鄭國(guó)宏+史紅玲+戢培華

摘要：用有機(jī)磷類農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥各3種標(biāo)液對(duì)晉中市一種常用的農(nóng)藥殘留速測(cè)儀進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，這種速測(cè)儀對(duì)不同品種農(nóng)藥敏感性不一，對(duì)敵敵畏特別敏感，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限；對(duì)克百威、滅克威能做初步判定，對(duì)對(duì)硫磷、甲胺磷、丁硫滅克威遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限。因此在速測(cè)儀實(shí)際使用中先用農(nóng)藥標(biāo)液標(biāo)定，對(duì)檢測(cè)結(jié)果才能準(zhǔn)確判定。

關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留速測(cè)儀；有機(jī)磷類農(nóng)藥；氨基甲酸酯類農(nóng)藥

近年來隨著人們生活水平的提高，對(duì)蔬菜、水果等農(nóng)產(chǎn)品提出較高的要求，然而隨著種植面積不斷擴(kuò)大，保護(hù)地設(shè)施栽培的比重日益增加。病蟲抗藥能力的日益增強(qiáng)使相應(yīng)農(nóng)藥的用量不斷上升，其殘留量也越來越多。蔬菜、水果中的農(nóng)藥殘留問題一直以來就對(duì)我們的生活飲食、健康甚至國(guó)家經(jīng)濟(jì)的發(fā)展都有重要的影響，甚至全國(guó)每年都有上百起因?yàn)槭秤棉r(nóng)藥殘留量過大的農(nóng)產(chǎn)品而引起的農(nóng)藥中毒事件[1]，而有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥引發(fā)的中毒情況尤為突出。據(jù)統(tǒng)計(jì)，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑占全球農(nóng)藥市場(chǎng)的57% 以上，是目前全國(guó)使用范圍最廣和使用量最大的兩類農(nóng)藥[2]，約占農(nóng)藥使用總量的70%， 且多噴灑在蔬菜、水果的表面，很容易被人體攝入。其快速檢測(cè)方法的研究具有較高的經(jīng)濟(jì)與實(shí)際價(jià)值[3]。

20世紀(jì)氣相色譜與高效液相色譜廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留的準(zhǔn)確分析。但設(shè)備昂貴，需要專業(yè)人員操作[4]，且分析時(shí)間長(zhǎng)，不利于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)[5]。近年來，農(nóng)殘速測(cè)儀應(yīng)用于農(nóng)藥殘留的監(jiān)測(cè)已引起了人們的廣泛關(guān)注，相比傳統(tǒng)的高效液相、氣相色譜以及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，農(nóng)殘速測(cè)儀具有檢測(cè)速度快、容易操作，價(jià)格低廉、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)；并且經(jīng)過微型化改造的農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀容易攜帶，便于在戶外進(jìn)行實(shí)地檢測(cè)。主要農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和大型超市都配有這類速測(cè)儀，此外在大部分主要蔬菜和水果生產(chǎn)基地也都配了這類檢測(cè)儀，可以說是使用最廣泛的農(nóng)藥殘留速測(cè)儀。晉中市目前就有農(nóng)藥殘留速測(cè)儀147臺(tái)，基本配置在鄉(xiāng)一級(jí)，為了準(zhǔn)確掌握農(nóng)藥殘留速測(cè)儀的檢測(cè)水平和對(duì)當(dāng)?shù)剞r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)，我們選用敵敵畏、對(duì)硫磷、甲胺磷、克百威、滅多威、丁硫克百威六種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)晉中常用的一種農(nóng)藥殘留速測(cè)儀用國(guó)標(biāo)（GB/T5009.199-2003）中的酶抑制法進(jìn)行測(cè)定。

1 農(nóng)藥殘留速測(cè)儀

1.1 速測(cè)儀原理

農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀基于酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)原理，被測(cè)樣品中如含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥會(huì)對(duì)膽堿酯酶活性正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（底物）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，農(nóng)藥殘留量從而影響顯色體系的反應(yīng)速度，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，速測(cè)儀中的分光光度計(jì)在412 nm處通過測(cè)定顯色體系吸光度隨時(shí)間的變化率來測(cè)量待測(cè)樣品中的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留總量（抑制率），檢測(cè)時(shí)間為3 min，使用乙酰膽堿酯酶。

1.2 六種農(nóng)藥的檢出限

國(guó)標(biāo)（GB/T5009.199-2003） 酶抑制率法對(duì)3種有機(jī)磷和3種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢出限見表1。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 主要儀器與試劑

儀器：多通道農(nóng)藥殘留速測(cè)儀；恒溫箱；微量電子天平（0.00-100.00 g）；移液槍。

檢測(cè)藥品：敵敵畏、對(duì)硫磷、甲胺磷、克百威、滅多威、丁硫克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000 ug/ mL）。

檢測(cè)材料：白菜葉、白菜莖、黃瓜、土豆、尖椒、生菜（均為菜市場(chǎng)購(gòu)入）。

配套農(nóng)殘?jiān)噭┖校壕彌_液：磷酸緩沖溶液，pH=8、膽堿酯酶：乙酰膽堿酯酶（ATCI）、底物：碘化硫代乙酰膽堿、顯色劑：二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）。

