鄭 麗，張海鵬，宋艷培，劉孟浩，何時(shí)雨，馬旭東，覃新導(dǎo)，李伯松

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣州實(shí)驗(yàn)站，廣東 廣州 510140；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣東 廣州 510642；3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)材料與能源學(xué)院，廣東 廣州 510642；4.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院，海南 海口 571101）

纖維素降解菌的篩選、鑒定和糖化水平研究

鄭 麗1，2，張海鵬2，宋艷培3，劉孟浩3，何時(shí)雨1，馬旭東1，覃新導(dǎo)4，李伯松1

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣州實(shí)驗(yàn)站，廣東 廣州 510140；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣東 廣州 510642；3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)材料與能源學(xué)院，廣東 廣州 510642；4.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院，海南 海口 571101）

將前期從木薯生境中分離、保存的298個(gè)菌株，通過平板測(cè)試，篩選到57個(gè)可產(chǎn)纖維素酶活的菌株，其中酶活性效果最好的菌株（水解圈最大，將其賦值得分為3）所占比例為40.9%，酶活性依次減弱的菌株所占比例（賦值得分為2和1）分別占27.9%和24.6%。采用DNS法測(cè)定57個(gè)菌株的糖化水平和酶活力，結(jié)果顯示，10株細(xì)菌具有較好潛力降解纖維素，其中菌株HWY-3-9的糖化和酶活力最好，產(chǎn)糖量為0.1852 mg/mL，酶活力為0.0012 U/mL，經(jīng)鑒定為解淀粉芽孢桿菌。

細(xì)菌；纖維素酶；糖化水平

隨著化石能源的不斷開發(fā)利用，人類正面臨著能源枯竭的危機(jī)。纖維素作為一種生物質(zhì)能源倍受矚目，它在自然界中分布廣泛，主要存在于可再生的木質(zhì)纖維素材料中［1］。隨著我國農(nóng)業(yè)及農(nóng)產(chǎn)品加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，農(nóng)業(yè)廢棄物不斷增加，給環(huán)境帶來沉重負(fù)擔(dān)［2-3］。其中秸稈廢棄物的主要組成為半纖維素和木質(zhì)素，它們交織在一起形成難降解的復(fù)合物［4］。因此，篩選能降解纖維素的菌株成為近年的研究熱點(diǎn)。國內(nèi)外對(duì)纖維素降解菌的研究有相關(guān)報(bào)道，如馮玉杰等［5］篩選出具有較好降解纖維素活性的菌株，根據(jù)菌株本身產(chǎn)酶特點(diǎn)進(jìn)行復(fù)配，實(shí)現(xiàn)纖維素的快速水解，利用纖維素降解菌株群和酵母菌進(jìn)行聯(lián)合作用，最終實(shí)現(xiàn)纖維素類物質(zhì)較高水平的利用；羅萍等［6］從自然發(fā)酵的菠蘿渣中分離得到了降解菠蘿纖維素菌株；林捷等［7］從自然界中篩選出了6株纖維素分解菌并進(jìn)行復(fù)配，大幅提高纖維素酶活力以及對(duì)還原糖的耐受力；李嘉薇等［8］對(duì)纖維素酶水解糖化木薯秸稈工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明，在溫度為45℃，反應(yīng)體系pH為4.5，酶用量為2 g/L，反應(yīng)時(shí)間為42 h，還原糖得率最大；盧月霞等［9］將細(xì)菌和放線菌經(jīng)過混菌培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，組合菌株的酶活相當(dāng)于其各自單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的兩倍；王麗等［10］、張曉倫等［11］也發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果。二戰(zhàn)期間分離得到的纖維素降解菌“瑞氏木霉”，其強(qiáng)大的纖維素分泌能力得到驗(yàn)證并已被廣泛應(yīng)用于纖維素酶生產(chǎn)及合成的研究［12］。據(jù)報(bào)道，好氧細(xì)菌以胞外酶形式分泌3種纖維素酶水解纖維素，厭氧細(xì)菌則可將3種纖維素酶組裝成纖維小體［13］；Faterstam等［14］也發(fā)現(xiàn)兩種外切酶（CBHⅠ、CBHⅡ）聯(lián)合降解結(jié)晶纖維素的毒素和程度是單組分酶的兩倍。

