是RA炎癥和關(guān)節(jié)損傷的重要介質(zhì)，其中TNF-α、IL-1β的異常表達和失調(diào)是RA的典型特征之一，其在RA的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起中心作用，是RA發(fā)病機制直接相關(guān)的重要細(xì)胞因子[13]。TNF-α、IL-1β能促進體內(nèi)骨關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的增殖分化、促進滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞合成并釋放前列腺素E2和膠原酶，從而破壞骨和軟骨的吸收，促進成纖維細(xì)胞增生[14]。TNF-α在活動性RA中能增強血小板的活性和聚積功能，促進成纖維細(xì)胞釋放細(xì)胞黏附分子，而細(xì)胞黏附分子在RA的發(fā)病中起著重要作用[15]。IL-1β還可以刺激B型滑膜細(xì)胞產(chǎn)生高水平的基質(zhì)金屬蛋白酶，能降解大多數(shù)的細(xì)胞外基質(zhì)成分，加快RA的破壞性進程[16]。有研究表明，抑制TNF-α和IL-1β的產(chǎn)生是RA治療的可取途徑之一；降低TNF-α、IL-1β水平可以緩解RA病情[17-18]。在RA的治療中，有效降低TNF-α、IL-1β水平對RA的療效及預(yù)后均具有積極作用。

注：A為空白組，B為模型組，C為病證模型組，D為陽性藥組，E為單味秦艽組，F(xiàn)為秦威組，G為秦桑組，H為秦防組

圖2 各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變情況(HE染色，×100)

Figure 2 Pathological changes of ankle joint in each group of rats

實驗結(jié)果顯示，模型組、病證模型組及各給藥組大鼠足跖腫脹度明顯升高；給藥28 d后各給藥組足跖腫脹度均有不同程度的降低。模型組、病證模型組及各給藥組大鼠AI評分均高于空白組；各給藥組AI評分低于模型組及病癥模型組；秦威組AI評分低于秦防組、秦桑組、單味秦艽組。病證模型組大鼠血清TNF-α水平高于空白組及模型組；陽性藥組、單味秦艽組、秦威組TNF-α水平低于病證模型組；單味秦艽組和秦威組低于秦防組TNF-α水平。模型組、病證模型組大鼠血清IL-1β水平高于空白組；除秦防組外的其他給藥組大鼠血清IL-1β水平低于模型組；各給藥組大鼠血清IL-1β水平低于病證模型組。HE染色結(jié)果顯示，模型組及病證模型組的炎癥情況及病理性破壞較為嚴(yán)重，且病證模型組病情重于模型組，表明風(fēng)寒濕環(huán)境因素能夠加重RA病情。各給藥組踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變均有所減輕，多為輕度滑膜增生，伴有少量炎性細(xì)胞浸潤，其中秦威組關(guān)節(jié)組織形態(tài)改善較好，秦防組改善較差。平溫相配改善風(fēng)寒濕痹RA的機制可能與其能夠降低血清炎性因子TNF-α、IL-1β水平，減輕滑膜增生及軟骨破壞有關(guān)。

綜合實驗結(jié)果來看，秦威組(平溫相配)能夠明顯改善風(fēng)寒濕痹RA大鼠的足跖腫脹度、關(guān)節(jié)炎癥、血清炎性因子及踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變，治療效果突出，療效優(yōu)于秦桑組(平平相配)、秦防組(平寒相配)及單味秦艽組，說明對于風(fēng)寒濕痹，平溫相配效果較佳，提示對于寒證，采用溫?zé)嵝运幬镏委熌苋〉幂^好的療效，表現(xiàn)出“寒證-溫?zé)崴?療效佳”的辨證關(guān)系，實驗結(jié)果與中醫(yī)臨床“療寒以熱藥”的治療原則是相符合的。此外，本實驗中秦防組(平寒相配)對風(fēng)寒濕痹RA治療效果較差，療效遠(yuǎn)不及其他給藥組，也證實了寒藥治療寒證的不可行性，體現(xiàn)了“寒證-寒藥-療效差” 的辨證關(guān)系。秦桑組(平平相配)療效不甚突出，無法得出準(zhǔn)確的辨證關(guān)系，其原因可能與二藥藥性緩和，需長期服用有關(guān)。

作者貢獻：馬騰茂、高慧琴進行實驗設(shè)計與實施、資料收集整理、撰寫論文并對文章負(fù)責(zé)；強宇靖、羅奎元、劉飛進行實驗實施、評估、資料收集；吳國泰、高慧琴進行質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

本文不足：

對于風(fēng)寒濕痹RA模型的評價尚有所欠缺，動物與人在感知上有差異。

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(本文編輯：崔莎)

Effects of Qinjiao in Different Combinations on the Content of Serum Inflammatory Cytokines and Ankle Pathology in Rats with Wind-cold-damp Rheumatoid Arthritis

