王寶麗 李思茹 徐柯心 林瑞超

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·論著·

清血八味片中鈣離子的含量測定

王寶麗 李思茹 徐柯心 林瑞超

目的 建立清血八味片中鈣離子的含量測定方法。方法 采用化學(xué)鑒別法進(jìn)行清血八味片的鈣鹽與硫酸鹽的鑒別反應(yīng)；分別對(duì)清血八味片樣品的處理方法及測定方法進(jìn)行考察；將樣品經(jīng)炭化后灰化，采用乙二胺四乙酸二鈉絡(luò)合滴定法測定鈣離子含量。結(jié)果 確定樣品最佳處理?xiàng)l件：在調(diào)壓電爐上炭化1小時(shí)至炭化完全后，置于馬弗爐中在700～800℃下灰化6小時(shí)；測定方法的重復(fù)性試驗(yàn)RSD值為0.32%(n=6)，加樣回收率為98.67%～101.25%，RSD值為0.97%(n=6)，均符合定量分析要求；3批清血八味片樣品的鈣離子含量分別為17.40%、19.34%及20.69%。結(jié)論 該方法操作簡便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于清血八味片中鈣離子的含量測定。

清血八味片； 寒水石； 石膏； 鈣離子； 含量測定

清血八味片(蒙名：琪孫黑木拉-8)是常用的蒙醫(yī)藥復(fù)方制劑，具有清訌血功效，用于血熱頭痛、口渴目赤、中暑等病癥，臨床上主要治療高血壓、高脂血癥、高血脂、中暑。處方是由寒水石(涼制)340 g、紫草340 g、土木香52 g、人工牛黃44 g、梔子140 g、瞿麥60 g、石膏42 g、甘草20 g八味藥組成?！吨袊嗣窆埠蛧l(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(蒙藥分冊(cè))1998年版中收載清血八味膠囊及清血八味散，均缺乏鑒別項(xiàng)和含量測定項(xiàng)[1]。2009年國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布清血八味片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立了紫草、土木香、人工牛黃的薄層鑒別及梔子苷的含量測定，未對(duì)寒水石及石膏成分作定量測定。清血八味的散劑、膠囊及顆粒等制劑中，植物藥化學(xué)成分的薄層色譜鑒別及高效液相色譜法的含量測定已有文獻(xiàn)報(bào)道[2-6]，但目前尚無關(guān)于制劑中礦物藥寒水石及石膏的定性及定量測定方法的報(bào)道。礦物藥寒水石作為方中君藥用量較大，且石膏與寒水石主成分相同，有必要對(duì)兩者的含量測定制定檢測方法。預(yù)實(shí)驗(yàn)中按照《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥材)理化鑒別試驗(yàn)[7]及《中華人民共和國藥典》(2015版)通則0301項(xiàng)下的一般鑒別試驗(yàn)[8]證明方中寒水石為北寒水石，主含二水硫酸鈣(CaSO4·2H2O)。經(jīng)涼制后的寒水石[9]失去結(jié)晶水，主含硫酸鈣(CaSO4)。方中石膏主含二水硫酸鈣[10]，經(jīng)水煎后入藥，且石膏在水中的溶解度較低。寒水石及石膏均含有鈣離子，故考慮以鈣離子總量作為控制清血八味片中寒水石及石膏成分的控制指標(biāo)。本研究利用EDTA絡(luò)合滴定法測定清血八味片中鈣離子的含量。

1 材料與方法

1.1 藥物

清血八味片由內(nèi)蒙古蒙奇藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)分別為20150602、20150901、20160302，3批樣品均為市售樣品。