本研究通過纖維素降解菌的篩選得到1株具有較好纖維素酶活性菌株，并對(duì)該菌株進(jìn)行纖維素酶活力和糖化水平測(cè)定，纖維素降解菌有利于減少各種農(nóng)業(yè)纖維化廢棄物對(duì)環(huán)境帶來的影響，還可以變廢為寶，為燃料乙醇的原料提供來源，為可持續(xù)發(fā)展帶來較好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)菌株由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣州實(shí)驗(yàn)站植保實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌株纖維素酶活性的篩選 將前期分離得到的298個(gè)菌株，參照文獻(xiàn) ［15］的方法進(jìn)行纖維素酶活性測(cè)定。把準(zhǔn)備好的菌株接到纖維素酶活性測(cè)定平板（蛋白胨 10 g，酵母粉 10 g，羧甲基纖維素鈉 10 g，氯化鈉 5 g，磷酸二氫鉀 1 g，瓊脂 18 g，定容至 1 000 mL，pH=7.0），30℃培養(yǎng) 48 h，用 1 g/L剛果紅染 1 h ，倒掉染液后用1 mol/L NaCl 浸泡 1 h。檢測(cè)透明圈的有無并測(cè)量其內(nèi)徑和外徑。

1.2.2 糖化水平測(cè)定 還原糖（葡萄糖）測(cè)定采用DNS顯色法［16］，將培養(yǎng)好的細(xì)菌接種到纖維素富集的液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h后進(jìn)行離心，獲得粗酶液，50℃水浴30 min后，立即加入DNS試劑測(cè)定還原糖的含量。

1.2.3 酶活力測(cè)定 將1.2.2糖化水平測(cè)得的葡糖糖含量進(jìn)行酶活力測(cè)定，在50℃、pH為4.8的條件下，1 min內(nèi)可以將底物轉(zhuǎn)化成1 μmol葡萄糖所需要的酶量定義為一個(gè)酶活力單位（U/mL）［16］。

1.2.4 賦值評(píng)估 根據(jù)抑菌圈（抑菌圈外徑與內(nèi)徑之差）的大小，將產(chǎn)纖維素酶活性的菌株賦值得分：0分，無水解圈；1分，0 mm ＜水解圈 ≤ 3.0 mm；2分，3.0 mm ＜ 水解圈≤ 6 mm；3分，水解圈＞ 6 mm。

1.2.5 菌株鑒定 采用試劑盒（賽百盛公司）提取細(xì)菌基因組后，參照文獻(xiàn)［17］的方法從基因組中擴(kuò)增出16S rRNA基因片段的PCR擴(kuò)增。所得產(chǎn)物在華大基因測(cè)序分析，并將相關(guān)序列在NCBI上進(jìn)行比對(duì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌產(chǎn)纖維素酶活性

從298株細(xì)菌中，篩選到57株產(chǎn)纖維素酶的菌株。按以上賦值方法，結(jié)果（表1，圖1）賦值得分為3的菌株占比為40.9%；賦值得分為2和1的菌株，分別占供試菌株總數(shù)的27.9%和24.6%。說明不同菌株之間的纖維素酶活性存在差異。

圖1 不同細(xì)菌水解纖維素酶活性

2.2 糖化水平與酶活力測(cè)定

對(duì)獲得的57個(gè)菌株分別測(cè)定其糖水平，發(fā)現(xiàn)大部分菌株產(chǎn)糖水平較低，挑選其中10株具有較好糖化潛力的細(xì)菌進(jìn)行復(fù)篩選（葡萄糖測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=1.523X-0.0526，R2=0.9902），結(jié)果（圖2）顯示，HWY-3-9菌株產(chǎn)糖量為0.1852 mg/mL；DHNY-3-4 和DDNR-3-3的產(chǎn)糖量分別為0.1644 mg/mL和0.1532 mg/mL，且二者差異不顯著；產(chǎn)糖量最低的菌株為DDWR-4-4，僅0.0643 mg/mL。同時(shí)，對(duì)這10株細(xì)菌進(jìn)行酶活力測(cè)定，結(jié)果（圖3）表明，10株細(xì)菌的酶活力存在差異，其中HWY-3-9菌株的酶活力最高，達(dá)0.0012 U/mL；其次是DHNY-3-4菌株，達(dá)0.0011 U/mL；酶活力最低的菌株為DHS-4-1，僅0.0004 U/mL。

