黃娟萍，莊滿賢，黃大森，陳 元，蕭雪瑩，王 霆，王顯著

(廣州一品紅制藥有限公司研發(fā)中心，廣東 廣州510765)

高效液相色譜法測定芩香清解口服液中黃芩苷的含量

黃娟萍*，莊滿賢，黃大森，陳 元，蕭雪瑩，王 霆，王顯著#

(廣州一品紅制藥有限公司研發(fā)中心，廣東 廣州510765)

目的：建立高效液相色譜法測定芩香清解口服液中黃芩苷含量的方法，以建立芩香清解口服液的質量控制標準。方法：色譜柱為Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)，檢測波長為280 nm，流速為1.0 ml/min，進樣量為10 μl，柱溫為30 ℃。結果：黃芩苷質量濃度在2.409～77.080 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好，平均加樣回收率100.0%，RSD為1.7%。結論：本研究方法操作簡便、準確度高、重復性好，可用于芩香清解口服液的質量控制。

芩香清解口服液； 質量標準； 高效液相色譜法

芩香清解口服液由黃芩、廣藿香、蟬蛻、石膏、葛根、大黃、芍藥等12味中藥制成，具有疏散風熱、清瀉里熱、解毒利咽的功效，主要用于小兒上呼吸道感染表里俱熱證，癥見發(fā)熱、鼻塞、流涕、咳嗽、咽紅腫痛、便秘、口渴煩躁、舌紅苔黃、脈洪數(shù)等者。臨床研究表明，其在治療小兒急性上呼吸道感染表里俱熱證是有效及安全的[1]。 芩香清解口服液的處方藥材較多，成分復雜，因此建立完善的制劑質量標準對產(chǎn)品質量控制意義較大。為保障本品的質量可控性，本研究對芩香清解口服液中黃芩苷的含量進行測定。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，DAD檢測器，Chem Station Edition數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；Sartorius CPA225D型十萬分之一天平(德國賽多利斯公司)；Masrer-QUT型純水機(上海和泰儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑

芩香清解口服液[太陽石(唐山)藥業(yè)有限公司，批號：20150501、20150502、20150503；廣州一品紅制藥有限公司，批號：20150801、20150802、20150803]。黃芩苷對照品(批號：110715-201318)購買于中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為實驗室自制超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液：精密吸取本品5 ml，置于100 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.2 對照品溶液：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1 ml含18 μg的溶液，即得。

2.1.3 陰性對照溶液：按處方比例分別稱取除黃芩外的其余藥味，按處方制備方法制備缺黃芩陰性樣品，再按照“2.1.1”項下方法制備陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，色譜柱為Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)；檢測波長為280 nm；流速為1.0 ml/min；進樣量為10 μl；柱溫為30 ℃。

2.3 系統(tǒng)適應性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，理論板數(shù)按黃芩苷峰面積計算≥2 500。黃芩苷與相鄰峰之間分離度>1.5，表明陰性對照測定無干擾，見圖1。

A.陰性對照溶液；B.對照品溶液；C.供試品溶液A. negative control solution; B. control solution; C. test solution圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC

2.4 精密度試驗

取“2.1.2”項下對照品溶液，按照“2.2”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，計算黃芩苷峰面積的RSD=0.4%。結果表明，儀器精密度良好。

2.5 線性關系考察

按“2.1.2”項下方法分別配制質量濃度為2.409、4.818、9.636、19.270、38.540、57.810、77.080 μg/ml的溶液，按照“2.2”項下色譜條件分別進樣10 μl，記錄色譜圖。以對照品溶液濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得線性回歸方程Y=37.244 56X+3.629 44，r=0.999 97，結果表明黃芩苷質量濃度在2.409～77.080 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好。

2.6 重復性試驗

取同一批樣品(批號：20150501)，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液6份，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，計算黃芩苷含量的平均值(n=6)為4.6 mg/ml，RSD為0.8%。結果表明，本方法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.1.1”項下供試品溶液(批號：20150501)適量，分別于室溫(25 ℃)下放置0、3、7、13、22、48 h時按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，計算黃芩苷含量RSD=1.3%(n=6)。結果表明，供試品溶液在室溫下48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 中間精密度試驗

