蔡敏生，鄧茹

（梅州市人民醫(yī)院1生殖醫(yī)學(xué)科，2檢驗科，廣東 梅州514000）

不同來源精子對體外受精患者胚胎和妊娠結(jié)局的影響

蔡敏生1，鄧茹2

（梅州市人民醫(yī)院1生殖醫(yī)學(xué)科，2檢驗科，廣東 梅州514000）

目的探討不同來源精子對體外受精患者胚胎和妊娠結(jié)局的影響。方法回顧性分行卵胞漿內(nèi)單精子注射 （ICSI）技術(shù)治療的患者21例，依據(jù)精子來源分為三組各7例。A組患者給予手淫法取精，B組患者給予睪丸穿刺取精術(shù)取精，C組給予經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)取精。結(jié)果在受精成功率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率方面，C組明顯高于A組、B組 （P＜0.05），但A組與B組無統(tǒng)計學(xué)差異 （P＞0.05）。三組患者的妊娠率、胚胎種植率均無統(tǒng)計學(xué)差異 （P＞0.05）。結(jié)論經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)可有效提高患者的體外受精成功率，且其胚胎發(fā)育潛能良好，但對妊娠結(jié)局無顯著影響。

不同來源精子；體外受精；胚胎；妊娠

不育癥是臨床上常見的生殖系統(tǒng)疾病之一，其中男方因素主要包括無精子癥、功能障礙及射精障礙等，治療方法有藥物治療和體外受精治療等。卵胞漿內(nèi)單精子注射 （intracytoplasmic sperm injection，ICSI）技術(shù)可有效協(xié)助患者完成受精和妊娠，該技術(shù)的精子獲取方法有手淫法、睪丸穿刺取精術(shù)、經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)取精，但臨床上尚未有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)［1－2］。本研究通過回顧性分析不同來源精子患者的臨床資料，探討不同來源精子對胚胎和妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2014年9月至2015年6月期間我院ICSI技術(shù)治療的患者21例，依據(jù)精子來源分為A組、B組和C組，每組7例。A組：女方年齡 （29.67±4.26）歲，不孕時間 （4.26±1.03）年，人絨毛膜促性腺激素 （HCG）日雌二醇 （E2） （45.23±12.96）ng／L，基礎(chǔ)卵泡刺激素 （6.63± 1.28）IU／L；B組：女方年齡 （30.26±4.41）歲，不孕時間（4.52±1.06）年，HCG日E2值 （46.03±13.08）ng／L，基礎(chǔ)卵泡刺激素 （6.70±1.31）IU／L；C組：女方年齡 （31.01±4.82）歲，不孕時間 （4.49±1.10）年，HCG日E2值 （44.97± 12.88）ng／L，基礎(chǔ)卵泡刺激素 （6.81±1.42）IU／L。三組的女方年齡、不孕時間、HCG日E2值、基礎(chǔ)卵泡刺激素水平等資料無顯著差異 （P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會審批且通過。納入和排除標(biāo)準(zhǔn)：納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床癥狀、病史、產(chǎn)檢、血尿常規(guī)等證實為男方不育且女方生育能力正常；②均為第1次促性腺激素釋放激素激動劑長方案控制性卵巢刺激周期；③患者或其家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有心、肝、腎等重要器官嚴重性疾??；②女性＞40歲或男方不育年限＞15年；③女方有子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位等疾病。

1.2 方法

1.2.1精子獲取 A組給予手淫法取精，即患者禁欲3～7 d后給予手淫法取精，通過密度梯度離心法對精液進行處理和備檢；B組給予睪丸穿刺取精術(shù)取精，即患者取仰臥位，常規(guī)陰囊消毒穿刺點后麻醉，通過含2 mL精子培養(yǎng)液 （G－IVF，瑞典）的5 mL注射器行常規(guī)穿刺，負壓下抽取出睪丸組織并于體視鏡下將取精細管切碎，混勻后常規(guī)離心沉淀和備檢；C組給予經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)取精，即患者穿刺前準(zhǔn)備同B組，完畢后采用與B組一樣的注射器行經(jīng)皮附睪行常規(guī)穿刺，抽取淡黃色附睪液后處理同B組。