圖2 10個(gè)菌株糖化水平測(cè)定結(jié)果

圖3 菌株酶活力測(cè)定結(jié)果

2.3 菌株鑒定

對(duì)4個(gè)產(chǎn)糖能力和酶活力水平存在差異的菌株進(jìn)行測(cè)序分析，結(jié)果見表2、圖4～圖7，產(chǎn)糖水平和酶活力最高的菌株HWY-3-9為解淀粉芽孢桿菌；僅次于HWY-3-9的菌株為DHWS-3-6，經(jīng)過鑒定該菌株為成團(tuán)泛菌；產(chǎn)糖水平和酶活力最低的菌株為DHS-4-1，鑒定為短小芽孢桿菌。

表2 菌株鑒定結(jié)果

圖4 菌株HNR-3-7的系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖5 菌株HWY-3-9的系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖6 菌株DHWS-3-6的系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖7 菌株DHS-4-1的系統(tǒng)進(jìn)化樹

3 結(jié)論與討論

本研究的298個(gè)菌株分離自木薯不同生境，前期經(jīng)過聚類分析，發(fā)現(xiàn)豐度較好。通過分析細(xì)菌的纖維素降解酶活性，并測(cè)定酶活性較好菌株的糖化水平，找到1株綜合效率最好的解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）。

纖維素酶主要由外切葡聚糖酶、內(nèi)切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶組成，3種酶之間相互協(xié)調(diào)作用將復(fù)雜的纖維素多糖降解為易于利用的單糖［15］。β-葡萄糖苷酶是纖維素酶體系產(chǎn)葡萄糖的重要組成部分，調(diào)節(jié)另外兩部分的功能，其活性影響了纖維素酶的總活性，從而影響葡萄糖的產(chǎn)量［16］。本研究通過CMC法測(cè)定菌株的纖維素酶活性，DNS法測(cè)定高酶活性菌株的產(chǎn)葡萄糖能力，發(fā)現(xiàn)不同菌株的糖化水平和酶活力存在差異，原因可能有兩個(gè)：一是和菌株本身特性有關(guān)，不同種屬菌株的纖維素酶種類和活力存在差異會(huì)影響其酶活力和糖化能力。金迪等［17］分離得到的1株降解纖維素菌株，在28℃、pH為7.0～7.5和32 h條件下，其羧甲基纖維素酶（CMCase）活力為 651.75 U/mL；葛春輝［18］篩選出一株纖維素降解菌，其酶活力為0.581 U/mL；陳麗燕等［19］篩選出兩株纖維素降解菌，經(jīng)鑒定該菌株為地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，液體搖瓶培養(yǎng)4 d，其CMC酶活力分別可達(dá) 163.3、167.17 U/mL，而本研究解淀粉芽孢桿菌的酶活力為0.0012 U/mL。楊培周等［20］對(duì)康寧木霉、綠色木霉、黑曲霉和里氏木霉表達(dá)纖維素酶的酶學(xué)特性初步研究結(jié)果表明，不同屬菌株的產(chǎn)酶活性存在差異，其中黑曲霉產(chǎn)酶活性最好，是發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的理想菌株；徐杰［21］對(duì)水稻主產(chǎn)區(qū)的土壤進(jìn)行分離得到10株細(xì)菌，發(fā)現(xiàn)在相同條件下，10株細(xì)菌對(duì)纖維素分解能力表現(xiàn)不一，這與本研究結(jié)果一致。另一個(gè)原因可能是菌株發(fā)酵通氣量、發(fā)酵液濃度、碳氮源以及平板測(cè)定抑菌圈所用培養(yǎng)基類型等影響菌株產(chǎn)酶能力和活性。林捷等［7］利用木薯渣進(jìn)行纖維素分解菌混合發(fā)酵工藝研究表明，菌株發(fā)酵通氣量、發(fā)酵液濃度等對(duì)菌株產(chǎn)酶能力有很大影響；羅萍等［6］發(fā)現(xiàn)功能菌株在6種不同培養(yǎng)基平板上的 FPA 酶活性表現(xiàn)不一，并最終選出最適合該菌的培養(yǎng)基為蛋白胨纖維素培養(yǎng)基；發(fā)酵液中微生物產(chǎn)酶和還原糖也具有反饋?zhàn)饔?，Guo等［22］對(duì)產(chǎn)黃纖維單胞菌的葡萄糖耐受力進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，葡萄糖含量高于5.0 μg/mL時(shí)，該菌的纖維酶活力急劇下降；Wang等［23］報(bào)道，黑曲霉在還原糖濃度為1.5 μg/mL時(shí)產(chǎn)酶受阻。

