何柯新，王會(huì)敏，麥靜雯，邱萍英，徐鵬，張燁梓，洪劍浩，林裕龍

（1廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院／廣州市惠愛(ài)醫(yī)院，廣東 廣州510370；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院／廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州510120）

紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2在診斷地中海貧血中的應(yīng)用

何柯新1，王會(huì)敏2，麥靜雯1，邱萍英1，徐鵬1，張燁梓1，洪劍浩1，林裕龍1

（1廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院／廣州市惠愛(ài)醫(yī)院，廣東 廣州510370；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院／廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州510120）

目的探討紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2在診斷地中海貧血中的應(yīng)用價(jià)值。方法采用回顧性分析的方法，分析同時(shí)進(jìn)行地中海貧血篩查及基因診斷的930例患者的檢查結(jié)果，并將其分為對(duì)照組、貧血組、α－地貧組和β－地貧組。結(jié)果地貧組與貧血組在MCV和MCH方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），在紅細(xì)胞脆性方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；ROC曲線下的面積中，α－地貧組中所有參數(shù)的面積均未達(dá)到90%，β－地貧組中紅細(xì)胞脆性和HbA2的面積均達(dá)到90%，而MCV和MCH的面積較小；紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2在α－地貧組中的最佳診斷截?cái)嘀捣謩e為：50.50、71.65、23.25、2.65，在β－地貧中的最佳診斷截?cái)嘀捣謩e為48.50、71.05、23.10、3.55。結(jié)論紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2四個(gè)參數(shù)在診斷地中海貧血方面有一定的作用，多個(gè)參數(shù)綜合考慮可為臨床診斷地中海貧血提供更準(zhǔn)確的參考依據(jù)。

地中海貧血；紅細(xì)胞脆性；MCV；MCH；HbA2

地中海貧血是基因突變或缺失導(dǎo)致珠蛋白鏈合成障礙，進(jìn)而造成α和β鏈比例失衡所引起的遺傳性溶血性貧血［1］，在廣東、廣西及海南省較為常見(jiàn)［2］?；蛟\斷是目前診斷地貧的金標(biāo)準(zhǔn)，但技術(shù)要求高，費(fèi)用昂貴，不適宜做常規(guī)檢測(cè)方法廣泛應(yīng)用于臨床篩查、診斷［3］。血紅蛋白電泳結(jié)合紅細(xì)胞參數(shù)的運(yùn)用克服了這些弊端，為臨床患者提供了簡(jiǎn)便快速的篩查方法。本研究收集2012年至2015年同時(shí)進(jìn)行地貧篩查和地貧基因診斷的患者930例，結(jié)合紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年8月到2015年12月來(lái)我院做地貧篩查同時(shí)做地貧基因的患者930例，其中男性294例，女性636例；年齡1～91歲，中位年齡31歲。

1.2 儀器BioRad Variant II血紅蛋白電泳儀，日本 Sysmex XE－5000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，BS－800生化分析儀。

1.3 檢測(cè)方法①紅細(xì)胞參數(shù)測(cè)定：抽取靜脈血2 mL于EDTAK2抗凝真空采血管，用XE－5000進(jìn)行血常規(guī)CBC模式的檢測(cè)，上機(jī)前使用XE配套質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控檢測(cè)。②血紅蛋白電泳：將EDTA－K2抗凝血顛倒混勻后直接放在Bio－Rad Variant II血紅蛋白電泳儀上進(jìn)行檢測(cè)，每批試驗(yàn)均用廠家配套質(zhì)控品做質(zhì)控，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行操作。③基因檢測(cè)：枸櫞酸鈉抗凝管采血2 mL，使用深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供的試劑進(jìn)行DNA提取和基因診斷，α－地貧采用跨越斷裂點(diǎn)的PCR技術(shù)檢測(cè)3種缺失，β－地貧采用PCR－膜反向點(diǎn)雜交技術(shù)檢測(cè)17種基因位點(diǎn)突變。嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。④紅細(xì)胞脆性檢測(cè)：將EDTA－K2抗凝血用生理鹽水配制成5%的紅細(xì)胞懸液，在BS－800生化分析儀上進(jìn)行紅細(xì)胞脆性檢測(cè)，采用武漢市長(zhǎng)立生物有限責(zé)任公司提供的紅細(xì)胞脆性測(cè)定試劑盒。

