蔣 思 鄭楷平 劉 琴 杜田鍇 黎 錦 宋繼權(quán)

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·論著·

帶狀皰疹患者T細(xì)胞亞群的檢測(cè)

蔣 思1鄭楷平1劉 琴1杜田鍇1黎 錦2宋繼權(quán)1

目的： 檢測(cè)帶狀皰疹患者外周血T細(xì)胞亞群表達(dá)水平。方法： 采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)116例帶狀皰疹患者及80名健康對(duì)照者外周血T細(xì)胞亞群。結(jié)果： 帶狀皰疹患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞均顯著高于健康人群，患者不同年齡組間、不同病程組間CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞無(wú)明顯差異。結(jié)論：帶狀皰疹患者CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞升高，提示特異性細(xì)胞免疫得以重建。

帶狀皰疹； T細(xì)胞亞群

帶狀皰疹病原體為水痘帶狀皰疹病毒(VZV)，初次感染后，VZV便潛伏于顱神經(jīng)及背根感覺(jué)神經(jīng)節(jié)，當(dāng)其再次活化時(shí)則可引起健康人或免疫抑制患者發(fā)生帶狀皰疹[1,2]。本病的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)，VZV特異性細(xì)胞免疫水平下降是誘發(fā)帶狀皰疹的關(guān)鍵[3]，但發(fā)病后常獲終生免疫力，提示帶狀皰疹患者患病后重建VZV特異性免疫力。為進(jìn)一步探索帶狀皰疹患者細(xì)胞免疫過(guò)程，筆者對(duì)116例帶狀皰疹患者進(jìn)行了T細(xì)胞亞群分析。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象 選取2016年1～9月我院皮膚科病房住院治療的帶狀皰疹患者116例為研究對(duì)象，同時(shí)選取相同時(shí)間段來(lái)我院體檢中心體檢的健康人群80名為對(duì)照組。所有帶狀皰疹患者均具有典型的臨床表現(xiàn)，符合診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并惡性腫瘤；合并自身免疫性疾??；使用免疫抑制劑者；HIV患者；妊娠及哺乳期婦女。發(fā)病年齡為20～90歲，平均(59.72±13.805)歲；發(fā)病時(shí)間為1～15天，平均(5.69±2.671)天。

分組情況：研究證明VZV特異性細(xì)胞免疫水平40歲時(shí)達(dá)最高峰，之后隨年齡增長(zhǎng)而下降[5]，而60歲以上人群為帶狀皰疹高發(fā)人群，故按發(fā)病年齡分為4組，即≤40歲、41～50歲、51～60歲、≥61歲；根據(jù)病毒感染后免疫應(yīng)答的時(shí)相變化，通常感染后3天效應(yīng)性T細(xì)胞即開(kāi)始活化、8～9天達(dá)到高峰，故按發(fā)病時(shí)間分為3組，即≤3天、4～7天、≥8天。正常對(duì)照組年齡17～89歲，兩組間年齡與性別構(gòu)成均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 100 μL抗凝血加入FITC標(biāo)記的抗CD3、CD4、CD8單克隆抗體孵育(所有抗體均購(gòu)自Abcam公司)，上流式細(xì)胞術(shù)儀檢測(cè)(美國(guó)BD公司生產(chǎn))，配套軟件分析，計(jì)算CD3+、CD4+、CD8+各細(xì)胞群的相對(duì)比值。

2 結(jié)果

2.1 帶狀皰疹患者與健康人群相比，外周血總T細(xì)胞(CD3+T細(xì)胞)百分比與CD3+CD4+T細(xì)胞百分比均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組間CD8+T細(xì)胞百分比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。以正常參考范圍作參照，116例帶狀皰疹患者僅有1例CD3+T細(xì)胞低于正常值下限，52.6%位于正常范圍，47.4%高出正常值上限(圖 1)；33.6%的患者CD3+CD4+T細(xì)胞位于正常參考范圍，66.4%超過(guò)正常值上限(圖2)。