1.2 試劑

二水硫酸鈣為分析純(北京化工廠，批號(hào)20140516，CaSO4·2H2O含量不少于99.0%)；乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)標(biāo)準(zhǔn)試劑(0.05 mol/L，國家化學(xué)試劑質(zhì)檢中心，批號(hào)201608)；鈣黃綠素指示劑(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20150520；按藥典規(guī)定，取鈣黃綠素0.1 g，加氯化鉀10 g，研磨均勻，即得)；甲基紅指示劑(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20160102)，取甲基紅0.05 g，加3.7 mL的0.05 mol/L氫氧化鈉溶液使溶解，加水稀釋至100 mL，即得。氫氧化鉀、氫氧化鈉均為分析純AR，購自西隴化工股份有限公司。氯化鉀、草酸銨、氯化鋇、醋酸鉛、醋酸銨、氨水、硝酸、醋酸、鹽酸(HCL含量為36%～38%)均為分析純AR，購自北京化工廠，水為屈臣氏蒸餾水。

1.3 儀器

馬弗爐，1/萬型電子天平，帶調(diào)壓器電爐(1000 W，220 V)，250 mL錐形瓶，25 mL酸式滴定管，50 mL瓷質(zhì)坩堝、試管等。

1.4 理化鑒別

取供試品粉末0.2 g，加稀鹽酸10 mL，加熱使溶解，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.4.1 檢查鈣鹽 取供試品溶液2 mL，加甲基紅指示液2滴(溶液呈粉紅色)，用氨試液中和(溶液呈黃色)，再滴加鹽酸至恰呈酸性(溶液呈粉紅色)，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀鹽酸。上述鑒別反應(yīng)呈陽性，結(jié)果證明供試品中存在鈣鹽。

1.4.2 檢查硫酸鹽 (1)取供試品溶液2 mL，滴加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。(2)取供試品溶液2 mL，滴加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。(3)取供試品溶液1 mL，加鹽酸，不生成白色沉淀(與硫代硫酸鹽區(qū)別)。上述三個(gè)鑒別反應(yīng)均為陽性，結(jié)果證明供試品中存在硫酸鹽。

1.5 含量測定

1.5.1 供試品的制備 取供試品細(xì)粉約0.24 g，精密稱定，置50 mL瓷質(zhì)坩堝內(nèi)，敞口置于帶調(diào)壓器電爐上(1000 W，220 V)，炭化1小時(shí)，至炭化完全，所有操作均在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。將樣品炭化完全的坩堝蓋上蓋，至馬弗爐中，700～800℃灰化6小時(shí)，至灰化完全，放冷，備用。

1.5.2 測定方法 將坩堝內(nèi)的灰分加稀鹽酸10 mL，加熱使溶解，將溶液轉(zhuǎn)移至250 mL錐形瓶中，用蒸餾水洗坩堝3～4次，最終加水總量為100 mL，滴加甲基紅指示液1滴，滴加氫氧化鉀試液至溶液顯淺黃色，再繼續(xù)多加5 mL，加鈣黃綠素指示劑少量(約0.1 g)，用乙二胺四乙酸二鈉滴定液(0.05 mol/L)滴定，至溶液的黃綠色熒光消失，并顯橙色,按照2015版《中華人民共和國藥典》(一部)石膏項(xiàng)下的測定方法[10]進(jìn)行。

1.5.3 空白試驗(yàn) 按照1.5.1項(xiàng)下的方法制備不加入供試品的空白溶液，測得消耗乙二胺四乙酸二鈉滴定液(0.05 mol/L)0 mL。

1.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 平行稱取6份供試品細(xì)粉(批號(hào)20150602)各0.24 g，精密稱定，按照1.5.1項(xiàng)下方法制備供試品，按照1.5.2項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，按供試品制備方法進(jìn)行制備及含量測定，計(jì)算RSD值。結(jié)果表明重復(fù)性良好，見表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)(n=6)

表2 加樣回收率試驗(yàn)(n=6)

1.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已知含量的清血八味片樣品(批號(hào)20150602)各0.12 g，精確加入一定量的二水硫酸鈣對(duì)照品，按1.5.1供試品制備方法制備，按1.5.2測定方法測定每份含量，計(jì)算加樣回收率及RSD值。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度高，見表2。