由2位不同分析員，在不同時間分別取同一批樣品(批號：20150501)，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液6份，并使用不同的儀器進行分析，記錄色譜圖并計算黃芩苷含量RSD=1.0%(n=12)。結果表明，本方法中間精密度良好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量的供試品(批號：20150501)9份，每份2.5 ml，分別加入低、中、高3個質量濃度(分別為0.240 62 mg/ml)的黃芩苷對照品40、50、60 ml，每個質量濃度3份，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗結果

2.10 黃芩苷的含量測定

取6批芩香清解口服液樣品(批號：20150501、2150502、20150503、20150801、2150802、20150803)，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液各2份，按照“2.2”項下色譜條件進樣測定，采用外標法計算芩香清解口服液中黃芩苷的含量，見表2。

表2 黃芩苷的含量測定結果

3 討論

3.1 測定成分的選擇

黃芩以根入藥，味苦、性寒，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效，現(xiàn)多與其他藥物組合成中藥復方制劑，治療感冒、發(fā)熱和流感病毒感染等疾病[2-3]。黃芩含多種黃酮類化合物，主要為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等[4-6]，而黃芩苷為黃芩的主要有效成分，常被選擇為制劑的質量控制指標[7-10]。黃芩為本方中君藥，故選擇其主要成分黃芩苷作為指標成分進行測定。

3.2 波長及流動相的選擇

在200～400 nm對樣品進行波長掃描，黃芩苷在280 nm處有最大吸收，掃描結果與相關研究[8-12]結果一致，故選擇280 nm作為檢測波長。本研究曾考察過多種溶液作為流動相，包括不同比例的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸溶液，發(fā)現(xiàn)甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)作為流動相時，黃芩苷的分離度及峰性狀是最好的，故選擇此流動相[13-16]。

3.3 耐用性試驗

本研究考察了色譜條件中的流速、柱溫、波長、流動相比例、色譜柱等發(fā)生微小變化時，黃芩苷含量測定結果受影響的程度。結果表明，流速分別為0.95、1.00、1.05 ml/min時，黃芩苷含量RSD=1.1%(n=6)；柱溫分別為20、30、40 ℃時，黃芩苷含量RSD=0.0%(n=6)；波長分別為270、280、290 nm時，黃芩苷含量RSD=0.0%(n=6)；流動相分別為甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=45 ∶55 ∶0.2)、甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2)、甲醇-水-磷酸(V∶V∶V=49 ∶51 ∶0.2)時，黃芩苷含量RSD=1.1%(n=6)；色譜柱分別為Thermo ODS HYPERSIC色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、依利特Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)時，黃芩苷含量RSD=0.0%(n=6)，因此本方法耐用性較好，適用范圍廣。

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Content Determination of Baicalin in Qinxiangqingjie Oral Liquid by HPLC

HUANG Juanping, ZHUANG Manxian, HUANG Dasen,CHEN Yuan, XIAO Xueying, WANG Ting, WANG Xianzhu

(Research and Development Center, Guangzhou Yipinhong Pharmaceutical Co., Ltd., Guangdong Guangzhou 510760, China)

OBJECTIVE：To establish the method for content determination of baicalin in Qinxiangqingjie oral liquid by HPLC, so as to establish the quality control specification of Qinxiangqingjie oral liquid. METHODS：The chromatographic column was Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm), the mobile phase was methanol - water - phosphoric acid(V∶V∶V=47 ∶53 ∶0.2), with detective wave length of 280 nm, flow rate of 1.0 ml/min, sample size of 10 μl and column temperature of 30 ℃. RESULTS：Baicalin in 2.409 μg/ml-77.080 μg/ml had good linear relationship, the average recovery rate was 100.0%,RSDwas 1.7%. CONCLUSIONS：The method is simple, high accuracy and good repeatability, which could be used for quality control of Qinxiangqingjie oral liquid.

Qinxiangqingjie oral liquid； quality standards； HPLC

R927.2

A

1672-2124(2017)04-0526-04

2016-11-17)

*工程師，碩士。研究方向：新藥研發(fā)。E-mail：390447099@qq.com

#通信作者：高級工程師，碩士。研究方向：新藥研發(fā)。E-mail：wxz971509@163.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.04.037