岳文婧

可溶性細(xì)胞間粘附分子-1及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在糖尿病合并多發(fā)性骨髓瘤患者血清中的表達(dá)水平

岳文婧

目的 探討可溶性細(xì)胞間粘附分子-1(sICAM-1)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在糖尿病合并多發(fā)性骨髓瘤(MM)患者血清中的表達(dá)水平及其關(guān)系。方法 隨機(jī)選擇60例MM患者(實(shí)驗(yàn)組)以及40例健康體檢者(對(duì)照組)為研究對(duì)象,觀察和對(duì)比不同臨床分期和不同腫瘤量MM患者血清sICAM-1及VEGF的表達(dá)水平。結(jié)果 健康對(duì)照組的sICAM-1、VEGF的表達(dá)水平分別為(287±81)μg/L、(113±78)mg/L，實(shí)驗(yàn)組患者血清中sICAM-1及VEGF的表達(dá)水平則分別為(375±100)μg/L、(614±205)mg/L，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。sICAM-1及VEGF表達(dá)水平隨著MM腫瘤量的增加和臨床分期增高而上升(P<0.05)。MM患者血清中sICAM-1濃度與VEGF濃度呈正相關(guān)。結(jié)論 sICAM-1及VEGF在MM患者血清中均呈現(xiàn)出高表達(dá)情況，且在不同時(shí)期MM患者中均有不同程度的增高。因此VEGF及sICAM-1的濃度或許可作為監(jiān)測(cè)MM患者病情的指標(biāo)之一。

可溶性細(xì)胞間粘附分子-1；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；糖尿病合并多發(fā)性骨髓瘤

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:725～727)

糖尿病合并多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是惡性漿細(xì)胞病中最為常見的一種類型[1-3]。多發(fā)性骨髓瘤特征是單克隆漿細(xì)胞惡性增殖并且分泌大量單克隆免疫球蛋白，易引起廣泛骨質(zhì)破壞、反復(fù)感染等一系列臨床表現(xiàn)并導(dǎo)致了不良后果[4-6]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)參與刺激內(nèi)皮細(xì)胞增生，增強(qiáng)血管滲透，是一種影響血管通透性的因子[7]。為提高對(duì)糖尿病合并多發(fā)性骨髓瘤(MM)診斷和治療水平，本研究分析不同臨床分期患者血清中可溶性細(xì)胞間粘附分子-1(sICAM-1)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)水平以及兩者在實(shí)驗(yàn)中所表現(xiàn)的相關(guān)性，探究其在MM診斷及治療中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇MM患者60例，其中男性32例，女性28例，年齡20～70歲，平均(50.2±3.2)歲；再根據(jù)腫瘤量分組：低腫瘤量18例，中腫瘤量21例，高腫瘤量21例；按照臨床分期分組，Ⅰ期15例，Ⅱ期23例，Ⅲ期22例。健康體檢者40例，其中男性21例，女性19例，年齡20～69歲，平均年齡(49.2±2.3)歲，該組均無糖尿病、高血脂、肺、腎疾病等情況。各組性別、年齡等基本情況均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

受試者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽靜脈血5 ml于試管中，在室溫下靜置30 min，然后以3 500轉(zhuǎn)/分鐘，(離心半徑為6 cm)離心15 min分離血液，將分離的血清置于-80 ℃保存，待測(cè)。