圖1 CD3+T細(xì)胞(%)正常參考范圍為38.56%～70.06%(兩條紅線(xiàn)之間的范圍)。116例帶狀皰疹患者僅有1例T細(xì)胞低于正常值下限，52.5%的位于正常值范圍，47.4%高出正常值上限 圖2 CD3+CD4+T細(xì)胞(%)正常參考范圍為14.21%～36.99%(兩條紅線(xiàn)之間的范圍)。116例帶狀皰疹患者33.6%位于正常參考范圍，66.4%超過(guò)正常值上限

表1 帶狀皰疹患者與健康人群外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果 %

2.2 帶狀皰疹患者不同年齡組相比，各年齡組間外周血總T細(xì)胞(CD3+T細(xì)胞)、CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞百分比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表2 帶狀皰疹患者不同年齡組間T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果 %

2.3 帶狀皰疹患者不同病程組間比較，≤3天、4～7天、≥8天各組間外周血總T細(xì)胞(CD3+T細(xì)胞)、CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞百分比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。

表3 帶狀皰疹患者不同病程組間T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果 %

3 討論

帶狀皰疹發(fā)生與VZV特異性T細(xì)胞免疫有關(guān)。人類(lèi)初次感染水痘帶狀皰疹病毒后表現(xiàn)為水痘，之后該病毒便長(zhǎng)期潛伏于顱神經(jīng)及背根神經(jīng)節(jié)，同時(shí)獲得VZV特異性細(xì)胞免疫并維持在一定水平[6]，當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí)可誘發(fā)帶狀皰疹。但本文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)帶狀皰疹患者T細(xì)胞亞群并未出現(xiàn)“免疫力低下”，反而呈現(xiàn)“免疫力增強(qiáng)”現(xiàn)象，說(shuō)明帶狀皰疹患者患病后特異性細(xì)胞免疫力得以重建。

潛伏病毒的亞臨床再活化是終生存在的，但并不會(huì)發(fā)病，這得益于該病毒特異性T細(xì)胞免疫的存在。但隨年齡增長(zhǎng)(>40歲)或存在免疫抑制情況時(shí)，水痘帶狀皰疹病毒特異性T細(xì)胞免疫水平下降，當(dāng)該免疫水平下降至某一臨界值后則不足以抑制潛伏的水痘帶狀皰疹病毒，結(jié)果導(dǎo)致病毒播散引發(fā)神經(jīng)節(jié)炎，臨床表現(xiàn)為神經(jīng)支配區(qū)域的皮膚神經(jīng)痛以及隨之而出現(xiàn)的水皰[5]。

T細(xì)胞是機(jī)體介導(dǎo)細(xì)胞免疫的重要細(xì)胞群，各T細(xì)胞亞群相互協(xié)作共同完成免疫應(yīng)答，若T細(xì)胞總數(shù)或不同亞群的比值發(fā)生改變，可能與某些疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[7]。CD4+T細(xì)胞在抗病毒免疫反應(yīng)中發(fā)揮極其重要的作用[8]。本文研究結(jié)果顯示帶狀皰疹患者CD3+T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞較正常人群顯著升高，CD3+T細(xì)胞升高主要由CD4+T細(xì)胞升高所致，說(shuō)明CD4+T細(xì)胞與帶狀皰疹特異性細(xì)胞免疫關(guān)系密切。帶狀皰疹發(fā)病期間，大量VZV活化復(fù)制，激活免疫系統(tǒng)使得原本下降的VZV特異性細(xì)胞免疫水平回升，并維持在一定水平，這便為免疫力正常人群幾乎不會(huì)再次發(fā)病提供了合理的解釋[9]。

