柳清

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站 青海西寧 812100）

應(yīng)用抗體檢測對豬瘟免疫效果的評價研究

柳清

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站 青海西寧 812100）

近些年我國生豬產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)代化、集約化、規(guī)?；l(fā)展勢頭日益壯大，隨之而來的多種新老疫病也出現(xiàn)了新的流行程度、流行范圍，多病原混合感染和繼發(fā)感染、持續(xù)感染和隱性感染、溫和非典型病變等多種形態(tài)共存，對我國豬病的綜合防控提出了新的要求。

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病，多感染豬場內(nèi)母豬，目前臨床表現(xiàn)主要以隱性帶毒和慢性感染為主，是我國要求強制免疫的重要豬病之一。

當(dāng)前免疫接種各類疫苗正成為規(guī)?；i場疫病防控的重要措施，顯然傳統(tǒng)的技術(shù)手段已不能滿足現(xiàn)代化養(yǎng)殖需求。而評價疫苗免疫效果好壞的主要指標(biāo)就是相應(yīng)抗體滴度的高低，免疫后的豬群體內(nèi)抗體達到一定的水平，才能有效避免因相應(yīng)致病原的感染而發(fā)病，因此抗體檢測是和疫苗免疫同等重要的工作，可以為各豬場內(nèi)疫病的綜合防控提供有效的參考，與此同時抗體檢測還可對沒有免疫的豬群監(jiān)測野毒感染的情況，當(dāng)前抗體檢測工作已成為現(xiàn)代化養(yǎng)殖業(yè)監(jiān)測疫病的重要手段。

目前抗體水平檢測的方法種類繁多，優(yōu)劣不一，其中常采用 ELISA 檢測方法用于疫病流行病學(xué)調(diào)查、大批量檢測樣品抗體等監(jiān)測。為初步了解青海省湟源縣豬場豬瘟疫苗的免疫效果好壞，對當(dāng)?shù)夭糠忠?guī)模養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶的豬群進行隨機取樣，應(yīng)用豬瘟間接 ELISA 檢測試劑盒對該地區(qū)部分豬場免疫后 800 份血清抗體效價進行了檢測。根據(jù)監(jiān)測的抗體保護率情況，采取適當(dāng)調(diào)整措施，為本地豬瘟的防控及凈化工作提供科學(xué)的參考?，F(xiàn)報告如下：

1 試驗材料

1.1 材料

隨機采集本地區(qū)部分規(guī)?；i場和散養(yǎng)戶共計 800 份血樣，其中規(guī)?；i場血樣為 600 份，散養(yǎng)戶血樣樣本為 200 份。

1.2 儀器及試劑

各型號移液器及其移液槍頭，5mL 注射器，離心管，小型離心機，酶標(biāo)儀，洗板機等，豬瘟間接ELISA 檢測試劑盒（購于武漢科前生物科技有限公司）等。

2 試驗方法

2.1 血液采集及血清處理

綁定豬后，用 75%酒精棉球?qū)ωi耳靜脈處皮膚消毒處理，將 5mL 注射器呈 45 度插入耳靜脈內(nèi)采血；將采血后的注射器置于 37 ℃環(huán)境中孵育 1～2 h 后，轉(zhuǎn)入離心管中，8 000 rpm 離心 10min，分離血清并標(biāo)記好后低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 間接ELISA檢測方法

操作方法嚴格按照檢測試劑盒說明書進行。

2.3 結(jié)果有效性的判定標(biāo)準

檢測結(jié)果判定：正常情況下，當(dāng)陽性對照樣品D650 值大于等于 0.6，且陰性對照孔平均 D650 值小于 0.3 時檢測結(jié)果有效。檢測樣品陰陽性結(jié)果的判定按照樣品檢測值大于 0.35 時判定該檢測樣品為陽性；樣品檢測值小于 0.35 時判定該檢測樣品為陰性。

3 血清學(xué)檢測結(jié)果

通過豬瘟抗體水平檢測，結(jié)果表明此次養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶的 800 份血液樣品平均豬瘟抗體陽性率為 83.9%，其中規(guī)?；B(yǎng)殖場的豬瘟免疫抗體陽性率高達 85.2%，散養(yǎng)戶的豬瘟免疫抗體的合格率80.0%（見表1）。整體豬瘟免疫抗體合格率均高于國家規(guī)定的免疫群體豬瘟抗體合格率 70%的要求。