1.4 分組將所有樣本分為正常對(duì)照組 （未涉及到致貧血的因素）、貧血組 （排除基因診斷為地貧患者，排除有諸如缺鐵、缺乏葉酸、懷孕、腎病等因素的貧血患者）及經(jīng)過(guò)基因診斷確診的α－地貧組和β－地貧組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較行多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；分別對(duì)紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2做ROC曲線。

2 結(jié)果

2.1 紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH和HbA2的檢測(cè)結(jié)果貧血組與地貧組的各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；地貧組與貧血組在MCV和MCH方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）；在紅細(xì)胞脆性方面，地貧組與貧血組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），α－地貧與β－地貧組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）；HbA2方面，貧血組與α－地貧組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 ROC曲線下的面積ROC曲線下的面積中，α－地貧組中所有參數(shù)的面積均未達(dá)到90%；β－地貧組中紅細(xì)胞脆性和HbA2的面積均達(dá)到90%，而MCV和MCH的面積較小。見(jiàn)表2。

2.3 紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH和HbA2的診斷截?cái)嘀导t細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2的在α－地貧組中的最佳診斷截?cái)嘀捣謩e為50.50、71.65、23.25、2.65，β－地貧分別為48.50、71.05、23.10、3.55，所對(duì)應(yīng)的靈敏度、特異度及Youden指數(shù)見(jiàn)表3。

表1 紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2的試驗(yàn)結(jié)果 （±s）

表1 紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2的試驗(yàn)結(jié)果 （±s）

組別 n 紅細(xì)胞脆性（%） MCV MCH HbA2 α－地貧組 300 44±16.6 67.8±7.4 21.3±2.8 2.3±0.4 β－地貧組 210 39±12.9 64.6±5.9 20.5±1.9 6.1±6.4貧血組 193 60±12 68.8±6.8 20.1±3.1 2.2±0.3對(duì)照組 227 73±15 85.0±9.1 28±3.9 3±1.4

表2 紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2 ROC曲線下的面積結(jié)果

表3 紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2的診斷截?cái)嘀?/p>

3 討論

地中海貧血是由于血紅蛋白珠蛋白鏈合成部分或完全受抑而引起的遺傳性慢性溶血性貧血，除血紅蛋白成分、含量及電荷情況發(fā)生改變外，幼紅細(xì)胞利用鐵也發(fā)生障礙，主要是原卟啉與鐵結(jié)合障礙，血象也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化，主要表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素性貧血、MCV降低。此外，多余的珠蛋白鏈沉附于紅細(xì)胞內(nèi)表面，使紅細(xì)胞膜滲透張力增加，脆性降低。據(jù)相關(guān)報(bào)道［4－6］顯示，MCV、紅細(xì)胞脆性及血紅蛋白電泳含量檢測(cè)對(duì)地貧攜帶者的篩查有一定價(jià)值。

從表1看出，貧血組與地貧組的各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示可通過(guò)四個(gè)參數(shù)來(lái)區(qū)分地貧及貧血患者和正常人群；MCV、MCH結(jié)合紅細(xì)胞脆性可區(qū)分地貧和貧血患者；β－地貧患者的HbA2值明顯高于其他組，因此HbA2含量的升高可作為診斷β－地貧的特異性指標(biāo)。表2顯示，紅細(xì)胞脆性和MCV在診斷α－地貧時(shí)的準(zhǔn)確性中等 （曲線下的面積 ＜90%）；而紅細(xì)胞脆性和HbA2在診斷β－地貧時(shí)準(zhǔn)確性較高，尤以HbA2為最好 （面積達(dá)到了0.997）。表3顯示用ROC曲線反映靈敏度與特異性之和的Youden指數(shù)，其中HbA2≥3.55作為診斷β－地貧的指標(biāo)，Youden指數(shù)最高，與馮桂玲等［7］的研究結(jié)果相似。而其他參數(shù)在診斷兩種地貧中的Youden指數(shù)較低，沒(méi)有很好的特異性與靈敏度。

