農(nóng)峰+藍(lán)常貢+唐毓金+謝克恭+陸敏安+廖林波+盧賢哲

【摘要】目的檢測股骨頭壞死患者血清過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）的表達(dá)水平，以探討其臨床意義。方法選擇2015年5月～2016年4月收治的87例股骨頭壞死患者作為觀察組，同期選擇在體檢中心進(jìn)行健康體檢的93名健康者作為觀察組，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測兩組血清PPARγ的表達(dá)含量，結(jié)合常規(guī)方法檢測紅細(xì)胞沉降率（ESR），比較兩組間PPARγ及ESR水平的差異，并分析觀察組PPARγ與ESR水平之間的線性關(guān)系。結(jié)果兩組PPARγ及ESR水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），觀察組PPARγ水平顯著性高于對(duì)照組；觀察組中，與Ficat Ⅰ/Ⅱ期患者相比較，Ⅲ/Ⅳ期患者血清PPARγ水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；觀察組患者血清PPARγ與ESR水平呈明顯正相關(guān)（P<0.01）。結(jié)論股骨頭壞死患者血清PPARγ的水平升高，提示其可能參與股骨頭壞死的發(fā)病機(jī)制。

【關(guān)鍵詞】股骨頭壞死；過氧化物酶體增殖物激活受體γ；紅細(xì)胞沉降率

中圖分類號(hào)：R681.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2016.05.003

【Abstract】ObjectiveTo detect the expression level of serum peroxisome proliferator activated receptorγ （PPARγ） in patients with osteonecrosis of the femoral head （ONFH），so as to explore its clinical significance.Methods87 cases of ONFH admitted to hospital from May，2015 to April，2016 were selected as observation group and 93 healthy subjects who received physical examination in physical examination center during the same period were chosen as control group.Then，the serum levels of PPARγ of the two groups were measured by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA），and the erythrocyte sedimentation rate （ESR） was detected by routine method.The differences of PPARγ and ESR levels between the two groups were compared，and the linear correlation between PPARγ and ESR levels in the observation group was analyzed.Results Difference of the levels of PPARγ and ESR in the two groups was statistically significant（P<0.001），and the level of PPARγ in the observation group was significantly higher than that in the control group.In the observation group，compared with the phase Ficat phaseⅠ/Ⅱ，serum levels of PPARγ in phase Ⅲ/Ⅳsignificantly increased，difference was statistically significant（P<0.001）.There was a significantly positive correlation between the serum PPARγ and ESR levels in the observation group （P<0.01）.ConclusionThe level of serum PPARγ in patients with ONFH increase，which suggests that it may involve in the pathogenesis of ONFH.

【Key words】ONFH；PPARγ；ESR

股骨頭壞死（osteonecrosis of the femoral head，ONFH）是一種由于股骨頭血液供應(yīng)阻礙引起骨組織缺血和骨細(xì)胞壞死，從而導(dǎo)致股骨頭關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性破壞的骨科疾病。臨床主要表現(xiàn)為：髖關(guān)節(jié)疼痛、功能活動(dòng)障礙及跛行等。由于ONFH嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給家庭和社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，其已經(jīng)成為嚴(yán)重影響公共健康的社會(huì)問題，亟待臨床醫(yī)生解決。目前，ONFH的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator activated receptorγ，PPARγ）是一種依賴配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，屬于核激素受體超家族的成員之一，其基因位于人第3號(hào)染色體上（3p25）。近年來研究發(fā)現(xiàn)[1～3]，PPARγ經(jīng)過其配體激活后，具有調(diào)節(jié)炎癥、免疫及脂肪代謝等多種功能，可誘導(dǎo)細(xì)胞的分化和凋亡，參與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展。本研究采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測87例桂西地區(qū)ONFH患者及93名體檢健康者血清PPARγ的表達(dá)情況，同時(shí)結(jié)合紅細(xì)胞沉降率（Erythrocyte sedimentation rate，ESR）水平來分析相關(guān)性，以初步探討PPARγ是否參與ONFH的發(fā)病機(jī)制。