Weinberg等對(duì)753名健康人群定期隨訪(fǎng)檢測(cè)水痘帶狀皰疹病毒特異性細(xì)胞免疫水平，在觀察時(shí)間內(nèi)其中73例發(fā)生帶狀皰疹，從而將發(fā)生帶狀皰疹人群患病前后的細(xì)胞免疫水平與未發(fā)生帶狀皰疹人群的免疫水平進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患病人群在發(fā)病前的細(xì)胞免疫水平顯著低于未患病人群的細(xì)胞免疫水平，但VZV特異性效應(yīng)T細(xì)胞反應(yīng)快速上升并在帶狀皰疹皮疹出現(xiàn)后的1～3周達(dá)到峰值，第3～6周快速下降，在隨后至少2年維持穩(wěn)定水平。VZV特異性記憶T細(xì)胞上升慢，在皮疹出現(xiàn)后3～6周達(dá)到高峰，在感染后第1年內(nèi)下降，此后2年或更長(zhǎng)時(shí)間以穩(wěn)定水平維持[10]。該研究結(jié)果揭示了帶狀皰疹患者特異性細(xì)胞免疫水平在發(fā)病前下降、發(fā)病后上升并維持穩(wěn)定水平的變化特點(diǎn)。本文檢測(cè)結(jié)果與Weinberg等[10]的結(jié)果一致。另有研究者通過(guò)VZV特異性IFN-γ釋放試驗(yàn)，間接證實(shí)帶狀皰疹患者圍患病期的特異性細(xì)胞免疫水平呈升高狀態(tài)[3]。上述研究結(jié)果均證明帶狀皰疹患者患病后特異性細(xì)胞免疫水平得以重建。

CD8+T細(xì)胞具有特異性殺傷病毒感染細(xì)胞的功能，在感染恢復(fù)中起重要作用，但本文未發(fā)現(xiàn)帶狀皰疹患者與正常人群CD8+T細(xì)胞之間具有顯著差異。另外，本文也未發(fā)現(xiàn)不同年齡組間、不同病程組間CD3+T細(xì)胞百分比、CD3+CD4+T細(xì)胞百分比和CD3+CD8+T細(xì)胞百分比有顯著差異，說(shuō)明患病短期內(nèi)獲得的細(xì)胞免疫水平可能與年齡關(guān)系不大。擬后期進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量和后期定期隨訪(fǎng)檢測(cè)T細(xì)胞亞群，探索特異性細(xì)胞免疫水平隨病程延長(zhǎng)及年齡增長(zhǎng)的變化趨勢(shì)。

4 小結(jié)

VZV特異性細(xì)胞免疫水平的下降或升高與帶狀皰疹發(fā)病與否關(guān)系密切，其中CD4+T細(xì)胞發(fā)揮重要作用。帶狀皰疹患者發(fā)病前因各種因素使該細(xì)胞免疫水平下降，但發(fā)病后又迅速升高，并通?？色@終生免疫力，提示VZV特異性細(xì)胞免疫在潛伏VZV病毒再活化刺激下得以重建。另外，VZV特異性細(xì)胞免疫力升高可以降低帶狀皰疹的嚴(yán)重程度及帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛的發(fā)生率[11]。T細(xì)胞亞群測(cè)定可反映患者細(xì)胞免疫水平的高低，從而有助于評(píng)估病情與判斷預(yù)后。

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(收稿：2016-10-29 修回：2016-12-05)

Detection of peripheral T-lymphocyte subsets in the patients with herpes zoster

JIANGSi1,ZHENGKaiping1,LIUQin1,DUTiankai1,LIJin2,SONGJiquan1.

1.DepartmentofDermatology,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430071,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430071,China

SONGJiquan,E-mail:songjiq@126.com

Objective: To detect the level of T-lymphocyte subsets in the patients with herpes zoster. Methods: T-lymphocyte subsets in 116 patients with herpes zoster and 80 healthy controls were detected by flow cytometry. Results: The levels of CD3+, CD4+lymphocyte in the patients with herpes zoster were higher than those in healthy controls. There was no significant difference in the levels of CD3+, CD4+lymphocyte among the patients in different age and duration of the disease. Conclusion: The levels of CD3+, CD4+lymphocyte in the patients with herpes zoster are increased, which indicates the reconstruction of of cellular immunity.

Herpes zoster; T-lymphocyte subsets

1武漢大學(xué)中南醫(yī)院皮膚科，湖北武漢，430071 2武漢大學(xué)中南醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北武漢，430071

宋繼權(quán)，E-mail：songjiq@126.com