1.2.2促排卵方案和ICSI治療 常規(guī)采用促性腺激素釋放激素激動劑 （GnRHa，德國默克雪蘭諾有限公司）、尿人絕經(jīng)期促性腺激素 （HMG，麗珠制藥有限公司）、重組人卵泡刺激素（rFSH，默克雪蘭諾，德國）方案進行促排卵，待卵泡刺激素＜5 U／L、促黃體生成素≤5 U／L、雌二醇≤50 μg／L、竇狀卵泡直徑＜8 mm、內(nèi)膜厚度≤5 mm后應(yīng)用促性腺激素150～300 U啟動控制下卵巢刺激周期，待直徑≥18 mm時，肌內(nèi)注射4 000～10 000 U的HCG（麗珠制藥有限公司），36 h后于超聲下吸取卵泡，在取卵2～4 h后將卵丘顆粒細胞除去，選擇M2期卵細胞和形態(tài)正常、活力較好的精子行ICSI，取卵后第3 d行胚胎移植，期間予以常規(guī)體征監(jiān)測，移植后35 d行B超檢查。

1.3 觀察指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)主要指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)［2－3］：所有患者均通過電話或復(fù)診等方式進行為期的42周隨訪，統(tǒng)計分析所有患者受精、胚胎發(fā)育和妊娠結(jié)局情況。在ICSI后16～18 h觀察原核形成情況，形成雙原核為正常受精，其余為受精失敗，且第3 d觀察和記錄胚胎卵裂球數(shù)目，根據(jù)卵裂球的均勻程度、大小及無核碎片的量對胚胎質(zhì)量進行評價，胚胎培養(yǎng)3 d后細胞數(shù)為7～8個且核碎片評級為Ⅰ～Ⅱ級的胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎，其余為非優(yōu)質(zhì)胚胎；取第3 d優(yōu)質(zhì)胚胎進行新鮮周期胚胎移植且14 d后檢測女方血人絨毛膜促性腺激素水平，觀察受孕并于30 d后超聲檢查觀察女方宮腔內(nèi)是否存在孕囊以確定是否妊娠。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，計量資料比較采用t檢驗，多組資料比較采用F檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組的受精和胚胎發(fā)育情況比較在受精成功率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率方面，C組明顯高于A組、B組 （P＜0.05），但A組、B組無統(tǒng)計學(xué)差異 （P＞0.05），見表1。

表1 三組的受精和胚胎情況比較 ［% （n）］

注：與A、B組比較，*P<0.05；與A組比較，#P>0.05。

2.2 三組的妊娠結(jié)局比較三組的臨床妊娠率、胚胎種植率無統(tǒng)計學(xué)差異 （P＞0.05），見表2。

表2 三組的妊娠結(jié)局比較 ［n（%）］

3 討論

不育癥是臨床上常見的生殖系統(tǒng)疾病之一，其中男性不育占30%～50%，治療方法有藥物治療和體外受精治療等，可有效協(xié)助患者夫婦恢復(fù)受精和妊娠。有研究［4］顯示，隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，ICSI技術(shù)已逐漸成為男性不育治療的重要手段之一，可通過將精子直接注入到卵細胞胞質(zhì)內(nèi)完成體外受精，具有良好的受孕成功率。謝多等［5］的研究表明，不同來源的精子在形態(tài)、質(zhì)量及成熟度等方面存在差異，對患者體外受精的影響也存在差異，提示醫(yī)師應(yīng)選擇正確有效的精子獲取方法。

