王穎希，李甫，薛盧艷，霍振義，張慶霞，焦章平，唐暉

（1.北京市公安司法鑒定中心，北京 100192；2.北京市東城區(qū)公安司法鑒定中心，北京 100061）

植絨棉簽在案件檢驗中的應(yīng)用3 例

王穎希1，李甫2，薛盧艷1，霍振義1，張慶霞1，焦章平1，唐暉1

（1.北京市公安司法鑒定中心，北京 100192；2.北京市東城區(qū)公安司法鑒定中心，北京 100061）

法醫(yī)遺傳學(xué)；DNA；脫落細(xì)胞；植絨棉簽

1 案例

1.1 案例1

簡要案情：某日，某地發(fā)生一起柴油盜竊案件，現(xiàn)場提取到數(shù)個礦泉水瓶，疑為嫌疑人所留。

DNA提取與檢驗：勘查人員用30μL超純水浸濕彎頭4N6 FLOQSwabs?植絨棉簽（意大利COPAN公司）對瓶口進(jìn)行擦拭。飲料瓶口呈弧形且有螺紋，彎頭棉簽可以與瓶口吻合，使瓶口的脫落細(xì)胞盡可能多地被轉(zhuǎn)移。擦拭完的棉簽直接插回獨立包裝的套管內(nèi)，帶回實驗室用于后續(xù)檢驗。檢驗人員將棉簽頭部取下后放入1.5mL離心管中，在Biomek?FXP實驗室自動化工作站（美國Beckman Coulter公司）用DNA IQTMSystem試劑盒（美國Promega公司）提取DNA。經(jīng)檢驗，得到一名男性的DNA分型結(jié)果（圖1），入庫比中一名違法犯罪人員，并通過DNA數(shù)據(jù)庫串并，成功破獲多起盜竊柴油案件。

圖1 案例1中現(xiàn)場遺留瓶口拭子DNA分型圖譜

1.2 案例2

簡要案情：某日，勘查人員在某現(xiàn)場提取到一盒鑰匙模具及錫紙，送至DNA實驗室進(jìn)行相關(guān)檢驗。

DNA提取與檢驗：對于鑰匙模具，檢驗人員先用30μL超純水浸濕尖頭的4N6 FLOQSwabs?植絨棉簽，用浸濕的一側(cè)擦拭鑰匙模具手持部位，再用未浸濕的另一側(cè)擦拭，同兩步擦拭法[1，2]。然后，檢驗人員將棉簽頭部掰斷放入1.5mL離心管中，加入200μL 5% Chelex-100懸液和10μL蛋白酶K溶液（10mg/mL），浸沒棉簽頭部。經(jīng)檢驗，得到一名男性的DNA分型圖譜（圖2），入庫比中一名前科人員，該信息為案件偵破提供了關(guān)鍵線索。

圖2 案例2中鑰匙模具拭子DNA分型圖譜

1.3 案例3

簡要案情：某日，桑某（女）被家人發(fā)現(xiàn)死于家中，屋內(nèi)有煤爐燃燒，起初家人懷疑煤氣中毒死亡，在給死者換衣時發(fā)現(xiàn)頸部有勒痕和指甲抓痕，遂報案。

DNA提取與檢驗：現(xiàn)場勘查人員運用錐形4N6 FLOQSwabs?植絨棉簽擦拭死者指甲縫，錐形棉簽頭部較小，使所轉(zhuǎn)移的細(xì)胞富集于棉簽頂端。檢驗人員將棉簽頭部取下放入1.5mL離心管中，使用EZ1 DNA Investigator試劑盒（德國QIAGEN公司）提取DNA，最終在死者指甲前端縫隙中檢出包含死者在內(nèi)的兩名女性混合分型（圖3），說明死者生前與另一名女性有過密切的接觸。結(jié)合死者頸部痕跡，推斷死者生前與一名女性嫌疑人有過激烈的打斗。DNA檢驗結(jié)果為該案件的定性提供了依據(jù)，排除了自殺或意外的可能性，也提供了嫌疑人的相關(guān)DNA信息。

圖3 案例3中死者指甲拭子DNA分型圖譜

2 討論

犯罪現(xiàn)場脫落細(xì)胞的檢驗是法醫(yī)DNA檢驗面臨的難題之一。影響脫落細(xì)胞DNA檢驗的因素很多，個體差異、接觸時間、載體屬性等均會影響檢驗的成功率。對于勘查人員和檢驗人員而言，找準(zhǔn)檢材提取部位，使用合適的提取轉(zhuǎn)移工具，采取恰當(dāng)?shù)臋z驗策略，是提高檢出成功率的關(guān)鍵[3]。

