高建萍，龍訓(xùn)琴，陳俊莉

(成都市西區(qū)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，四川 成都610041)

2389例血液標(biāo)本培養(yǎng)的病原菌分離鑒定及耐藥性的結(jié)果分析

高建萍，龍訓(xùn)琴，陳俊莉

(成都市西區(qū)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，四川 成都610041)

目的 分析2389例血液標(biāo)本培養(yǎng)中病原菌分離鑒定以及病原菌耐藥性的情況，為臨床治療感染性疾病制定診療方案及合理用藥提供參考依據(jù)。方法 回顧性分析2014年6月至2016年5月本院用迪爾DL-Bt64(DL-Bt64)全自動血培養(yǎng)儀對2389例血液標(biāo)本培養(yǎng)分離致病菌和用DL-96Ⅱ細(xì)菌測定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)的結(jié)果。結(jié)果 分離出病原菌213株，培養(yǎng)陽性率為8.92%。其中G+菌109株占51.17%(109/213)，G-桿菌87株占40.85%(87/213)，真菌17株占7.98%(17/213)。G+菌中以凝固酶陰性葡萄球菌和金黃色葡萄球菌為主，檢出率分別為24.88%和14.55%，其他菌株均小于5.00%。G-菌中以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和銅綠假單胞菌為主，檢出率分別為15.69%、9.86%和7.04%，其他菌株均小于3.00%。真菌以白色念珠菌為主，檢出率為6.10%，其他菌株均小于2.00%。凝固酶陰性葡萄球菌對苯唑西林、青霉素G的耐藥率在為90.0%以上，未發(fā)現(xiàn)萬古霉素、利奈唑胺和替考拉寧對葡萄球菌的耐藥。大腸埃希氏菌對復(fù)方新諾明、阿米卡星、頭孢呋辛、左氧氟沙星，肺炎克雷伯菌對阿米卡星、哌拉西林、頭孢噻肟、頭孢呋辛以及銅綠假單胞菌對復(fù)方新諾明、阿米卡星、頭孢曲松、頭孢噻肟、左氧氟沙星的耐藥率均在50.00%以上，白色念珠菌對益康唑和制菌霉素的耐藥率均在68.00%以上。結(jié)論 血培養(yǎng)致病菌以G+菌為主，菌種多樣化，細(xì)菌耐藥情況較為嚴(yán)重。臨床應(yīng)加強(qiáng)血培養(yǎng)對致病菌鑒定，定期分析本區(qū)域致病菌耐藥結(jié)果，對治療感染性疾病時制定診療方案、避免抗菌藥物的濫用、降低耐藥菌株的產(chǎn)生等方面具有極其重要的應(yīng)用價值。

血液培養(yǎng)；主要致病菌；耐藥性；全自動血培養(yǎng)系統(tǒng)

(ChinJLabDiagn,2017,21:0597)

微生物檢驗(yàn)結(jié)果是臨床診治感染性疾病的重要依據(jù)，明確病原菌，對臨床進(jìn)行針對性抗菌治療至關(guān)重要。血液感染是臨床各類疾病感染的途徑之一，血液培養(yǎng)是直接對血液中微生物進(jìn)行培養(yǎng)，可檢出相應(yīng)的病原體，已成為危重患者病情監(jiān)測和血液微生物感染診斷的重要手段。隨著廣譜或超廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用、器官移植、各種介入檢查治療以及導(dǎo)管置留等手段的實(shí)施，致使臨床耐藥菌、條件致病菌、其他少見細(xì)菌以及院內(nèi)交叉感染的發(fā)生率日益增加[1]。為了解本院血液培養(yǎng)病原菌的構(gòu)成分布及其耐藥性情況，筆者回顧性分析2014年6月至2016年5月間本院采用DL-Bt64全自動血培養(yǎng)儀對2389例血液標(biāo)本培養(yǎng)分離致病菌和用DL-96Ⅱ細(xì)菌測定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)的結(jié)果。旨在分析本院病原菌構(gòu)成分布以及抗菌藥物的敏感性，為臨床治療感染性疾病時制定診療方案、合理選擇抗菌藥物、降低耐藥菌株的產(chǎn)生等方面提供的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 基礎(chǔ)資料 2389例血液培養(yǎng)標(biāo)本為本院2014年6月至2016年5月間就診需要進(jìn)行血液培養(yǎng)的門診、急診和住院患者，臨床主要表現(xiàn)為不明原因的發(fā)熱、體溫過低、嚴(yán)重的局部感染、懷疑有菌血癥或膿毒癥、呼吸頻率加快等癥狀。其中男1554例，女835例，年齡1-60歲。血液培養(yǎng)標(biāo)本均在使用抗生素之前時無菌采集，對同一患者連續(xù)2次分離出同一菌株只統(tǒng)計第一次資料。