2 結(jié)果

取清血八味片樣品按照1.5.1項(xiàng)下的方法處理，按照1.5.2項(xiàng)下的方法進(jìn)行含量測定，3批樣品的測定結(jié)果見表3。

表3 清血八味片中鈣含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 供試品制備方法考察

實(shí)驗(yàn)中首先對(duì)供試品取樣量進(jìn)行了考察，比較了0.1 g、0.2 g、0.3 g、0.5 g對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，為了滿足消耗的滴定液體積大于20 mL[11]，并盡量減小滴定誤差，最終選擇0.24 g的取樣量。清血八味片中有機(jī)物成分較多，對(duì)鈣離子絡(luò)合滴定的干擾較為嚴(yán)重，故樣品處理方法的選擇顯得尤為關(guān)鍵。參考有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[11-14]，嘗試了不同的樣品處理方法，若將樣品細(xì)粉直接加入稀鹽酸，溶液較渾濁，無法觀察到滴定終點(diǎn)；另外，若將樣品細(xì)粉加入稀鹽酸后，過濾取濾液或離心取上清液，溶液顯棕黃色，與滴定終點(diǎn)顏色接近，影響滴定終點(diǎn)的判別。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用先炭化后灰化的處理方法，可有效減少其他化學(xué)成分對(duì)滴定方法的干擾。進(jìn)一步優(yōu)化樣品處理?xiàng)l件，樣品炭化1小時(shí)后炭化完全(即無煙)，灰化溫度選擇700～800 ℃，灰化時(shí)間第一次選擇6小時(shí)，第二次選擇2小時(shí)，第三次選擇2小時(shí)，三次稱重結(jié)果表明第二、三次灰分重量并未減少，故只需灰化6小時(shí)即可。

3.2 含量測定的方法學(xué)考察

絡(luò)合滴定過程中，溶液的酸堿度對(duì)絡(luò)合物的穩(wěn)定性影響很大，所以本實(shí)驗(yàn)對(duì)稀鹽酸用量、加水總量及氫氧化鉀試液用量分別進(jìn)行了考察。

3.2.1 稀鹽酸用量的選擇 取供試品細(xì)粉3份，按“1.5.1”項(xiàng)下的方法制備樣品，分別加入5、10、15 mL的稀鹽酸，按照“1.5.2”項(xiàng)下的方法測定鈣含量。結(jié)果表明，加入10 mL稀鹽酸的樣品鈣含量明顯高于加入5 mL的樣品，加入15 mL稀鹽酸的樣品鈣含量沒有增加。為保證最大限量的溶解樣品，故選擇加入10 mL的稀鹽酸。

3.2.2 加水總量的選擇 取供試品細(xì)粉3份，按“1.5.1”項(xiàng)下的方法制備樣品，分別加入50、100、150 mL的水進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，加水總量100 mL和150 mL測得結(jié)果相近，而加水總量50 mL的測得結(jié)果略低，故選擇加入100 mL的水。

3.2.3 氫氧化鉀試液用量的選擇 取供試品細(xì)粉3份，按“1.5.1”項(xiàng)下的方法制備樣品，測定過程中在滴加氫氧化鉀試液至溶液顯淺黃色后，再分別繼續(xù)加入5、10、15 mL的氫氧化鉀試液進(jìn)行試驗(yàn)。觀察發(fā)現(xiàn)，加入過量氫氧化鉀試液5 mL時(shí)滴定終點(diǎn)明顯且變色敏銳，未出現(xiàn)可逆反應(yīng)。結(jié)果表明3種氫氧化鉀試液用量的測定結(jié)果基本相同，故選擇加入過量氫氧化鉀試液為5 mL。