1資料與方法1.1一般資料選擇2015年5月～2016年4月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院治療的87例股骨頭壞死患者作為觀察組，男49例，女38例，年齡27～70歲，平均（44.85±9.35）歲，病程6～19個(gè)月，平均（11.13±3.16）個(gè)月，主要臨床表現(xiàn)為髖關(guān)節(jié)（單側(cè)或雙側(cè)）疼痛、功能活動(dòng)受限、跛行等。所有患者長期居住于桂西地區(qū)，籍貫均為廣西，診斷依據(jù)參照Mont 等[4]提出的診斷標(biāo)準(zhǔn)，分期參考國際骨循環(huán)學(xué)會(huì)（ARCO）標(biāo)準(zhǔn)[5]，其中Ficat Ⅰ/Ⅱ期34例，F(xiàn)icat Ⅲ/Ⅳ期53例。選擇同期在本院體檢中心進(jìn)行健康體檢的93名健康者作為對(duì)照組，其中男45名，女48名，年齡22～65歲，平均（42.40±10.76）歲，入選者無其他感染性疾病，影像學(xué)及各項(xiàng)臨床指標(biāo)顯示正常。

1.2病例的排除標(biāo)準(zhǔn)（1）嚴(yán)重的重要臟器器質(zhì)性病變及遺傳性疾病；（2）結(jié)核、艾滋病、梅毒等傳染性疾?。唬?）診斷不明者；（4）由髖關(guān)節(jié)滑膜炎、骨腫瘤及髖關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎等原因引起的股骨頭病變。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬均知情并簽署知情同意書。

1.3方法

1.3.1收集標(biāo)本于受試者肘正中靜脈分別用抗凝管和促凝管抽取空腹血2 ml和3 ml，抗凝血用于檢測ESR水平，促凝血分離血清后用于檢測PPARγ水平。

1.3.2血清PPARγ水平的檢測PPARγ ELISA試劑盒為杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司提供，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.3.3ESR水平的檢測由本院檢驗(yàn)科專業(yè)人員使用意大利Test1全自動(dòng)血沉分析儀對(duì)ESR進(jìn)行檢測。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較應(yīng)用兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，線性相關(guān)應(yīng)用Pearson相關(guān)分析法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05。

2結(jié)果2.1兩組血清PPARγ及ESR的表達(dá)水平觀察組PPARγ及ESR的表達(dá)含量均顯著性高于對(duì)照組（P<0.001）。見表1。

2.2觀察組不同分期患者血清PPARγ的表達(dá)水平在觀察組中，與FicatⅠ/Ⅱ期相比較，F(xiàn)icat Ⅲ/Ⅳ期血清PPARγ含量明顯增高（P<0.001）。見表2。

表2觀察組不同分期患者血清PPARγ水平的比較（±s）

分期1n1PPARγ（pg/ml）1t1PFicat Ⅰ/Ⅱ期134123.38±2.2713.5251<0.001Ficat Ⅲ/Ⅳ期153125.11±2.21

2.3觀察組患者血清PPARγ與ESR水平的相關(guān)性經(jīng)Pearson線性相關(guān)性分析，觀察組患者血清PPARγ與ESR水平呈明顯正相關(guān)（r=0.978，P<0.01）。

3討論ONFH是一種常見的骨科疾病，致病因素較多，機(jī)制復(fù)雜[6]。隨著病程的發(fā)展，大約80%的患者都會(huì)出現(xiàn)股骨頭塌陷，如果不接受適當(dāng)?shù)闹委?，將?dǎo)致髖關(guān)節(jié)功能活動(dòng)喪失[7]。然而，ONFH的早期診斷困難，且目前尚未發(fā)現(xiàn)有效的預(yù)防措施，使得大部分晚期的ONFH患者最終將需要接受人工全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)[8]，這給患者帶來了極大的創(chuàng)傷。因此，ONFH的預(yù)防仍是骨科領(lǐng)域的一大難題，同時(shí)也是研究熱點(diǎn)。為此，學(xué)者們對(duì)這方面開展了大量的研究。閆志琨等[9]在研究血清骨橋蛋白及瘦素與ONFH的相關(guān)性中發(fā)現(xiàn)，ONFH患者血清骨橋蛋白與瘦素水平均升高，提示其在ONFH的發(fā)病中起著一定的作用，可能是ONFH的治療靶點(diǎn)，血清骨橋蛋白及瘦素水平的檢測有望成為預(yù)測ONFH的新指標(biāo)。還有研究發(fā)現(xiàn)[10]，血清抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、Ⅱ型膠原羧基端端肽（CTXⅡ）及同型半胱氨酸（Hcy）水平共同參與激素性O(shè)NFH病理的發(fā)生和發(fā)展，提示其可用于預(yù)測ONFH的發(fā)生。另外，Shuai等[11]在探討血漿脂聯(lián)素水平與股骨頭壞死相關(guān)性的研究中發(fā)現(xiàn)，ONFH患者的血漿脂聯(lián)素呈顯著性低表達(dá)狀態(tài)，提示其可能是ONFH發(fā)生的潛在危險(xiǎn)因素。然而，ONFH的發(fā)生是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，以上研究提示的幾個(gè)分子只是ONFH發(fā)病過程中的部分調(diào)節(jié)因子，其他因子與該疾病的相關(guān)性仍需進(jìn)一步研究。