MATeng-mao1,QIANGYu-jing1,LUOKui-yuan1,LIUFei1,WUGuo-tai1,2,GAOHui-qin1*

1.GansuUniversityofChineseMedicine,Lanzhou730000,China2.GansuProvincialKeyLaboratoryofTCMPharmacologyandToxicology,Lanzhou730000,China

*Correspondingauthor:GAOHui-qin,Professor,Mastersupervisor;E-mail：ghq@gszy.edu.cn

Objective To elaborate the correlation of traditional Chinese medicine(TCM) properties with syndrome differentiation and treatment effect by observing the effects of Qinjiao(Gentianae Macrophyllae Radix) in different combinations on the content of serum inflammatory cytokines and ankle pathology in rats with wind-cold-damp rheumatoid arthritis(RA).Methods This study was conducted between March and December 2015.Eighty SPF grade SD rats were randomly divided into the blank group,collagenⅡmodel group,wind-cold-damp arthralgia model group,Tripterygium group,single Qinjiao group,Qinjiao-Weilingxian(Clematidis Radix et Rhizoma) group(hereinafter referred to as Qin-Wei group),Qinjiao-Sangjisheng(Taxilli Herba) group(hereinafter referred to as Qin-Sang group),Qinjiao-Fangji(Stephaniae Tetrandrae Radix) group(hereinafter referred to as Qin-Fang group).For modeling,the collagenⅡmodel group was induced by collagenⅡemulsion,other model groups except the blank model group were induced by collageⅡ and exposed in wind-cold-damp environment.After modeling,the blank group,collagenⅡmodel group,wind-cold-damp arthralgia model group were given the same amount of 0.9% sodium chloride solution,each of the other groups was gavaged with 15 ml/kg corresponding drug solution,once a day with administration duration of 30 min,for 28 days.The changes of general condition,paw swelling and arthritis index(AI) were observed.The serum levels of TNF-α and IL-1β were determined.Pathological changes of ankle joint were detected by HE staining.Results Specifically,compared with the blank group,the collagenⅡmodel group and wind-cold-damp arthralgia model group had higher average AI scores (P<0.05);the average AI scores in Tripterygium group,single Qinjiao group,Qin-Wei group,Qin-Sang group,Qin-Fang group were lower than those in the collagenⅡmodel group and wind-cold-damp arthralgia model group(P<0.05);the average AI scores of Qin-Wei group were significantly lower than those of single Qinjiao group,Qin-Sang group and Qin-Fang group(P<0.05).The serum TNF-α levels in the wind-cold-damp arthralgia model group were higher than those in blank group,collageⅡmodel group,Tripterygium group,single Qinjiao group and Qin-Wei group(P<0.05);the serum TNF-α levels in single Qinjiao group and Qin-Wei group were lower than those in Qin-Fang group(P<0.05).The serum IL-1β levels in collageⅡmodel group and wind-cold-damp arthralgia model group were higher than those in the blank group(P<0.05);the serum IL-1β levels in Tripterygium group,single Qinjiao group,Qin-Wei group,Qin-Sang group except Qin-Fang group were lower than those in collageⅡmodel group(P<0.05);Tripterygium group,single Qinjiao group,Qin-Wei group,Qin-Sang group and Qin-Fang group had lower serum IL-1β levels than wind-cold-damp arthralgia model group(P<0.05).Pathological changes of ankle joint detected by HE staining showed that,the inflammation and pathological destruction were alleviated in Tripterygium group,single Qinjiao group,Qin-Wei group,Qin-Sang group and Qin-Fang group in varying degrees,joint tissue morphology improved better in Qin-Wei group,and pathological changes improved the poorest in Qin-Fang group.Conclusion For the wind-cold-damp RA,herb with mild property combined with that with warm property,has better effect than two kinds of herbs with mild properties,and herb with mild property combined with that with cold property,and single herb does.The experimental results are consistent with the clinical treatment principles of TCM,"treating the cold disease should use the hot medicine".The mechanism of Qinjiao-Weilingxian compatibility having good effect on the disease may be related to its ability,which can reduce the serum TNF-α and IL-1β levels as well as synovial hyperplasia and cartilage destruction.

Arthritis，rheumatoid;Models,animal;Tumor necrosis factor-alpha;Ankle joint;Wind-cold-damp arthralgia

國家自然科學(xué)基金資助項目(81360648)

R 593.22

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.15.018

2016-12-18；

2017-03-06)

*通信作者：高慧琴，教授，碩士生導(dǎo)師；E-mail：ghq@gszy.edu.cn

馬騰茂，強宇靖，羅奎元，等.秦艽不同配伍藥對對風(fēng)寒濕痹類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠血清炎性因子及踝關(guān)節(jié)病理學(xué)改變的影響[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2017，20(15)：1878-1883.[www.chinagp.net]

MA T M,QIANG Y J,LUO K Y,et al.Effects of Qinjiao in different combinations on the content of serum inflammatory cytokines and ankle pathology in rats with wind-cold-damp rheumatoid arthritis[J].Chinese General Practice，2017，20(15)：1878-1883.