VEGF測(cè)定:運(yùn)用雙抗體夾心ABC-ELISA法。取適量的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的VEGF單抗包被于酶標(biāo)板上，VEGF和抗體結(jié)合，從而形成免疫復(fù)合物鏈接在板上。加入OPD，當(dāng)出現(xiàn)黃色時(shí)，加入終止液硫酸，顏色變深，在492 nm處測(cè)OD值，由于VEGF與OD的值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求得VEGF濃度。其中具體的操作步驟如下：(1)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：取8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔，向每孔中加入樣品稀釋液90 μl,將第1個(gè)孔加入標(biāo)準(zhǔn)品90 μl，混合均勻，后用加樣器取出95 μl,將其加入第2個(gè)孔中，如此反復(fù)操作，直到第7孔時(shí)，去除90 μl棄去。第8孔為空白對(duì)照組。(2)加樣：向每個(gè)待測(cè)樣品孔中加入90 μl待測(cè)樣品。(3)將反應(yīng)板置于37 ℃下2 h。(4)洗板：用洗滌液將反應(yīng)板洗滌4次，向?yàn)V紙上印干。(5)向每孔中加入第一抗體工作液40 μl。(6)將反應(yīng)板置于37 ℃下1 h。(7)洗板：用洗滌液將反應(yīng)板洗滌4次，向?yàn)V紙上印干。(8)向每孔中加入酶標(biāo)記抗體工作液90 μl。(9)將反應(yīng)板置于37 ℃下1 h。(10)洗板：用洗滌液將反應(yīng)板洗滌4次，向?yàn)V紙上印干。(11)向每孔中加入底物工作液90 μl,將其置于37 ℃暗處反應(yīng)7 h。(12)向每孔中加入一滴終止液將其混合均勻。(13)在492 nm處測(cè)吸光值。

同樣sICAM-1也采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 健康對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組患者血清中sICAM-1和VEGF表達(dá)水平的比較

健康對(duì)照組血清sICAM-1和VEGF顯著低于MM組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血清中sICAM-1和VEGF表達(dá)水平 比較

2.2 MM患者血清中sICAM-1及VEGF比較

sICAM-1及VEGF在血清中的表達(dá)水平隨著腫瘤量增加和臨床分期增高而上升，兩者具有正相關(guān)性(P<0.05)，見表2。

表2 MM患者血清中sICAM-1及VEGF比較

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤是惡性漿細(xì)胞病中最常見的一種類型，其伴隨著單克隆抗體產(chǎn)生為特征的一種克隆性血液病。sICAM-1是細(xì)胞表面粘附分子中的重要一員，是一種單鏈糖蛋白，其主要存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞的表面。這些粘附分子會(huì)因?yàn)檠装Y、腫瘤自身免疫疾病等的出現(xiàn)而在血液中濃度升高。血清中sICAM-1參與細(xì)胞的識(shí)別和粘附，在介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)中有重要意義。本研究顯示，MM患者血清的sICAM-1水平顯著高于正常對(duì)照組。在多數(shù)情況下，sICAM-1基本不表達(dá)或很少表達(dá)，然而當(dāng)機(jī)體處于炎性細(xì)胞分子攻擊或其它因素刺激后，sICAM-1則表達(dá)于多種細(xì)胞表面，從而促炎癥的產(chǎn)生與發(fā)展[8-9]。該研究中發(fā)現(xiàn)MM患者血清的sICAM-1的含量隨著患者腫瘤量的增加而增加。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子是一種特異性極強(qiáng)的作用于內(nèi)表皮細(xì)胞的細(xì)胞因子，有強(qiáng)大的促血管形成能力和增加血管通透性作用。MM患者的骨髓瘤細(xì)胞分泌OAF、淋巴細(xì)胞毒素等激活破骨細(xì)胞，可使骨質(zhì)疏松，導(dǎo)致局部腫塊[10]。這一過程離不開血管生成因子的調(diào)控，特別是VEGF在當(dāng)中起著至關(guān)重要的作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子是一種具有肝素結(jié)合活性的二聚體糖蛋白，可以促進(jìn)血管發(fā)生，內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，從而維持血管的正常狀態(tài)和完整的結(jié)構(gòu)。人VEGF基因其mRNA可形成5種同分異構(gòu)體。研究發(fā)現(xiàn)，在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，第一，由于缺氧可誘導(dǎo)VEGF基因的轉(zhuǎn)錄，使得VEGFmRNA的穩(wěn)定性增強(qiáng)，促進(jìn)VEGF的表達(dá)；第二，B細(xì)胞衍生的細(xì)胞因子對(duì)T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等的分泌作用是Tnf-α、IL-6等活化，誘導(dǎo)VEGF表達(dá)并使其與特異性受體結(jié)合；第三，MM患者中，其血管生成因子和血管抑制因子之間的穩(wěn)態(tài)遭到破壞，從而影響了機(jī)體對(duì)MC的免疫應(yīng)答效應(yīng)，使得血液中VEGF含量升高[11-12]。血管內(nèi)皮細(xì)胞上一種叫囊泡小體的細(xì)胞器與基膜作用形成一些有利于大分子物質(zhì)通過的結(jié)構(gòu)，VEGF就是通過調(diào)節(jié)這些結(jié)構(gòu)的開啟來增加血管通透性的。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在腫瘤研究中被首次發(fā)現(xiàn)。它能夠使小靜脈對(duì)大分子物質(zhì)的通透性增加，使得胸水增加。MM患者血液中VEGF高于生理濃度，從而促進(jìn)腎小球毛細(xì)血管的內(nèi)表皮細(xì)胞的增殖和分裂，同時(shí)促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞中膠原酶等血管活性物質(zhì)的釋放增強(qiáng)了血管的通透性，從而形成蛋白尿或微蛋白尿。