2.2 農(nóng)殘?jiān)噭┑呐渲煤蜆悠奉A(yù)處理

2.2.1 農(nóng)殘?jiān)噭┑呐渲?。緩沖液：取一包緩沖劑加入到500 mL蒸餾水中，攪拌溶解制成磷酸緩沖液，常溫保存，每次使用取2.5 mL；酶：無需配置，可直接取用，每次取100 uL，4℃保存。該試劑在臨用前取出一瓶打開，用一瓶打開一瓶，要防止其他污染物的污染，以免酶試劑失效。不在使用狀態(tài)時(shí)酶試劑應(yīng)在4℃冰箱內(nèi)保存；底物：取一瓶底物加入12.5 mL緩沖液溶解，4℃保存，使用時(shí)取100 uL；顯色劑：取一瓶顯色劑加入25 mL緩沖液溶解，4℃保存，避光，使用時(shí)取100 uL。

2.2.2 樣品預(yù)處理。將六種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成滿足測(cè)定要求的各濃度溶液，每次使用2.5 mL，三次重復(fù)。取2 g果蔬樣品（塊莖類取4 g）剪成1 cm左右見方碎片（塊莖類剪成1 cm3左右），放入小燒杯（或取樣瓶）中，加入10 mL緩沖液，振蕩1-2 min，倒出提取液，靜置2 min待測(cè)。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

2.3.1 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液抑制率的測(cè)定。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)試：于專用反應(yīng)瓶中加入2.5 mL待測(cè)溶液，再分別加入100 uL顯色劑和膽堿酯酶，混勻，37℃下放置15 min后加入底物，搖勻并立即倒入比色皿中，放入測(cè)試通道，按儀器“樣品鍵”，測(cè)試3min的吸光度變化值ΔAt。

2.3.2 菜樣抑制率的測(cè)定。蔬菜樣品測(cè)試：于專用反應(yīng)瓶中加入2.5 m待測(cè)蔬菜提取液，再分別加入100 uL顯色劑和膽堿酯酶，混勻，37℃下放置15 min后加入底物，搖勻并立即倒入比色皿中，放入測(cè)試通道，按儀器“樣品鍵”，測(cè)試3 min的吸光度變化值ΔAt。

3 結(jié)果與分析

3.1 六種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度-抑制率

3.1.1 敵敵畏。當(dāng)敵敵畏標(biāo)液濃度為0.0005 mg/kg時(shí)，抑制率為43.4%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限0.1 mg/kg。

3.1.2 對(duì)硫磷。當(dāng)對(duì)硫磷標(biāo)液濃度為5 mg/kg時(shí)，抑制率為49.2%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限1.0mg/kg。

3.1.3 甲胺磷。當(dāng)甲胺磷標(biāo)液濃度為4 mg/kg時(shí)，抑制率為48.5%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限2.0 mg/kg。

3.1.4 克百威。當(dāng)克百威標(biāo)液濃度為0.08 mg/kg時(shí)，抑制率為49.2%，接近于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限0.05 mg/kg（抑制率44.6%）。

3.1.5 滅多威。當(dāng)滅多威標(biāo)液濃度為0.2 mg/kg時(shí)，抑制率為54.4%，GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限0.1 mg/kg時(shí)，抑制率為42.4%。兩者相接近。

4 結(jié)論

這種速測(cè)儀對(duì)不同品種農(nóng)藥敏感性不一，對(duì)敵敵畏特別敏感，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限；對(duì)克百威、滅克威能做初步判定，對(duì)對(duì)硫磷、甲胺磷、丁硫滅克威遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于GB/T5009.199-2003規(guī)定的檢出限。因此在速測(cè)儀實(shí)際使用中先用農(nóng)藥標(biāo)液標(biāo)定，對(duì)檢測(cè)結(jié)果才能準(zhǔn)確判定。

5 討論

5.1 酶對(duì)速測(cè)儀結(jié)果的影響

本實(shí)驗(yàn)中所用酶為乙酰膽堿酯酶，主要從家蠅等敏感昆蟲頭部提取。乙酰膽堿酯酶的制備比較困難，并且保存時(shí)間短，酶失活較嚴(yán)重，酶的來源不穩(wěn)定，不同來源的酶造成檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性較差，一部分樣品對(duì)檢測(cè)結(jié)果有較大的影響。所以，未能廣泛推廣。

5.2 速測(cè)結(jié)果的討論

按照國(guó)標(biāo)GB/T5009.199-2003，最低檢出限分別是0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg，如果按照操作規(guī)程2 g樣品計(jì)算，計(jì)算樣品殘留含量分別是：0.25 mg/kg、0.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg，根據(jù)衛(wèi)生、農(nóng)業(yè)部1991年頒布的《農(nóng)藥安全毒性學(xué)評(píng)價(jià)程序》中的規(guī)定，劇毒經(jīng)口LD50<5 mg/kg，高毒經(jīng)口LD50 在5 -10 mg/kg，對(duì)超出檢測(cè)結(jié)果的蔬菜要引起足夠的重視?，F(xiàn)階段全國(guó)所使用的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法存在著不能精確定量的問題。該方法還在其靈敏度、定性能力、覆蓋范圍方面收到嚴(yán)重限制，無法滿足農(nóng)殘快速檢測(cè)的發(fā)展需求。

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