纖維素降解酶活性高低決定了降解纖維素能力的大小。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)、基因工程及蛋白質(zhì)工程等的發(fā)展，提供了改變纖維素酶分子催化活性、最適溫度和pH等生物特性的方法，為獲得高效轉(zhuǎn)化纖維素提供了可能［24］。Qu Y B［25］對(duì)一株嗜酸耐熱纖維素降解菌進(jìn)行了定點(diǎn)突變，將其降解活性提高了20%；Heinzelman等［26-27］以3種真菌運(yùn)用SCHEMA 重組方法得到了最高的熱穩(wěn)定性約比熱穩(wěn)定性最強(qiáng)的親本提高7℃；Lin等［28］通過定點(diǎn)突變，實(shí)現(xiàn)了β-葡聚糖酶催化活性分別比野生型提高50%和80%；吳華偉等［29］通過易錯(cuò)PCR技術(shù)，將纖維素酶活提高到59.6、90.8、105.1 U/m L，分別是原始菌株的2.1倍、3.2倍和3.7倍；李永仙等［30］構(gòu)建重組質(zhì)粒，將編碼β-1，3-1，4-葡聚糖酶基因置于T7啟動(dòng)子和lac啟動(dòng)子雙重啟動(dòng)子的調(diào)控下表達(dá)，其催化活性達(dá)到1 883.3 U/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過原始菌株。因此本研究獲得的降解菌株有可能通過這些技術(shù)方法提高其酶活力，從而提高產(chǎn)糖水平。

本研究篩選到的糖化水平最高的菌株，經(jīng)鑒定為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens），關(guān)于該菌株具有纖維分解作用的文獻(xiàn)也有報(bào)道。Leelasuphakul等［31］對(duì)從芽孢桿菌中提取得到的β-葡聚糖酶進(jìn)行了產(chǎn)酶條件、酶學(xué)活性、基因克隆等方面的研究；陳麗燕等［19］報(bào)道了兩株具有很好纖維素分解作用的菌株均為芽孢桿菌；劉海艷等［32］通過篩選得到一株高效纖維素降解菌短小芽孢桿菌，并針對(duì)該菌進(jìn)行了基因克??；李紅亞等［33］利用解淀粉芽孢桿菌對(duì)玉米秸稈進(jìn)行降解，發(fā)現(xiàn)該菌的酶活力可達(dá)45.4 U/g；羅偉光［34］從土壤中分離得到降解纖維素的枯草芽孢桿菌，劉永生等［35］從舊稻草堆中分離得到了1株具有纖維素降解能力的地衣芽孢桿菌，并針對(duì)該菌的一個(gè)纖維素基因進(jìn)行了克隆和測(cè)序分析。本研究分離出的解淀粉芽孢桿菌也是芽孢桿菌家族的一員，因此很有可能可以通過分子手段來提高該菌降解纖維素提高糖化水平的能力。

為了得到更好的纖維素降解菌株，有效利用秸稈等農(nóng)業(yè)廢棄物，變廢為寶，在接下來的工作中，可以利用分子生物學(xué)方法對(duì)本研究得到的菌株朝著高效利用纖維素的方向進(jìn)行改造，從而獲得高效分解纖維素的工程菌株。

［1］張紀(jì)偉. 瑞氏木霉Ras信號(hào)途徑對(duì)形態(tài)建成和纖維素酶合成的作用研究及酶系改良［D］. 濟(jì)南：山東大學(xué)，2013.

［2］董佳程. 黑曲霉降解馬鈴薯纖維素作用強(qiáng)化的研究［D］. 哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學(xué)，2013.