本研究顯示，MM患者組血清中sICAM-1以及VEGF均顯著高于健康對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。已有研究表明，體內(nèi)有某些因素作用于腫瘤細(xì)胞，使其產(chǎn)生過量的sICAM-1，從而導(dǎo)致MM患者血清中sICAM-1表達(dá)水平上升。血清中sICAM-1以及VEGF的含量與不同MM患者的臨床分期有關(guān)，并且MM患者腫瘤量越多，病情就越嚴(yán)重，相應(yīng)的血清中sICAM-1以及VEGF的表達(dá)水平就越高。從研究數(shù)據(jù)可以看出，MM患者血清中VEGF和sICAM-1存在正相關(guān)關(guān)系,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明有可能其中一種因子為另一種因子的產(chǎn)生起到了促進(jìn)作用。

綜上所述，MM患者血清中VEGF和sICAM-1的表達(dá)水平可以作為MM患者病情診斷和療效判斷的依據(jù)。

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(編輯：甘 艷)

Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1 Vascular Endothelial Growth FactorExpression Levels in Serum and Diabetic Patients with Multiple Myeloma Patients

YUEWenjing.

TheFirstPeople'sHospitalofHuizhou,Huizhou,516003

Objective To investigate the soluble intercellular adhesion molecule-1(sICAM-1)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in diabetic patients with multiple myeloma(MM)relationship between the expression of serum levels.Methods 60 cases of MM patients(experimental group)and 40 healthy volunteers(control group)were randomly selected for the study,different clinical stages and different tumor volume MM serum expression levels of sICAM-1 and VEGF were observed and compared.Results sICAM-1,the expression levels of VEGF in the control group were(287±81) μg/L,(113±78) mg/L,the expression levels of the experimental group sICAM-1 and VEGF,respectively up(375±100) μg/L,(614±205) mg/L,and the control group were significantly different(P<0.05).sICAM 1-concentration and the concentration of VEGF was positively correlated with the serum.Conclusion sICAM-1 and VEGF in the serum of patients with MM in both showed high expression,and have increased in different degrees in different periods in MM patients.Therefore,VEGF and sICAM-1 concentration or as an indicator of the condition of patients with MM license.For patients with clinical manifestations and progression of MM patients has extremely important reference value.

Soluble intercellular adhesion molecule-1;Vascular endothelial growth factor;Diabetic patients with multiple myeloma

廣東省惠州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2015Y053)

516003 廣東省惠州市第一人民醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.05.009

R733.3

A

1001-5930(2017)05-0725-03

2016-07-20

2016-12-08)