黃西梅李佳榮駱榮彪譚福林李子橋

(1.廣西百色市右江區(qū)動物疫病預防控制中心,廣西百色 533000; 2.百色農(nóng)業(yè)學校,廣西百色 533000; 3.百色市右江區(qū)陽圩鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站,廣西百色 533000)

商品肉雞禽流感疫苗不同免疫程序免疫效果觀察

黃西梅1李佳榮2駱榮彪1譚福林1李子橋3

(1.廣西百色市右江區(qū)動物疫病預防控制中心,廣西百色 533000; 2.百色農(nóng)業(yè)學校,廣西百色 533000; 3.百色市右江區(qū)陽圩鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站,廣西百色 533000)

為了探索目前右江區(qū)使用的兩種劑型的禽流感疫苗即重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）采用不同方式進行接種免疫，機體產(chǎn)生抗體的情況，本研究以本地商品肉雞為對象，制定了5種不同的免疫程序進行禽流感免疫，采集試驗雞30、45、65、85、105日齡的血清進行免疫抗體檢測，通過對免疫抗體合格率和抗體效價的分析和比較，評價兩種疫苗的免疫效果。結(jié)果顯示，禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）單獨使用于商品肉雞，免疫2次，抗體效價低于4log2；而重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）單獨使用于商品肉雞，免疫2次，免疫后30天抗體效價達9.64，免疫合格率達100%。兩種疫苗交叉使用，免疫后30天抗體效價達8.04，合格率達96.00 %；單獨使用同種疫苗，二免效果優(yōu)于一免效果。

疫苗 免疫方式 免疫效果

世界衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的A類傳染病中，禽類烈性傳染病只有兩種，分別是禽流感和新城疫，目前禽流感和新城疫的防控工作的主要途徑和有效手段仍然是接種疫苗，在什么時間接種何種疫苗，用什么免疫方法才能提高抗體水平，一直是獸醫(yī)工作者和養(yǎng)殖戶關注的問題，重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）都是政府采購苗，也是養(yǎng)殖戶普遍使用的疫苗。右江區(qū)常年雞存欄有250萬左右，年出欄雞有1000多萬羽。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大和禽類交易活動的日益頻繁，禽類受禽流感和新城疫的威脅越來越大，為探索適合右江區(qū)氣候和飼養(yǎng)特點的免疫程序，選擇優(yōu)質(zhì)疫苗，找出免疫失敗的原因，提高免疫效果和技術水平，確保公共安全和畜牧業(yè)的健康發(fā)展。我們于2016年7月至11月在百色農(nóng)校的試驗場的300只雞分成五個試驗組，一個對照組。分別進行禽流感H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）和禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株），用不同免疫方式免疫注射，采集雞30、45、65、85、105日齡的血清，用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗進行抗體檢測，掌握不同免疫方式，禽流感疫苗免疫機體抗體產(chǎn)生情況，為制定適合右江區(qū)養(yǎng)雞特點的禽流感免疫程序提供參與依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗雞

在農(nóng)校實驗雞場選擇未接種禽流感疫苗的健康商品肉雞300只，隨機分成6個組，每組50只，設一個對照組和5個試驗組。按正常飼喂方式，由專人飼養(yǎng)管理。

1.1.2 免疫疫苗

禽流感H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株），由乾元浩生物股份有限公司鄭州生物制藥廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：2016036，有效期：20170317；禽流感-新城疫二聯(lián)疫苗（rlH5-6株），由哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：2016013，有效期：20170320；

1.1.3 器材

微量移液器、一次性96孔V型血凝板、微量振蕩器、1%紅血球、滅菌生理鹽水、被檢血清。

1.1.4 診斷試劑

禽流感病毒H5亞型（Re-6株）血凝抑制抗原和陽性血清，由哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司生產(chǎn)，抗原批號：2015024，有效期2年，陽性血清批號：2015017，有效期：2年。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組及免疫接種

對選擇的健康雞隨機分成5組，分別為A、B、C、D、E、F組，每組50羽，五個試驗組，一個對照組，免疫程序詳見表1。

表1 不同組別的免疫方式

1.2.2 血清采集

無菌采集試驗雞30、45、65、85、105日齡的血樣，所有雞群選擇翅膀內(nèi)側(cè)靜脈穿刺采血，每組采集25份，6次不同日齡共采集900份，每羽雞采血2～3ml左右，室溫靜置24h后分離血清，待用于檢測抗體。

1.2.3 抗體檢測

（1）抗體檢測方法：采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗，嚴格按照《高致病性禽流感診斷技術》（GB/T18936-2003）的操作方法對采集的樣品進行禽流感H5亞型抗體檢測。首先用血凝試驗檢測禽流感抗原的血凝結(jié)，然后配制4單位抗原待用，無菌采集公雞血10毫升，按常規(guī)方法配制1%的紅血球待用。

結(jié)果判定：根據(jù)GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術》制定的檢驗規(guī)程進行判定，H5亞型禽流感HI抗體效價≥5log2（滴度1：32以上）為免疫合格。

2 檢測結(jié)果及分析

本次試驗分別采集30、45、65、85、105日齡的雞血清900份，采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗進行禽流感和新城疫抗體檢測，不同組，不同日齡階段檢測結(jié)果見表2.