表1 豬瘟抗體檢測結(jié)果

4 小結(jié)與分析

從本地區(qū)隨機采取的 800 份規(guī)模場及散養(yǎng)戶血樣的豬瘟免疫抗體監(jiān)測統(tǒng)計結(jié)果可以看出當(dāng)?shù)刎i瘟免疫抗體合格率整體水平較高，經(jīng)與 2015 年同期相關(guān)數(shù)據(jù)比較可知規(guī)模場和散養(yǎng)戶的豬瘟免疫抗體合格率均有提高的趨勢。但規(guī)模養(yǎng)殖場的豬瘟抗體水平普遍比散養(yǎng)戶的高，建議有關(guān)部分及養(yǎng)殖單位采取有效措施加強散養(yǎng)豬的疫苗免疫和抗體監(jiān)測工作，繼續(xù)保持豬瘟免疫效果的良好態(tài)勢。此次檢測結(jié)果已回饋到各采樣養(yǎng)殖單位，并指導(dǎo)了免疫不良的豬場集中進行了豬瘟疫苗的強化免疫。

本次試驗采用間接 ELISA 試劑盒對當(dāng)?shù)夭糠重i場免疫豬瘟疫苗后的血清抗體水平進行了動態(tài)監(jiān)測，整體來看，無論是規(guī)?；i場還是散養(yǎng)戶豬瘟疫苗免疫后抗體水平均能達到 80%以上，說明防制和凈化豬瘟的形勢有所緩解，但與國外發(fā)達國家相比免疫接種工作仍需進一步加強，除選用優(yōu)質(zhì)的豬瘟疫苗產(chǎn)品及制定科學(xué)的免疫方案外，還應(yīng)同步加強免疫后抗體水平的監(jiān)測工作，確保豬群真正產(chǎn)生強大的保護力。疫苗免疫后抗體水平低可能原因有多種，根據(jù)生產(chǎn)實踐調(diào)查分析可能有以下幾種：①免疫程序不合理，各養(yǎng)殖場應(yīng)根據(jù)本場及當(dāng)?shù)匾卟〉膶嶋H流行情況，科學(xué)的指導(dǎo)疫苗免疫；②疫苗保存、運輸?shù)冗^程中不良條件使得疫苗失效時造成的免疫失??；③技術(shù)人員操作不規(guī)范、免疫劑量不足等；④免疫抑制因素和免疫抑制性疾病等；⑤接種的疫苗間的干擾作用等。

豬瘟是危害養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。定期進行豬瘟疫苗免疫是防控豬瘟的重要手段，良好的免疫效果才能真正降低豬瘟的發(fā)生。豬瘟疫苗免疫是否有效可以通過檢測豬群體內(nèi)的豬瘟抗體滴度進行判斷，世界上一些發(fā)達國家已成功通過抗體檢測技術(shù)有效控制了豬瘟的發(fā)生和流行。我國豬瘟綜合防制策略以免疫預(yù)防為主，雖然對豬瘟的發(fā)生和傳播也起到了積極有效的作用，但是當(dāng)前很多不同規(guī)模的豬場并沒有徹底根除豬瘟，甚至尚有相當(dāng)數(shù)量的免疫豬存在沒有獲得足夠的抗體或抗體作用不持久等免疫失敗現(xiàn)象，與此同時在疫苗選擇壓力作用下，豬瘟病毒發(fā)生了較快的變異，致使易感豬群普遍存在，給疫病的防控帶來新挑戰(zhàn)。豬群抗體檢測工作的開展對豬病尤其是一些重大豬病的流行情況實施動態(tài)的監(jiān)測、疫苗免疫效果的評價及免疫程序的修訂等均具有重要的現(xiàn)實指導(dǎo)意義，隨著我國動物疫病防控體系的不斷完善，抗體檢測將成為畜禽養(yǎng)殖過程中疫病監(jiān)測的常態(tài)化工作之一。

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.02.042

柳清（1984-），女，青海人，漢族，本科，助理獸醫(yī)師，研究方向：畜牧獸醫(yī)。