［3］王拓一，張杰，吳耘紅，等. 馬鈴薯渣的綜合利用研究［J］. 農(nóng)產(chǎn)品加工學(xué)刊，2008（7）：103-105.

［4］Somerville C，Bauer S，Brininstool Q，et al. Toward a systems approach to understanding plant cell walls［J］. Science，2004，306：2206-2211.

［5］馮玉杰，李冬梅，任南琪. 混合菌群用于纖維素糖化和燃料酒精發(fā)酵的試驗(yàn)研究［J］.太陽能學(xué)報(bào)，2007，28（4）：375-379.

［6］羅萍，陳永輝，賀軍軍，等. 菠蘿渣纖維素降解菌的篩選及鑒定［J］. 微生物學(xué)雜志，2011 （2）：59-63.

［7］林捷，譚兆贊，羅偉誠. 利用木薯渣進(jìn)行纖維素分解菌混合發(fā)酵工藝研究［J］. 安全與環(huán)境學(xué)報(bào)，2005（6）：26-29.

［8］李嘉薇，張庭婷，王雙飛. 纖維素酶水解糖化木薯稈的影響因素分析［J］. 造紙科學(xué)與技術(shù)，2009（5）：17-20，45.

［9］盧月霞，呂志偉，袁紅莉，等. 纖維素降解菌的篩選及其混合發(fā)酵［J］. 研究安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（10）：3952-3953.

［10］王麗，顏賢仔，周美鳳，等. 多菌種復(fù)合酶降解稻草纖維素的研究［J］. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005（4）：521-524.

［11］張曉倫，劉旭，饒澤昌. 高效纖維素分解菌混合培養(yǎng)及其降解能力［J］. 南昌大學(xué)學(xué)報(bào)（理科版），2005（5）：96-98.

［12］Peterson R，Nevalainen H. Trichoderma reesei RUT-C30 thirty years of strain improvement［J］. Microbiology，2012，158：58-68.

［13］Schwarz W. The cellulosome and cellulose degradation by anaerobic bacteria［J］. Applied Microbiology and Biotechnology，2001，56：5-6.

［14］Faterstam L T. The β-1.4-D-glucan cellobiohydrolases of Trichoderma reesei QM9414：A new type of cellulolytie synergism［J］. FEBS Lett，1980，119（1）：97-100.

［15］Lee S J，Lee K S，Kim S R，et al. A novel cellulase gene from the mulberry longicorn beetle，Apriona germari：gene structure，expression，and enzymatic activity［J］. Comparative Biochemistry and Physiology，2005，140（4）：551-560.

［16］陳梅. 斜臥青霉β-葡萄糖苷酶的性質(zhì)和功能研究及基因表達(dá)譜分析［D］. 濟(jì)南：山東大學(xué)，2013.

［17］金迪，彭清靜，易浪波，等. 一株纖維素降解細(xì)菌的篩選、鑒定及產(chǎn)酶條件分析［J］. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，2010（4）：289-292，295.

［18］葛春輝，徐萬里，邵華偉，等. 一株產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌的篩選、鑒定及其纖維素酶的部分特性［J］. 生物技術(shù)，2009（1）：36-40.

［19］陳麗燕，張光祥，黃春萍，等. 兩株高產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌的篩選、鑒定及酶學(xué)特性［J］. 微生物學(xué)通報(bào)，2011（4）：531-538.

［20］楊培周，姜紹通，鄭志，等. 4種工業(yè)微生物產(chǎn)纖維素酶酶學(xué)特性的比較研究［J］. 可再生能源， 2011（4）：68-71.

［21］徐杰. 水稻秸稈降解放線菌的分離鑒定及其降解機(jī)理研究［D］. 哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學(xué)，2011.

［22］Guo A L，Yang L，Liu M，et al. Studies on the cultural condition of strain cellulomonas flavigena cel1ulase［J］. Journal of Northwest University （Natural Science Edition），1999，29（6）：575-577.

［23］Wang M，Zhao X H. Regulation of enzyme synthesis of asp. niger strain W25［J］. Industrial Microbiology，1995，25（3）：13-15.

［24］Himmel M E，Ding S Y，Johnson D K，et al. Biomassrecalcitrance：engineering plants and enzymes for biofuelsproduction［J］. Science，2007，315（5813）：804-807.