表2 H5亞型禽流感抗體合格率和抗體效價（%、log2）

表3 H5亞型禽流感抗體效價趨勢圖

（1）試驗A、B組在分別用禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫1次和2次，結(jié)果產(chǎn)生的禽流感抗體的合格率和抗體效價比較低，盡管是二免比一免高，但最高只有二免后65日齡抗體合格率和效價分別為44.0%、3.40，達不到國家對禽流感免疫抗體合格率達70%的要求。這一結(jié)果與曹立輝等[1]的報道有一致之處。據(jù)有關資料報道，禽流感最低保護臨界值4log2-6log2 之間，且必須大于4log2[2]。如果雞群禽流感抗體水平長期低于4log2就不實現(xiàn)有效保護。而據(jù)楊飛燕等[3]報道，禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗的新城疫免疫效果要比禽流感的免疫效果好，使用H5-ND15一免、30日齡二免后45天新城疫抗體合格率和效價達峰值100%和7.3log2，禽流感的抗體效價低于4log2。原因可能是H5-ND二聯(lián)苗是將表達禽流感H5亞型病毒抗原性的禽流感病毒基因片斷插入雞新城疫Lasota系弱毒毒株的基因鏈中，使其在表達雞新城疫病毒抗原性的同時表達禽流感H5亞型病毒的抗原性。它所刺激雞體產(chǎn)生的針對禽流感H5亞型病毒的抗體是由經(jīng)重組的雞新城疫Lasota弱毒株在雞體內(nèi)復制過程中附帶產(chǎn)生的。因此，禽流感抗體的產(chǎn)生容易受雞新城疫抗體的影響。也是使用H5-ND二聯(lián)苗時新城疫抗體水平高于禽流感抗體水平的原因。這也是這種疫苗的優(yōu)勢所在。

另外，有研究以雞痘病毒為載體表達H5亞型禽流感基因的重組疫苗接種SPF的試驗結(jié)果也有類似情形，即免疫后抗體水平較低的情況下仍然使機體產(chǎn)生對強毒攻擊的抵抗力[4]，禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗是否也存在這種情況未見相關報道。基于實驗室條件，不能開展強毒攻擊保護實驗，故不能排除這種可能。其他具體原因有待進一步研究證實。

（2）C組15日齡時用禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫一次，35日齡用重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）免疫。結(jié)果首免到30日齡時，由于機體內(nèi)不能產(chǎn)生體液免疫，禽流感抗體一直處于下降的狀態(tài)，抗體的合格率維持在0的水平、但在雞體內(nèi)產(chǎn)生免疫記憶，使用重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）后10天，機體產(chǎn)生抗體較快，45日齡抗體合格率和效價分別已達到80.00、6.00，65日齡達最高96.00、8.04，之后一直維持較高水平。到105日齡處于保護期內(nèi)。

（3）D、E組是用重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）免疫1次和2次，結(jié)果顯示同一種苗兩次免疫后、抗體水平都比一次免疫的高。特別是重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株），二次免疫后30天抗體合格率達100%，并能維持到105日齡。這也符合了滅活苗具有穩(wěn)定及誘導產(chǎn)生的抗體水平均一的特點。

3 結(jié)語

（1）A組兩次禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫后，抗體效價低于4log2，可見單獨用禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗免疫本地商品肉雞的禽流感免疫效果不佳。

（2）如果使用H5-ND二聯(lián)苗做基礎免疫，最好配合使用重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗，間隔時間20d左右，以確保禽流感抗體水達到有效保護。

（3）禽流感滅活苗比禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗效果好。在禽流感威脅較大的情況下，建議使用重組禽流感病毒H5亞型二價疫苗（Re-6株+Re-8株）進行免疫，以取得安全有效的免疫效果。

（4）疫苗實施2次免疫比1次免疫效果要好，不僅抗體提高免疫質(zhì)量和合格率，抗體水平下降緩慢且維持較長的時間，雞群具有較高較長的抗病能力。建議在做好禽流感首免的基礎上，及時加強二次免疫，確保免疫合格率在70%以上。

[1] 曹立輝，盧冬梅，李秀英等.禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rlH5-6株）對商品肉雞的免疫效果觀察（[J].中國家禽，2011，33（4）：61-62.

[2] 吳庭才，張春杰，郭務鵬等.禽流感母源抗體消長規(guī)律和免疫保護抗體臨界值的測定 [J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2007.32（3）：24-28.

[3] 楊飛燕，劉穎，張廉等.禽流感-新城疫重組二聯(lián)活疫苗與重組禽流感滅活疫苗組合免疫效果觀察[J].中國動物檢疫，2015，32（1）：74-77.

[4] 賈立軍，張艷梅，李軍偉等.H5亞型禽流感重組雞痘病毒載體疫苗的免疫效力 [J].揚州大學學報（農(nóng)業(yè)與生命科學版），2003.24（2）：11-13.