在有關(guān)脫落細(xì)胞的案件鑒定過程中，能否運用適當(dāng)方法提取轉(zhuǎn)移DNA，決定著檢驗的成敗。常見的提取方法有粘取、吸附、棉簽轉(zhuǎn)移等，但傳統(tǒng)的棉簽轉(zhuǎn)移有二次轉(zhuǎn)移和外源性污染等風(fēng)險。本文所述案例能成功檢出DNA分型，得益于使用了植絨棉簽轉(zhuǎn)移脫落細(xì)胞。Daley等[4]研究發(fā)現(xiàn)，植絨棉簽釋放被轉(zhuǎn)移的細(xì)胞的能力較強，比其他拭子高20%～60%。Dalmaso等[5，6]研究發(fā)現(xiàn)，植絨棉簽可以提高脫落細(xì)胞的轉(zhuǎn)移率，這可能有以下原因：（1）植絨棉簽材料特殊，具有高吸水性、低保水性及強吸附能力，保證了對DNA的收集和洗脫效率。在采集樣本時，可以最大程度地吸附脫落細(xì)胞，而在消化裂解時吸附的脫落細(xì)胞可以很容易地被釋放出來。（2）植絨棉簽類似于刷子結(jié)構(gòu)，尼龍纖維結(jié)構(gòu)垂直于底部，棉簽與物體的接觸面積較大，整個樣本采集區(qū)域沒有吸收孔，采集的細(xì)胞不會分散和滯留在纖維中，蓬松式纖維結(jié)構(gòu)不會像傳統(tǒng)棉簽?zāi)菢釉斐蓸颖練埩?。?）多種形狀的采集頭適用于不同形狀客體的擦拭，現(xiàn)場勘查人員可以根據(jù)實際情況來選擇不同形狀的棉簽，提高DNA轉(zhuǎn)移率。（4）植絨棉簽具有獨立懸空密封套管，可以使棉簽頭部懸空，擦拭后不會再接觸到其他物體，避免發(fā)生二次轉(zhuǎn)移。楊電等[7]研究發(fā)現(xiàn)，棉簽用套管采集的方式保存，所獲得的DNA量明顯高于用紙袋保存所獲得的DNA量。（5）植絨棉簽頭部預(yù)設(shè)有斷裂點，檢驗人員可以輕松地將棉簽頭部掰斷，直接放入反應(yīng)液中，提高檢驗效率。

值得一提的是，使用植絨棉簽提取樣本有以下注意事項：（1）植絨棉簽本身具有高吸水性，所以在浸濕棉簽時水量不宜過多，否則會導(dǎo)致棉簽干燥緩慢且樣本被稀釋，不利于樣本濃縮。（2）在處理紋理不規(guī)則表面時，應(yīng)依照檢材表面紋理，旋轉(zhuǎn)棉簽進(jìn)行擦拭。（3）樣本采集完成后，應(yīng)直接放入套管進(jìn)行后續(xù)檢驗，盡量避免接觸其他物體。在上述3個案例中，使用植絨棉簽結(jié)合Chelex-100法和磁珠法均檢出DNA分型，說明植絨棉簽適用于法醫(yī)DNA檢驗的常規(guī)提取方法。

[1]Pang BC，Cheung BK.Double swab technique for collecting touched evidence[J].Leg M ed（Tokyo），2007，9（4）：181-184.

[2]Sweet D，Lorente M，Lorente JA，et al.An improved method to recover saliva from human skin：the double swab technique[J].J Forensic Sci，1997，42（2）：320-322.

[3]陳松，李萬水，胡蘭，等.微量DNA：容易忽略的生物物證[J].刑事技術(shù)，2004，（S1）：19-22.

[4]Daley P，Castriciano S，Chernesky M，et al.Comparison of flocked and rayon swabs for collection of respiratory epithelial cells from uninfected volunteers and symptomatic patients[J].J Clin M icrobiol，2006，44（6）：2265-2267.

[5]Dalmaso G，BiniM，Paroni R，et al.Qualification of high-recovery，flocked swabs as compared to traditional rayon swabs for m icrobiological environmental monitoring of surfaces[J].PDA J Pharm Sci Technol，2008，62（3）：191-199.

[6]周晶，黃曉強，蔣海云.采用植絨拭子提取物證破獲系列盜竊案1例[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（3）：256-256.

[7]楊電，劉超，李越，等.生物檢材采集與保存套管的應(yīng)用[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志，2014，29（4）：352-354.

DF795.2

：B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.02.033

1004-5619（2017）02-0219-02

2015-11-30）

（本文編輯：李莉）

王穎希（1986—），女，碩士，主要從事法醫(yī)物證學(xué)研究；E-mail：wangyingxi4722@163.com

唐暉，女，博士，主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證學(xué)研究；E-mail：huihuitangno1@163.com