王紅宇，李明珠

Th1/Th2型細(xì)胞因子與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性研究

王紅宇，李明珠

目的探討Th1/Th2型細(xì)胞因子與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（URSA）發(fā)病及發(fā)病時間、次數(shù)的相關(guān)性。方法治療組為150例URSA患者，給予主動免疫療法治療。對照組為100例正常早期妊娠要求人工流產(chǎn)婦女。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測治療組治療前后及對照組外周血清中IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4比值。結(jié)果治療組治療前IFN-γ、IL-4水平與對照組比較，有顯著性差異（P＜0.05）。治療組治療后IL-4、IFN-γ水平與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療組治療后較治療前IL-4水平升高，IFN-γ水平下降顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。URSA婦女反復(fù)流產(chǎn)次數(shù)與IFN-γ/IL-4水平無關(guān)（P＞0.05），流產(chǎn)時間與IFN-γ/IL-4水平有關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論正常妊娠表現(xiàn)為一種特殊的Th2現(xiàn)象，當(dāng)Th1型細(xì)胞因子過度表達(dá)，Th2型細(xì)胞因子處于抑制狀態(tài)時，將導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。

原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)；Th1/Th2型細(xì)胞因子；主動免疫治療

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)，其發(fā)生涵蓋遺傳、解剖、內(nèi)分泌、感染、不良生活習(xí)慣等因素，但仍有40%～60%患者找不到原因稱為原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）［1］?，F(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為正常妊娠中母體對攜有1/2父方遺傳基因的半同種異體胎兒之所以不發(fā)生排異反應(yīng)，是因?yàn)槟阁w免疫系統(tǒng)特殊的免疫容忍機(jī)制產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答。任何因素干擾了母胎免疫耐受平衡則均導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。近年來T輔助細(xì)胞1、2（Th1、Th2）型細(xì)胞因子為免疫學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，其與URSA發(fā)生的關(guān)聯(lián)也受到越來越多學(xué)者的關(guān)注。本研究通過檢測外周血IFN-γ及IL-4的水平探討Th1/Th2型細(xì)胞因子與URSA的發(fā)生及發(fā)生時間、次數(shù)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料治療組：2012年8月—2015年8月就診于中國人民解放軍第371中心醫(yī)院門診的URSA患者150例。納入標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)兩次或兩次以上自然流產(chǎn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）雙方染色體核型分析異常；（2）夫妻雙方ABO和（或）Rh血型不合；（3）女方內(nèi)分泌檢測異常；（4）女方存在生殖道器質(zhì)性病變；（5）抗子宮內(nèi)膜抗體、抗精子抗體、抗心磷脂抗體等自身抗體陽性；（6）經(jīng)TORCH、衣原體、支原體等檢查證實(shí)生殖道感染；（7）封閉抗體檢測陰性；（8）男方精液常規(guī)分析異常；（9）有自身免疫疾病和（或）有神經(jīng)、精神疾患無法配合者或不愿配合者。

對照組：選擇同期正常早期妊娠婦女100例為來筆者所在科要求人工流產(chǎn)者。符合下列要求：（1）以前均有過正常妊娠和分娩史而無死胎、死產(chǎn)、自然流產(chǎn)史；（2）此次妊娠期間無先兆流產(chǎn)的癥狀和體征，B超檢查提示胚胎發(fā)育正常；（3）治療組的全部排除標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 治療組治療方法治療組給予外周淋巴細(xì)胞主動免疫治療。方法如下：檢查排除供血者傳染性疾病病原體（肝炎病毒，梅毒螺旋體，艾滋病病毒）后抽取其肘靜脈血30 ml肝素抗凝，在無菌條件下分離提取淋巴細(xì)胞，調(diào)整淋巴細(xì)胞濃度為（3～4）×107個/ml，制備懸液約2 ml，治療組患者前臂尺側(cè)位點(diǎn)做6～8點(diǎn)皮下注射，每次每點(diǎn)0.2～0.3 ml，1次/周。若已妊娠持續(xù)免疫治療至妊娠12周。

治療組于停經(jīng)30 d查血β-HCG提示懷孕則開始治療，治療期間發(fā)現(xiàn)宮外孕者予以剔除并按異位妊娠治療，其余病例繼續(xù)治療至孕12周，期間胚胎停止發(fā)育者則終止治療，選妊娠成功者結(jié)果納入統(tǒng)計(jì)。

1.3 標(biāo)本采集抽取受試者空腹無菌外周靜脈血2 ml，分離血清，置-20℃冰箱凍存待測。其中對照組就診次日抽血，治療組于就診次日及妊娠成功時抽血。

1.4 細(xì)胞因子的檢測采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心（ELISA）法，測定血清中的IFN-γ及IL-4的水平，檢測過程嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 妊娠成功標(biāo)準(zhǔn)臨床妊娠至12周，超聲提示胎兒發(fā)育正常為妊娠成功。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，治療前后比較用配對樣本t檢驗(yàn)，運(yùn)用Spearman秩次相關(guān)分析分析其相關(guān)性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

治療組150例經(jīng)主動免疫治療后妊娠成功132例，宮外孕1例，胚胎停止發(fā)育17例。

2.1 各組IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4水平變化治療組治療前血清IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療組治療后血清IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療組治療后較治療前血清IFN-γ水平顯著下降、IL-4水平明顯升高（P<0.05）。見表1。

表1 各組IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4水平（pg/ml）

2.2 治療組反復(fù)流產(chǎn)次數(shù)與IFN-γ/IL-4水平的關(guān)系治療組既往流產(chǎn)2次者82例IFN-γ/IL-4水平比流產(chǎn)大于2次者68例略低（2.19±0.37 vs 2.24±0.40），差異無顯著性（P>0.05）。