［25］Qu Y B. Lignocellulose degrading enzymes and biorefinery［M］. Beijing：Chemical Industry Press，2011：121-154.

［26］Heinzelman P，Snow C D，Smith M A，et al. SCHEMA recombination of a fungal cellulase uncovers a single mutation that contributes markedly to stability［J］. J Biol Chem，2009，284（39）：26229-26233.

［27］Heinzelman P，Snow C D，Wu I，et al. A family of thermostable fungal cellulases created by structure-guided recombination［J］. Proc Natl Acad Sci USA，2009，106（14）：5610-5615.

［28］Lin Y S，Tsai L C，Lee S H，et al. Structural and catalytic roles of residues located in beta 13 strand and the following beta-turn loop in Fibrobacter succinogenes 1，3-1，4-beta-D-glucanase［J］. Biochimica Et Biophysica Acta-General Subjects，2009，1790：231-239.

［29］吳華偉，張展，李相前，等. 易錯(cuò)PCR定向進(jìn)化大幅度提高極耐熱β-葡聚糖酶的活性［J］. 食品與發(fā)酵工業(yè)，2010（5）：1-4.

［30］李永仙，謝焱，朱林江，等. 淀粉液化芽孢桿菌β-1，3-1，4-葡聚糖酶基因的克隆及表達(dá)［J］. 生物工程學(xué)報(bào)，2009（4）：542-548.

［31］Leelasuphakul W，Sivanunsakul P，Phongpaichit S. Purification，characterization and synergistic activity of β-1，3-glucanase and antibiotic extract from an an-tagonistic Bacillus subtilis NSRS 89-24 against riceblast and sheath blight ［J］. Enzyme and Microbial Technology，2006，38（7）：990-997.

［32］劉海艷，白龍，趙海波，等. 纖維素酶高產(chǎn)菌的篩選鑒定及纖維素酶基因的克隆與表達(dá)［J］.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012（5）：92-98.

［33］李紅亞，李術(shù)娜，王樹香，等. 解淀粉芽孢桿菌MN-8對(duì)玉米秸稈木質(zhì)纖維素的降解［J］. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2015（5）：1404-1410.

［34］羅偉光. 枯草芽孢桿菌源纖維素酶基因的克隆、表達(dá)及其酶學(xué)性質(zhì)［D］. 洛陽：河南科技大學(xué)，2015.

［35］劉永生，馮家勛，段承杰，等. 能降解天然纖維素的地衣芽孢桿菌GXN151的分離鑒定及其一個(gè)纖維素酶基因（cel5A）的克隆和測(cè)序分析［J］. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2003（2）：132-138.

（責(zé)任編輯 鄒移光）

Isolation，identification and saccharification level of cellulose degrading bacteria

ZHENG Li1，2，ZHANG Hai-peng2，SONG Yan-pei3，LIU Meng-hao3，HE Shi-yu1，MA Xu-dong1，QIN Xin-dao4，LI Bo-song1
（1. Guangzhou Experimental Station，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Guangzhou 510140，China；2. College of Agriculture，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；3. College of Materials and Energy，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；4. Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 571101，China）

In this study，298 bacteria were isolated from cassava microenvironments and 57 strains with cellulase activity were gained by in vitro detection test. Results showed that strains with big hydrolysis circle (the score of 3) accounted for 40.9% and strains with weakly hydrolysis circle（the score of 2 and 1） accounted for 27.9% and 24.6%，respectively. The saccharification level and enzyme activity were tested by DNS method，and we found 10 potential strains with efficient ability of degradation of cellulose，in which strain HWY-3-9 had the best saccharification and enzyme activity， the sugar content was 0.1852 mg/mL and enzyme activity was 0.0012 U/mL，and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens.

bacteria; cellulase; saccharification level.

S182

A

1004-874X（2017）02-0104-08

2016-11-14

中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院院本級(jí)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金（1630052015047）；海南省自然科學(xué)基金（314185）；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015A020209027）

鄭麗（1984-），女，在職博士生，助理研究員，E-mail：catas_lzheng@163.com

李伯松（1982-），男，博士，助理研究員，E-mail：84490477@qq.com

鄭麗，張海鵬，宋艷培，等.纖維素降解菌的篩選、鑒定和糖化水平研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（2）：104-111.