趙 卉，胡夢坤，岑 琴，彭 紅

（沈陽產品質量監(jiān)督檢驗院，沈陽 110022）

人工合成色素是以苯、甲苯、萘等化工產品為原料，經磺化、硝化、鹵化、偶氮化等一系列有機反應制成的。大量的研究報告指出，幾乎所有的合成色素都不能向人體提供營養(yǎng)物質，某些合成色素甚至會導致生育力下降、畸胎等。因此，我國《GB2760-2014食品安全國家標準食品添加劑使用標準》中對合成著色劑的使用有明確限量。超高效液相色譜（ultra performance liquid chromatography，UPLC）與傳統(tǒng)的液相色譜（HPLC）相比，可大大改善分析速度、分離度和靈敏度，在食品安全、環(huán)境分析、藥物開發(fā)等領域應用廣泛。通過改變試驗條件，建立UPLC對飲料中檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍、赤蘚紅7種人工合成著色劑的分離分析方法，為快速識別和檢測合成著色劑提供技術依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器）：美國waters公司；色譜柱Waters RP18（2.1 mm ×50 mm，1.7 μm）；電子天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；超純水制備系統(tǒng)：美國Milli-Q公司。

1.1.2 試劑 檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍、赤蘚紅標準品 （純度＞99%）由DR.Ehrenstorfer GmbH生產；甲醇（色譜純）由美國fisher公司生產；乙醇、氨水、聚酰胺粉、甲酸、檸檬酸、乙酸銨均為分析純。

1.2 樣品前處理

準確稱取試樣 20 g（精確至 0.01 g），置于 100 mL燒杯中，加熱驅除 CO2；加檸檬酸（20 g/100 mL）調節(jié)試樣pH值為6，加熱至60℃，將1 g聚酰胺粉倒入試樣中，攪拌抽濾；用60℃水洗滌后，再用甲醇-甲酸（6+4）溶液洗滌3～5次，再用水洗至中性；用乙醇-氨水-水（7+2+1）混合液解析 3～5 次，每次 5 mL，收集解吸液，加水定容；用 0.45 μm 濾膜過濾，待用。

1.3 色譜條件選擇

選擇甲醇及 0.02 mol/L 乙酸銨溶液 （稱取 1.54 g乙酸銨，加水至 1 000 mL，溶解，經 0.45 μm 微孔濾膜過濾）作為流動相，進行梯度洗脫，流速為 0.6 mL/min，柱溫35℃。

在190～700 nm之間進行全波長掃描，確定7種合成著色劑最大吸收波長分別為：檸檬黃257.8 nm；新紅 505.3 nm；莧菜紅 216.4 nm；胭脂紅 215.2 nm；日落黃 234.1 nm；亮藍 627.5 nm；赤蘚紅 530.9 nm。由此選擇254 nm作為檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃的檢測波長，530 nm作為赤蘚紅的檢測波長，630 nm作為亮藍的檢測波長。

梯度洗脫條件見表1。在以上色譜條件下進樣0.4 μL，以色譜峰面積外標法定量，測得7種合成著色劑的色譜圖，如圖1—3所示。

1.3 標準曲線

準確稱取按其純度折算為100%的檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍、赤蘚紅標準樣品各0.1 g，加水定容于100 mL容量瓶內，配成1 000 mg/L混合標準儲備液。于4℃冷藏柜內儲存，有效期3個月。

分別吸取上述標準儲備液 0.2，0.5，1.0，2.0，5.0 mL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，配成濃度為 2.0，5.0，10，20，50 mg/L 的混合標準工作溶液。 經0.45 μm 濾膜過濾，在 1.3 色譜條件下進樣 0.4 μL，根據(jù)濃度與峰面積的關系繪制標準曲線。

表1 梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution requirement

圖1 檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃出峰色譜圖Figure 1 Chromatogram of tartrazine，new red，amaranth，ponceau and sunlet yellow appearance

圖2 赤蘚紅出峰時間圖Figure 2 Appearance time of erythrosine

圖3 亮藍出峰時間圖Figure 3 Appearance time of brilliant blue

1.4 方法回收率及精密度

為考察方法的可靠性，測定7種合成著色劑進行加標回收率。將合成著色劑標量為檢出限 （0.5 mg/kg，0.2 mg/kg）及 10 倍檢出限（5 mg/kg）的樣品按照1.2提取方法提取6份，計算回收率及精密度。

2 結果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

色譜峰高為噪聲高3倍（S/N＝3）相對應的濃度為檢出限。線性方程、相關系數(shù)、線性范圍及檢出限見表2。

從表2可以看出，7種合成著色劑在線性范圍內的線性關系良好。

2.2 方法回收率及精密度

通過加標回收率試驗，對方法進行回收率和精密度測定，結果見表3。

由表3可知：7種合成著色劑的平均回收率為91.7%～104.1%，相對標準偏差為 0.1%～3.0%（n＝6）。表明該方法精密度、準確度能滿足分析要求。

3 結論

建立的UPLC法具有以下特點：1）分析速度快，分離7種人工合成色素僅需3 min，而文獻報道的HPLC法需12 min，毛細管電泳法需15 min。2）對于7種人工合成著色劑分離效果好。由于采用小顆粒填充的短柱，因此具有較高的柱效和較低擴散體積。

試驗采用梯度洗脫程序，使檸檬黃、新紅很好地分離，靈敏度也有明顯提高。使用PDA雙通道波長檢測，各色素特別是亮藍的檢測靈敏度有較大提高，7種色素的檢出限為 0.2～0.5 mg/kg，回收率為 91.7%～104.1%，線性相關系數(shù) r＞0.999 5。

綜上所述，試驗建立的使用UPLC同時檢測食品中人工合成著色劑的方法，適用于實際飲料樣品檢測工作。

表2 7種人工合成色素的線性范圍、線性關系、相關系數(shù)和檢出限Table 2 Liner range，linear equations，correlation coefficients and detection limit of 7 synthetic colorants

表3 7種合成色素加標回收試驗Table 3 Mark recovery test of 7 synthetic colorants

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