1.2 主要儀器與試劑 DL-Bt64全自動血培養(yǎng)儀和DL-96Ⅱ細(xì)菌測定系統(tǒng)由珠海迪爾生物工程有限公司提供，儀器操作嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測。培養(yǎng)基由鄭州人福博賽生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，快速革蘭染色液由(臺資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。質(zhì)控菌株銅綠假單胞菌ATCC 27853、金黃色葡萄球菌ATCC 29213、糞腸球菌ATCC29212、大腸埃希菌ATCC 25922由溫州市康泰生物科技有限公司提供。

1.3 方法 按無菌采集標(biāo)準(zhǔn)操作程序采集在患者出現(xiàn)如高燒、寒戰(zhàn)或發(fā)熱病人發(fā)熱初期、高峰期等臨床癥狀的靜脈血標(biāo)本，成人瓶8-10 ml、兒童瓶采集1-3 ml，每次采集一套(厭氧瓶和需氧瓶)。將血培養(yǎng)瓶置于DL-Bt64血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)，儀器報陽后，從血培養(yǎng)瓶抽取血液立即轉(zhuǎn)種血/麥康凱平皿，置37℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24 h，同時涂片革蘭染色鏡檢予以確認(rèn)，檢出真菌孢子則加種科瑪嘉真菌顯色平皿。若5 d培養(yǎng)儀未報陽性，則發(fā)陰性報告。將分離到的單個菌落用DL-96Ⅱ細(xì)菌測定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。以上操作過程均嚴(yán)格按照第4版《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[2]要求開展，結(jié)果判定參考美國臨床實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)2014年標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 對培養(yǎng)分離鑒定的病原菌構(gòu)成分布以及其耐藥性情況用Excel建立數(shù)據(jù)庫，統(tǒng)計分析由WHONET5.4軟件完成。

2 結(jié)果

2.1 血培養(yǎng)標(biāo)本中菌群分布及菌株構(gòu)成情況 2389例血液培養(yǎng)標(biāo)本分離出病原菌213株，培養(yǎng)陽性率為8.92%。其中G+菌109株占51.17%(109/213)，G-桿菌87株占40.85%(87/213)，真菌17株占7.98%(17/213)。G+球菌中以凝固酶陰性葡萄球菌和金黃色葡萄球菌為主，其他菌株均小于5.00%，G-桿菌中以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和銅綠假單胞菌為主,其他菌株均小于3.00%。真菌以白色念珠菌為主，其他菌株均小于2.00%，菌株構(gòu)成詳細(xì)情況，見表1。

表1 菌群分布及菌株構(gòu)成情況

2.2 血培養(yǎng)分離主要致病菌對常用抗菌藥物的耐藥性 G+球菌對常用抗菌藥物的耐藥情況見表2。G-桿菌對常用抗菌藥物的耐藥情況見表3。真菌對常用抗菌藥物的耐藥情況，其中白色念珠菌對伏立康唑、酮康唑、咪康唑、氟康唑、氟胞嘧啶的敏感率分別為92.31%、92.31%、92.31%、100.00%和100.00%；對益康唑和制菌霉素的耐藥率分別為69.23%和76.92%。

表2 分離主要G+球菌對常用抗菌藥物的耐藥情況耐藥株(n)/耐藥率(%)

表3 分離主要G-桿菌對常用抗菌藥物的耐藥情況(n/%)