PPARγ是一種誘導(dǎo)成脂細(xì)胞分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子。資料顯示，上調(diào)PPARγ基因的表達(dá)可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成脂細(xì)胞分化，而抑制其向成骨細(xì)胞分化，隨后增加脂肪的產(chǎn)生而減少骨形成[12，13]；下調(diào)PPARγ基因的表達(dá)可顯著抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化[14，15]。因此，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的改變會(huì)增加脂肪的堆積。而相關(guān)資料顯示[16]，股骨頭內(nèi)脂肪的積累可增加髖關(guān)節(jié)囊內(nèi)壓，阻斷血液循環(huán)，誘導(dǎo)骨組織和骨細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致股骨頭壞死的發(fā)生。由此推測，PPARγ的表達(dá)水平可能與ONFH的發(fā)病密切相關(guān)。

然而，當(dāng)前國內(nèi)外關(guān)于血清PPARγ表達(dá)水平與股骨頭壞死的相關(guān)研究鮮見。因此，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用ELISA技術(shù)對(duì)87例ONFH患者及93名健康者血清PPARγ的表達(dá)含量進(jìn)行檢測，目的在于初步探討PPARγ在ONFH發(fā)病機(jī)制中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，桂西地區(qū)ONFH患者血清PPARγ的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（P<0.010）；在觀察組中，F(xiàn)icatⅠ/Ⅱ期患者血清的PPARγ水平顯著低于Ficat Ⅲ/Ⅳ期患者。由此可見，在ONFH發(fā)生與發(fā)展的早期階段，血清PPARγ水平已逐漸升高，且隨著病程進(jìn)展，PPARγ呈現(xiàn)顯著高表達(dá)狀態(tài)，越容易被檢出，從而有望成為臨床診斷、病情監(jiān)測及判斷預(yù)后的新指標(biāo)。

同時(shí)，我們還檢測觀察組與對(duì)照組ESR的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)ONFH患者的ESR水平較對(duì)照組顯著性升高（P<0.001），提示股骨頭壞死的炎癥性病變呈活動(dòng)性。此外，本研究還對(duì)觀察組血清PPARγ水平與ESR水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示兩者間呈明顯正相關(guān)（P<0.01）。雖然影響ESR的因素眾多，機(jī)制復(fù)雜，但這提示PPARγ的表達(dá)水平與ESR水平存在相互交叉的調(diào)控機(jī)制，考慮PPARγ可能在ONFH的免疫調(diào)節(jié)中扮演至關(guān)重要的作用。

綜上所述，PPARγ可能參與ONFH的發(fā)病，但其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步探索。相信隨著對(duì)ONFH發(fā)病機(jī)制及PPARγ研究的深入，檢測PPARγ水平有望成為ONFH預(yù)防、早期診斷、治療及判斷預(yù)后的重要臨床參考指標(biāo)。參考文獻(xiàn)[1]Chuang CH，Yeh CL，Yeh SL，et al. Quercetin metabolites inhibit MMP2 expression in A549 lung cancer cells by PPARgamma associated mechanisms[J].J Nutr Biochem，2016（33）：4553.

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（2016-07-04修回日期：2016-09-27）

（編輯：潘明志）