喬曉芳

（河南省食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，河南 鄭州 450000）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

高效液相色譜法測(cè)定甲基潑尼松龍琥珀酸鈉含量

喬曉芳

（河南省食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心，河南 鄭州 450000）

目的建立測(cè)定甲基潑尼松龍琥珀酸鈉含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱采用Thermo C18柱（250 mm×4.0 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈－3%冰醋酸（29∶71），檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫為25℃，流速為1.0 mL／min，進(jìn)樣量為20 L。結(jié)果甲基潑尼松龍琥珀酸鈉質(zhì)量濃度在0.08～0.12 g／L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0.999 5）；平均回收率為99.16%，RSD為0.09%(n＝5)。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好，可用于甲基潑尼松龍琥珀酸鈉原料藥的質(zhì)量控制。

甲基潑尼松龍琥珀酸鈉；高效液相色譜法；含量測(cè)定

甲基潑尼松龍琥珀酸鈉是甲基潑尼松龍琥珀酸鈉針的原料藥，臨床上主要用于抗炎[1－2]、免疫抑制、休克[3－5]和內(nèi)分泌失調(diào)的治療。易發(fā)生配伍禁忌[6]，多見過敏反應(yīng)[7－10]。在2015年版《中國藥典》中未見收載，本研究中按照《中國藥典》和人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）方法驗(yàn)證的相關(guān)規(guī)定，建立了測(cè)定甲基潑尼松龍琥珀酸鈉含量的高效液相色譜（HPLC）法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證[11－13]?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC－20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；二極管陣列檢測(cè)器（日本島津制作所）；AG285型電子天平（十萬分之一，瑞士梅特勒－托利多國際股份有限公司）。

1.2 試藥

甲基潑尼松龍琥珀酸鈉（河南利華制藥有限公司，批號(hào)分別為20A2015010201，20A20150102，20A20150103）；甲基潑尼松龍琥珀酸鈉對(duì)照品（Sigma－Aldrich公司，批號(hào)為SLBG7439V）；甲基氫化可的松琥珀酸單酯工作標(biāo)準(zhǔn)品(河南利華制藥有限公司，批號(hào)為53140621）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Thermo C18柱（250 mm×4.0 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－3%冰醋酸（29∶71）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣量：20 μL。

各稱取甲基潑尼松龍琥珀酸鈉對(duì)照品和甲基氫化可的松琥珀酸單酯工作標(biāo)準(zhǔn)品適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋成每1 mL分別約含甲基潑尼松龍琥珀酸鈉對(duì)照品和甲基氫化可的松琥珀酸單酯0.02 mg的溶液。取20 μL注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖。甲基潑尼松龍琥珀酸鈉峰和甲基氫化可的松琥珀酸單酯峰的分離度為2.5，符合要求。色譜圖見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

供試品溶液：精密稱取甲基潑尼松龍琥珀酸鈉適量，加流動(dòng)相溶解，并定量稀釋成每1 mL約含0.1 mg的溶液，即得。

對(duì)照品溶液：精密稱取甲基潑尼龍琥珀酸鈉對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解，并定量稀釋成每1 mL約含0.1 mg的溶液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別取空白溶液（流動(dòng)相溶液）和供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，空白溶液色譜圖中無干擾供試品溶液測(cè)試的溶劑峰，詳見圖2 A。向供試品溶液中加入甲基潑尼松龍后進(jìn)樣，記錄色譜圖，加入的甲基潑尼松龍不干擾供試品溶液測(cè)試，詳見圖2。

精密度試驗(yàn)：依法制備甲基潑尼松龍琥珀酸鈉對(duì)照品溶液（約0.1 g／L）1份，取20 μL注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.16%（n＝5），詳見表1，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取甲基潑尼松龍琥珀酸鈉供試品溶液（約0.1 g／L），常溫放置，于0，4，8，12 h時(shí)分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定甲基潑尼松龍琥珀酸鈉峰面積。結(jié)果峰面積平均值為2 999 812，RSD為0.65%（n＝4），表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品(批號(hào)為20A20150102)適量，依法平行制備甲基潑尼松龍琥珀酸鈉供試品溶液（約0.1 g／L）6份，對(duì)照品溶液（約0.1 g／L）1份，分別進(jìn)樣20 μL，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果甲基潑尼松龍琥珀酸鈉含量平均值為98.37%，RSD為0.16%（n＝6），詳見表2，表明方法重復(fù)性良好。

圖2 高效液相色圖譜

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

線性關(guān)系考察：精密稱取甲基潑尼松龍琥珀酸鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相制成質(zhì)量濃度約0.5 g／L的貯備液，分別精密量取貯備液4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 mL置 25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，即得每1 mL含甲基潑尼松龍琥珀酸鈉0.08，0.09，0.10，0.11，0.12 mg的溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝3 0145 893 X－22 250，r＝0.999 5(n＝5）。結(jié)果表明,甲基潑尼松龍琥珀酸鈉質(zhì)量濃度在0.08～0.12 g／L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為20A20150102），按80%，100%，120%濃度水平各平行制備3份溶液，分別進(jìn)樣20 μL，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果見表3。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表3 甲基潑尼松龍琥珀酸鈉加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取甲基潑尼松龍琥珀酸鈉供試品溶液（約0.1g／L），常溫放置，于0，4，8，12h時(shí)分別進(jìn)樣20μL，測(cè)定甲基潑尼松龍琥珀酸鈉峰面積。結(jié)果峰面積平均值為2 999 812，RSD為0.65%（n＝4），表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測(cè)定[14]

取 3批樣 品 （批 號(hào) 分 別 為 20A2015010201，20A20150102，20A20150103），按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述溶液各20 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果3批樣品的含量分別為98.7%，98.5%，98.2%。

3 討論

采用2根不同編號(hào)的色譜柱，流速相對(duì)值變化±20%，改變流動(dòng)相比例分別為乙腈－3%冰醋酸（305∶695)和乙腈－3%冰醋酸（275∶725），測(cè)試甲潑尼龍琥珀酸鈉含量。試驗(yàn)結(jié)果為個(gè)條件下甲基潑尼松龍琥珀酸鈉峰和甲基氫化可的松琥珀酸單酯峰的分離度均大于1.5，連續(xù)5次對(duì)照?qǐng)D譜中甲基潑尼松龍琥珀酸鈉峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.0%，各條件下的含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.15%，表明方法耐用性較強(qiáng)。

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Content Determination of M ethylprednisolone Sodium Succinate by HPLC

Qiao Xiaofang
(Henan Food and Drug Evaluation and Inspection Center,Zhengzhou,Henan,China 450000)

Objective To establish an HPLC method for the content determination of methylprednisolone sodium succinate.M ethods The mobile phase consisted of acetonitrile－3% glacial acetic acid(29∶71).The detection wavelength was 254 nm,the column temperature was 25℃ and the flow rate was 1.0 mL／min.The sample volume was 20 μL.Results The linear relation of the concentration and peak area was good in the range of 0.08－0.12 mg／mL(r＝0.999 5).The average percentage of recovery was 99.16%,the RSD was 0.09%(n＝5).Conclusion The method is accurate and reproducible,which can be used for the quality control of methylprednisolone sodium succinate.

methylprednisolone sodium succinate;HPLC;content determination

R927.2

A

1006－4931(2017)05－0029－03

2016－07－13；

2016－11－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.007

喬曉芳，女，大學(xué)本科，主管藥師，主要從事食品藥品檢驗(yàn)工作，（電子信箱）ayqiaoxiaofang＠163.com。