3 討論

血液感染是臨床常見的一種可致全身感染，危及患者生命的感染性疾病，具有起病急、病死率較高的特點(diǎn)。由各種病原微生物(細(xì)菌或真菌)和毒素侵入人體血液循環(huán)系統(tǒng)并大量繁殖所引起的疾病，致機(jī)體出現(xiàn)驟發(fā)寒戰(zhàn)、高熱、心動過速、呼吸急促、精神和神志改變等一系列臨床癥狀，嚴(yán)重者可引起休克、彌散性血管內(nèi)凝血和多臟器功能衰竭等后果[4]。隨著廣譜、超廣譜抗菌藥物、抗腫瘤藥物、免疫抑制劑、各種侵襲性操作特別是靜脈導(dǎo)管插管及各種介入性診治手段的應(yīng)用，很容易交叉感染引起敗血癥，導(dǎo)致機(jī)體正常菌群失調(diào)，致耐藥菌、條件致病菌和其他少見細(xì)菌在臨床的發(fā)生率呈上升趨勢。故從血液中培養(yǎng)出病原菌分離菌株，并及時進(jìn)行藥敏監(jiān)測很有必要[5]。

隨著計算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，自動化血培養(yǎng)系統(tǒng)已代替?zhèn)鹘y(tǒng)的手工操作，操作簡便，能快速檢測出血液中是否感染細(xì)菌、真菌及分枝桿菌，自動提示陽性結(jié)果[6]。本院微生物室采用DL-Bt64全自動血培養(yǎng)儀可對血液標(biāo)本進(jìn)行需氧及厭氧培養(yǎng)，為病原菌生長提供有利的生長環(huán)境。對2389例血培養(yǎng)標(biāo)本分離出病原菌213株，培養(yǎng)陽性率為8.92%，低于涂斌等[6]學(xué)者報道的14.94%，這應(yīng)當(dāng)引起臨床的注意，盡量合理使用抗菌藥物。對213株病原菌用DL-96Ⅱ細(xì)菌測定系統(tǒng)結(jié)果顯示，其中G+菌109株占51.17%(109/213)，G-桿菌87株占40.85%(87/213)，真菌17株占7.98%(17/213)。G+球菌中以凝固酶陰性葡萄球菌占24.88%(53/213)和金黃色葡萄球菌占14.55%(31/213)為主，其他菌株均小于5.00%。G-桿菌中以大腸埃希菌占15.02%(32/213)、肺炎克雷伯菌占9.86%(21/213)和銅綠假單胞菌占7.04%(15/213)為主，其他菌株均小于3.00%。真菌以白色念珠菌占6.10%(13/213)為主，其他菌株均小于2.00%。這與鄧紅麗等[7]學(xué)者報道一致。本研究分離致病菌中G+球菌高于G-桿菌的分離率，表明本院血培養(yǎng)樣本以G+球菌為主，病原菌分布較為廣泛。培養(yǎng)陽性率低于文獻(xiàn)報道[6]和菌種多樣化可能是因區(qū)域不同，致病原菌的分布存在一定差異[8]。