綜上所述，紅細(xì)胞脆性、MCV、MCH、HbA2在診斷地中海貧血方面有一定的作用，仍要多個(gè)參數(shù)綜合考慮，以便為臨床診斷地中海貧血提供更準(zhǔn)確的參考依據(jù)。

[1]劉玲,蔣瑋瑩,許世艷,等.廣東地區(qū)地中海貧血致病基因的基因型及β珠蛋白基因多態(tài)性研究 [J].中華血液學(xué)雜志,2013,34(7): 595－599.

[2]Zheng CG,Liu M,Du J,et al.Molecular spectrum of α－and β－globin gene mutations detected in the population of Guangxi Zhuang Autonomous Region,People′s Republic of China[J].Hemoglobin,2011, 35(1):28－39.

[3]何英,張銀輝,吳潤(rùn)香,等.紅細(xì)胞平均體積、脆性以及毛細(xì)管血紅蛋白電泳聯(lián)合檢測(cè)在產(chǎn)前地中海貧血診斷中的價(jià)值 [J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(19):2521－2523.

[4]丁高儂,鄭雁堅(jiān),王治偉.MCV、MCH和RDW對(duì)孕前篩查地中海貧血的意義 [J].白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,9(3):163－165.

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[6]Mamtani M,Jawahirani A,Das K,et al.Bias－corrected diagnostic performance of the naked eye single tube red cell osmotic fragility test (NESTROFT):An effective screening tool for β－thalassemia[J].Hematology,2006,11(4):277－286.

[7]馮桂玲,林楨,林敏,等.ROC曲線評(píng)價(jià)β地中海貧血血紅蛋白A2的診斷價(jià)值 [J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(13):2187－2189.

（責(zé)任編輯：鐘婷婷）

The Application of Erythrocyte Fragility,MCV,MCH and HbA2 in the Diagnosis of Thalassemia

HE Kexin1,WANG Huimin2,MAI Jingwen1,QIU Pingying1,XU Peng1,ZHANG Yezi1,HONG Jianhao1,LIN Yulong1(1The Affiliated Brain Hospital of Guangzhou Medical University/Guangzhou Huiai Hospital,Guangzhou 510370,China;2The Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of TCM/Guangdong Provincial Hospital of TCM,Guangzhou 510120,China)

ObjectiveTo explore the clinical value of erythrocyte fragility,MCV,MCH and HbA2 in the diagnosis of thalassemia.MethodsThe examination results of930 patients with thalassemia screening and gene diagnosis in our hospital were analyzed retrospectively, and all cases were divided into control group,anemia group,alpha thalassemia group and beta thalassemia group.ResultsThere was no statistically difference in MCV and MCH between thalassemia group and anemia group,but there was a significant difference in erythrocyte fragility(P＜0.05).The areas of ROC curve did not reach 90%in alpha thalassemia group,but the areas of ROC curve reached 90%in erythrocyte fragility and HbA2 of beta thalassemia group,and the areas of ROC curve were smaller in MCV and MCH.The cutoff values were 50.50,71.65,23.25,2.65 respectively in erythrocyte fragility,MCV,MCH,HbA2 of alpha thalassemia group,and 48.50,71.05,23.10, 3.55 in beta thalassemia group.ConclusionsErythrocyte fragility,MCV,MCH and HbA2 have certain value in the diagnosis of the thalassemia,which will provide a more accurate reference for clinical diagnosis of thalassemia.

Thalassemia;Erythrocyte fragility;MCV;MCH;HbA2

R556

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.02.0181

2016－08－11

2016－10－12

廣東省中醫(yī)藥局科研項(xiàng)目 “綠茶提取物靶向HIF－α的抗阿爾茨海默病Aβ生成及其機(jī)制的研究” （項(xiàng)目編號(hào)：20161092）

何柯新 （1982－），男，碩士研究生學(xué)歷，主管技師，主要研究領(lǐng)域：臨床生物化學(xué)與生物化學(xué)檢驗(yàn)。