本研究通過回顧性分析不同來源精子患者的臨床資料，結(jié)果顯示在受精成功率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率方面，C組明顯高于A組、B組，A組、B組無統(tǒng)計學(xué)差異，三組的妊娠率、胚胎種植率無統(tǒng)計學(xué)差異，表明經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)可有效提高患者的體外受精成功率，且其胚胎發(fā)育潛能良好，但對妊娠結(jié)局無影響。本研究結(jié)果提示在ICSI技術(shù)治療過程中，雖可有效避免常規(guī)受精過程中精子獲能、頂體反應(yīng)、識別、黏附、融合等步驟并將精子直接注入到卵細胞胞質(zhì)內(nèi)完成體外受精，但由于卵母細胞的體外受精率與精子的質(zhì)量密切相關(guān)，不同來源的精子對受精具有一定的差異，其中睪丸內(nèi)的精子雖然已完成減數(shù)分裂過程和成為單倍體的遺傳配子，可能由于精子未經(jīng)過附睪中的成熟，如細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的變化，頂體外膜抗原分布改變和獲能狀態(tài)的保持等，導(dǎo)致其激活卵子，使其受精的能力降低，影響其受精成功率；而手淫法獲得的精子可能是由于患者自身睪丸生精功能障礙或低下導(dǎo)致精子含量較少、畸形率較高等，導(dǎo)致其射出的精子在密度、質(zhì)量上相對較低，進而影響正常受精［6］。此外，經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)可能由于獲得的精子在密度、質(zhì)量上相對較高，使其更容易結(jié)合并激活卵子，有利于受精卵更易卵裂并發(fā)育成優(yōu)質(zhì)胚胎，但可能由于在胚胎移植過程中均選取優(yōu)質(zhì)胚胎進行，其妊娠和種植也基本相同，故經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)可為ICSI技術(shù)提供更多更為良好的精子［7］，確保體外受精和胚胎的良好發(fā)育，有利于治療的順利進行。

綜上所述，經(jīng)皮附睪穿刺取精術(shù)可有效提高ICSI技術(shù)治療患者的體外受精成功率，且其胚胎發(fā)育潛能良好，但對妊娠結(jié)局無顯著性影響，可作為梗阻性無精癥有效的治療方法。

[1]李宜學(xué),田喜鳳,樊桂玲,等.不同來源精子對卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射臨床結(jié)局的影響 [J].河北醫(yī)藥,2013,35(9):1364-1365.

[2]張帆,葛紅山,朱春芳,等.不同來源及不同處理方式的精子對人卵子胞漿內(nèi)單精子注射結(jié)局的影響 [J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2014,30 (4):591-593.

[3]李楠,唐永梅,梁明明,等.不同受精方式及精子來源對剩余胚胎發(fā)育能力的影響 [J].重慶醫(yī)學(xué),2016,45(3):366-368.

[4]張志宏,朱海波,張馨月,等.不同來源精子對卵胞漿內(nèi)單精子注射治療結(jié)局的影響 [J].生殖醫(yī)學(xué)雜志,2014,23(3):252-255.

[5]謝多,邱卓琳,羅琛,等.ICSI中不同來源精子對卵母細胞受精,胚胎質(zhì)量及發(fā)育潛能的影響 [J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,34(6): 857-861.

[6]金華,丁家怡,邵駿.不同來源精子在ICSI中對受精、胚胎發(fā)育的影響 [J].醫(yī)學(xué)綜述,2015,21(23):4392-4393.

[7]趙杰,朱小軍,陳秀娟,等.精液參數(shù)及精子來源對妊娠結(jié)局的影響[J/CD].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志:電子版,2015,11(6):713-718.

（責(zé)任編輯：鐘婷婷）

Effect of Spermatozoa from Different Sources on Embryos and Pregnancy Outcomes of External Fertilization//CAI Minsheng1,

DENG Ru2(1Department of Reproductive Medicine,2Clinical Laboratory,Meizhou People s Hospital,Meizhou 514000,China)

ObjectiveTo discuss the effect of spermatozoa from different sources on embryos and pregnancy outcomes of external fertilization.Methods21 cases of patients with ICSI technology were analyzed retrospectively.According to the sources of spermatozoa,all cases were divided into ejaculated spermatozoa group(group A),testicular sperm aspiration(group B),and percutaneous epididymal sperm aspiration group(group C),with 7 cases in each group.ResultsIn fertilization success rate,cleavage rate,high quality embryo rate,group C was significantlyhigher than group A and group B(P＜0.05),while no statistical difference was found between group A and group B(P＞0.05). No statistical difference was found in the pregnancy rate and embryo implantation rate among 3 groups(P＞0.05).ConclusionsPercutaneous epididymal sperm aspiration can effectively improve the success rate of external fertilization,and the potential of embryonic development is good,but there is no significant effect on pregnancy outcome.

Spermatozoa from different sources;External fertilization;Embryos;Pregnancy

R321.2

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.02.0211

2016－07－18

2016－09－02

蔡敏生 （1982－），男，廣東梅州人，主管檢驗師，研究方向：生殖檢驗。