快速檢出病原菌以及鑒定出致病菌對抗菌藥物的敏感性，是指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物的首要任務(wù)[9]。本微生物室采用DL-96Ⅱ細(xì)菌測定系統(tǒng)對分離主要病原菌進(jìn)行常用抗菌藥物的耐藥分析，結(jié)果表明，G+球菌的主要致病菌對萬古霉素、利奈唑胺、替考拉寧的敏感率為100.0%，對阿米卡星、慶大霉素、四環(huán)素、氯霉素和頭孢曲松的敏感性均在50.00%以上，未發(fā)現(xiàn)萬古霉素、利奈唑胺和替考拉寧對葡萄球菌的耐藥，表明萬古霉素、利奈唑胺和替考拉寧仍然是臨床治療葡萄球菌的首選藥物。凝固酶陰性葡萄球菌對苯唑西林、青霉素G的耐藥率在為90.0%以上，對環(huán)丙沙星、紅霉素、克林霉素、復(fù)方新諾明、頭孢唑啉以及金黃色葡萄球菌對紅霉素和克林霉素的耐藥性均在50.00%以上，提示臨床應(yīng)避免使用該類藥物。大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯菌對哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢他啶、頭孢曲松、亞胺培南、美洛培南以及銅綠假單胞菌對美洛培南的敏感率均在90.00%以上，說明臨床在治療上述G-桿菌應(yīng)首選哌拉西林/他唑巴坦、美洛培南等抗菌藥物。大腸埃希氏菌對復(fù)方新諾明、阿米卡星、頭孢呋辛、左氧氟沙星，肺炎克雷伯菌對阿米卡星、哌拉西林、頭孢噻肟、頭孢呋辛以及銅綠假單胞菌對復(fù)方新諾明、阿米卡星、頭孢曲松、頭孢噻肟、左氧氟沙星的耐藥性均在50.00%以上，與文獻(xiàn)[10]報道一致，臨床應(yīng)盡量避免使用該類抗菌藥物。白色念珠菌對伏立康唑、酮康唑、咪康唑、氟康唑、氟胞嘧啶的敏感率分別為92.31%、92.31%、92.31%、100.00%和100.00%，提示臨床有真菌感染時，可優(yōu)先考慮使用這些藥物治療。對益康唑和制菌霉素的耐藥率分別為69.23%和76.92%，這些抗真菌藥物盡量少用于真菌感染的治療。其他致病菌對抗菌藥物出現(xiàn)的不同程度耐藥，與近年來抗菌藥物濫用和各種侵襲性操作密切相關(guān)，應(yīng)引起高度重視[11]。特別是臨床出現(xiàn)寒戰(zhàn)、不明原因發(fā)熱、懷疑有菌血癥或膿毒癥等臨床癥狀患者應(yīng)首先對其進(jìn)行血培養(yǎng),及時分離鑒定病原菌以及了解其耐藥性，對臨床合理使用抗菌藥物，可降低或延緩耐藥菌株的產(chǎn)生，避免高耐藥與多藥耐藥菌株的產(chǎn)生，對臨床提高治愈率、降低死亡率有著重要的臨床意義。

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Isolation,identification and drug resistance of pathogenic bacteria isolated from 2389 blood samples

GAOJian-ping,LONGXun-qin,CHENJun-li.

(ClinicalLaboratory，ChengduWestHospital,Chengdu610041,China)

Objective To analyze the isolation and identification of pathogenic bacteria and drug resistance of pathogenic bacteria in 2389 cases of blood samples,and to provide reference for clinical treatment of infectious diseases and rational drug use.Methods A retrospective analysis from June 2014 to May 2016 in our hospital with dir DL-Bt64 (DL-Bt64) testing in 2389 cases of blood samples were isolated and cultured with DL-96 II and pathogenic bacteria identification and drug sensitive test of bacteria testing system of automatic blood culture results.Results Isolated 213 strains of pathogenic bacteria,the positive rate was 8.92%.Among them,109 strains of G+ bacteria accounted for 51.17% (109/213),87 strains of G- were 40.85% (87/213),and 17 strains of fungi accounted for 7.98% (17/213).G+ bacteria with coagulase negative Staphylococcus and Staphylococcus aureus.The detection rates were 24.88% and 14.55%,other strains were less than 5.00%.In G- bacteria,Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa,the detection rates were 15.69%,9.86% and 7.04%,respectively,and the other strains were less than 3.00%.Fungi were mainly Candida albicans,the detection rate was 6.10%,the other strains were less than 2.00%.Coagulase negative Staphylococcus aureus to oxacillin,penicillin resistant G at the rate above 90%,no vancomycin,linezolid and teicoplanin resistance of Staphylococcus aureus.Escherichia coli to cotrimoxazole,levofloxacin,Amikacin,cefuroxime,Klebsiella pneumoniae to Amikacin,piperacillin,cefotaxime and cefuroxime and Pseudomonas aeruginosa to cotrimoxazole,Amikacin,ceftriaxone,cefotaxime,levofloxacin resistance rate was more than 50%,The resistant rate of Candida albicans to the benefit of the drug and the preparation of the bacteria were above 68%.Conclusion Blood culture pathogenic bacteria with G+bacteria,bacterial diversity,bacterial drug resistance is more serious.The identification of pathogenic bacteria in blood culture should be strengthened,and the results of drug resistance of pathogenic bacteria in the area should be analyzed regularly,It has important application value in the treatment of infectious diseases,the development of diagnostic and treatment programs,to avoid the abuse of antibiotics and reduce the production of drug resistant strains.

blood culture;Main pathogenic bacteria;tolerance;Automated blood culture system

1007-4287(2017)04-0597-04

R446.5

A

2016-08-22)