4 結(jié)語

中國礦物藥的研究基礎(chǔ)薄弱，尤其在安全標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上尚存在較大的問題，因此亟需制定和完善礦物藥的安全標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以便提高臨床用藥的安全性和質(zhì)量可控性。近年來，礦物藥檢測技術(shù)隨著科技的飛速發(fā)展而不斷提高，偏光顯微鏡、X射線衍射儀、紅外光譜儀及電感耦合等離子體質(zhì)譜儀等分析測試儀器均在礦物藥的質(zhì)量研究中得到廣泛應(yīng)用[15]。利用偏光顯微鏡可觀察礦物的光學(xué)性質(zhì)，礦物的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)決定了其紅外光譜特征，礦物的晶體結(jié)構(gòu)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的X射線衍射圖譜，但由于方中的寒水石及石膏經(jīng)過粉碎、炮制及煎煮過程，其光學(xué)性質(zhì)及晶體構(gòu)型已被破壞，所以目前無法應(yīng)用上述方法對(duì)制劑中的寒水石及石膏進(jìn)行相關(guān)的質(zhì)量分析。電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)和電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)均具有靈敏度高、檢測限低、分析速度快和多元素同時(shí)測定等優(yōu)點(diǎn)，是分析微量和痕量無機(jī)元素的常規(guī)分析技術(shù)，但對(duì)于只測定鈣離子這一常量元素來說，儀器價(jià)格相對(duì)昂貴，經(jīng)濟(jì)成本較高?！吨腥A人民共和國藥典》中的EDTA 滴定法是目前測定石膏中鈣離子含量的主要方法，該方法操作簡便，準(zhǔn)確度高且重復(fù)性好，具有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。故本研究采用了EDTA滴定法對(duì)清血八味片中鈣離子含量進(jìn)行測定。

寒水石和石膏均為臨床常用的礦物藥，在2015版《中華人民共和國藥典》中收載的六味安消散、清咽丸、紫雪散等11種成方制劑中均以寒水石入藥，小兒感冒顆粒、牛黃解毒片、連花清瘟膠囊等60余種成方制劑中均以石膏入藥，可見以寒水石或石膏入藥方劑之多，應(yīng)用范圍之廣泛。前期實(shí)驗(yàn)初步鑒定該方中寒水石為北寒水石(主成分為二水硫酸鈣，經(jīng)涼制后失去結(jié)晶水)，并非南寒水石(主成分為碳酸鈣)。由于寒水石和石膏的主成分相同，均為二水硫酸鈣，兩者相互干擾鈣離子的檢測，無法專屬性地測定寒水石或石膏單味藥材在清血八味片中的鈣含量，故對(duì)制劑中鈣總量進(jìn)行含量測定。本實(shí)驗(yàn)初步建立了EDTA滴定法測定清血八味片中總鈣離子含量的方法，可用于清血八味片中礦物藥的質(zhì)量控制，亦為清血八味片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高與完善提供參考資料，對(duì)以寒水石或石膏入藥的成方制劑中鈣離子含量測定具有實(shí)際意義。

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(本文編輯： 董歷華)

Content determination of calcium inQingxueBaweiPill

WANGBaoli，LISiru，XUKexin，etal.

BeijingKeyLaboratoryofTraditionalChineseMedicineQualityEvaluation,SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China

Corresponingauthor：LINRuichao，E-mail：linrch307@sina.com

Objective To establish the method for content determination of calcium inQingxueBaweiPill. Methods To detect calcium salt and sulfate by chemical identification method. The sample treatment methods and determination method were studied respectively. Samples were charred and incinerated to ash, and the content of calcium was determined by EDTA complex metric titration method. Results The optimal processing conditions were 2-step heating: carbonized 1 hour on the electric stove, incinerated 6 hours under the 700～800℃ in the muffle furnace. The RSD value of the repeatability was 0.32%(n=6), the recovery was 98.67%～101.25% with RSD of 0.97%(n=6). They all met the demands of quantitative analysis. The content of calcium in three batches ofQingxueBaweiPill was 17.40%, 19.34%, 20.69% respectively. Conclusion The method was simple, accurate and reproducible. It can be used for the content determination of calcium inQingxueBaweiPill.

QingxueBaweiPill； Gypsum Rubrum； Gypsum； Calcium； Content determination

公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201507004)

100102 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[王寶麗(碩士研究生)、李思茹(碩士研究生)、徐柯心(碩士研究生)、林瑞超]

王寶麗(1992- )，女，2014級(jí)在讀碩士研究生。研究方向：民族藥品質(zhì)評(píng)價(jià)研究。E-mail：wblego@163.com

林瑞超(1954- )，博士，教授，研究員，博士生導(dǎo)師。研究方向：中藥與民族藥的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究。E-mail：linrch307@sina.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2017.05.003

2016-11-22)