2.3 治療組流產(chǎn)發(fā)生時間與IFN-γ/IL-4水平的關(guān)系治療組發(fā)生流產(chǎn)的孕周越早（<9 W的91例，與≥9 W的59例相比），其IFN-γ/IL-4水平越高（2.44±0.37 vs 2.27±0.30），差異有顯著性（P<0.05）。

3 討論

不明原因是發(fā)病機(jī)制尚未明了而不是沒有原因。近年來，許多學(xué)者對URSA的體液免疫、細(xì)胞免疫、子宮免疫防護(hù)等各種免疫學(xué)因素進(jìn)行了探討。有研究發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞免疫中，Th1細(xì)胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）和腫瘤壞死因子-ɑ（TNF-ɑ）等，與炎癥和組織損傷有關(guān)。Th2細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素-4、6、10（IL-4、IL-6、IL-10）等，抑制免疫炎癥，促使抗體形成，防止過度損傷。Th1型與Th2型免疫應(yīng)答之間相互抑制，彼此制約調(diào)節(jié)正常的免疫平衡。正常妊娠中存在Th1、Th2型細(xì)胞應(yīng)答生理性失衡，母體Th2型細(xì)胞占優(yōu)勢，進(jìn)而發(fā)揮免疫保護(hù)作用維持妊娠。而URSA表現(xiàn)為一種特殊的Th1現(xiàn)象，Th1型細(xì)胞因子分泌增多，免疫損傷作用增強(qiáng)，損害妊娠，導(dǎo)致流產(chǎn)［2］。本研究比較了復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者、正常早孕者血清中IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4因子水平得知Th1、Th2細(xì)胞因子在妊娠的免疫調(diào)節(jié)中起重要作用，決定妊娠發(fā)展的方向，優(yōu)勢Th1細(xì)胞因子表達(dá)可能是妊娠失敗的免疫學(xué)因素。王越等［3］對16例正常妊娠6～12周的孕婦外周血分離淋巴細(xì)胞。檢查其培養(yǎng)液中Th1型細(xì)胞因子IFN-γ及Th2型細(xì)胞因子IL-4的含量，結(jié)果妊娠婦女IFN-γ水平顯著低于對照組，而IL-4水平高于對照組近3倍。李昭榮等［4］對54例URSA患者血清及蛻膜組織中IL-2、IFN-γ的含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明URSA患者血清及蛻膜組織中IL-2、IFN-γ的水平均高于正常對照組。

近年來認(rèn)為淋巴細(xì)胞主動免疫治療可以調(diào)節(jié)母胎免疫平衡，其應(yīng)用于臨床取得了較高的妊娠率［5，6］。衛(wèi)愛武［7］在其主動免疫療法對原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的防治及妊娠結(jié)局的影響中發(fā)現(xiàn)，淋巴細(xì)胞主動免疫療法為URSA的有效治療手段。在本臨床研究中，URSA患者經(jīng)主動免疫治療后可明顯提高Th2型細(xì)胞因子并下調(diào)Th1型細(xì)胞因子，糾正母體免疫紊亂狀態(tài)，助妊娠成功。此外，筆者發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者流產(chǎn)次數(shù)與IFN-γ/IL-4水平無關(guān)，而流產(chǎn)時間與IFN-γ/IL-4水平密切關(guān)聯(lián)。鑒于外周IL-4、IFN-γ水平與URSA婦女流產(chǎn)關(guān)系密切，因此臨床上對URSA患者尤其流產(chǎn)時間較早者應(yīng)進(jìn)行免疫功能的檢測，以便及時采取相應(yīng)治療措施，防止流產(chǎn)反復(fù)發(fā)生。

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［2016－08－25收稿，2016－09－22修回］［本文編輯：宋敏］

Relativity study on Th1/Th2 type cytokines and unexplained recurrent spontaneous abortion

WANG Hong-yu，LI Ming-zhu.Dept.of Obstetrics and Gynecology，No.371 Hospital of PLA，Xinxiang，Henan 453000，China

ObjectiveTo explore the relativity of Type Th1/Th2 cytokines and unexplained recurrent spontaneous abortion（URSA），onset time and the number.MethodsThe 150 patients with unexplained recurrent miscarriage admitted in No.371 hospital were enrolled in study，and subject to active immune therapy as research group.The 100 cases of normal early pregnancy require induced abortion were control group.Double antibody Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect before and after treatment the peripheral blood's IFN-gamma，IL-4 levels and IFN-gamma/IL-4 ratio.ResultsResearch group's IFN-gamma，IL-4 level before treatment compared with control group，had significant difference（P<0.05）；while after treatment compared with the control group difference was statistically significant（P>0.05）.After treatment than before treatment IL-4 levels，IFN-gamma levels drop significantly，the difference was statistically significant（P<0.05）.URSA women abortion times repeatedly had nothing to do with IFN-gamma/IL-4 levels（P>0.05）；abortion time was associated with IFN-gamma/IL-4 levels（P<0.05）.ConclusionNormal pregnancy is a special kind of Th2 phenomenon，excessive expression of cytokines as Th1 type Th2 type cytokines are in a state of suppression which will lead to the occurrence of abortion.

Unexplained recurrent spontaneous abortion；Th1/Th2 type cytokines；Active immunotherapy

R714.21

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.03.008

453000河南新鄉(xiāng)，解放軍371醫(yī)院婦產(chǎn)科（王紅宇，李明珠）