田 淼，晁 旭，何春玲，劉晶晶，田林濤，董昌虎△

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué) (咸陽 712046)，2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(咸陽 712046)

急性白血病患者血清PDGF、HMGB1及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平研究*

田 淼1，2，晁 旭1，2，何春玲2，劉晶晶2，田林濤2，董昌虎1，2△

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué) (咸陽 712046)，2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(咸陽 712046)

目的：探究急性白血病患者血清血小板衍生因子(PDGF)、高遷移率族蛋白1(HMGB1)及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平。方法：選擇46例急性白血病患者為觀察組，且選擇同期健康體檢者30例為對照組，再測定對觀察組、對照組血清PDGF、HMGB1及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平，并給予統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：初診組、復(fù)發(fā)組的PDGF、HMGB1水平均顯著高于完全緩解組(P<0.05)。完全緩釋組PDGF、HMGB1水平較初診組顯著降低，與對照組對比無顯著差異(P>0.05)。在急性白血病患者中，VEGF-C在初診組、完全緩解組及對照組中均不表達(dá)。初診組VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R3均顯著高于完全緩解組(P<0.05)，完全緩解組與對照組對比(P>0.05)；初診組、完全緩解組VEGF-R2均顯著高于對照組(P<0.05)。初診患者血清PDGF與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關(guān)分析，結(jié)果無相關(guān)；血清HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關(guān)分析，結(jié)果無相關(guān)。結(jié)論：急性白血病進(jìn)展與血清PDGF、HMGB1及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平密切相關(guān)，可通過檢測血清PDGF、HMGB1及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子水平評估患者預(yù)后效果。

白血病表現(xiàn)為機(jī)體造血組織中白血病細(xì)胞不斷惡性增殖，且浸潤到組織與各臟器進(jìn)而阻礙正常造血細(xì)胞發(fā)揮作用，其屬于造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病[1-2]?；颊咄ǔ１憩F(xiàn)為發(fā)熱、貧血、淋巴結(jié)腫大。目前針對白血病發(fā)病機(jī)制尚未明確，但相關(guān)研究指出，血清血小板衍生因子(PDGF)、高遷移率族蛋白1(HMGB1)及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子等在其發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[3-4]。隨臨床深入研究，逐漸采用現(xiàn)代分子生物學(xué)、遺傳學(xué)檢測方法從基因、細(xì)胞分子水平上有效抑制以有效治療白血病[5]。本研究旨在探究急性白血病患者血清PDGF、HMGB1及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平,現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1 一般資料 選擇2014年9月至2016年9月我院收治46例急性白血病患者為觀察組，其中男25例，女21例，年齡15～77歲，平均年齡為(51.4±4.2)歲，26例為初診患者， 10例完全緩解，10例為復(fù)發(fā)患者。全部患者均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》，排除伴有其他惡性腫瘤、感染性疾病、相關(guān)免疫性疾病等患者。再選擇同期20例我院健康體檢者為對照組，其中男12例，女8例，年齡16～78歲，平均年齡為(52.4±6.7)歲。兩組在一般資料上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

2 儀器與試劑 PDGF-ABELISA 試劑盒(廠家：上海西唐公司)、HMGB1ELISA試劑盒(廠家：武漢優(yōu)爾生公司生產(chǎn))、血管內(nèi)皮生長因子-A(VEGF-A) ELISA試劑盒(廠家：深圳達(dá)科為生物技術(shù)有限公司)、VEGF-C ELISA試劑盒(廠家：武漢優(yōu)爾生公司生產(chǎn))、VEGF-R1試劑盒(廠家：武漢優(yōu)爾生公司生產(chǎn))、VEGF-R2試劑盒(廠家：武漢優(yōu)爾生公司生產(chǎn))、VEGF-R3試劑盒(廠家：武漢優(yōu)爾生公司生產(chǎn))。檢驗(yàn)中所需離心管、量筒、燒杯、移液器頭均經(jīng)滅菌，避免污染。主要儀器：低速離心機(jī)、37℃孵育箱、超低溫冰箱、酶標(biāo)儀。

3 標(biāo)本收集 清晨抽取患者2 ml肘靜脈空腹血，以9∶1經(jīng)129 mmol/L枸緣酸鈉抗凝，行10 min 2000 r/min離心，分離血清至EP管，后在-80℃冷藏備用。

4 檢驗(yàn)方法 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對血清中PDGF、HMGB1、VEGF-A、VEGF-C、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3進(jìn)行測定。所有標(biāo)本均需按試劑盒說明進(jìn)行操作。ELISA基礎(chǔ)即為抗體固相化與酶標(biāo)記，在固相載體表面抗體上結(jié)合，且能夠保持免疫學(xué)活性。酶標(biāo)記抗體一方面可保留免疫學(xué)活性，又可保障酶活性。測定期間，受檢標(biāo)本、固相載體表面抗體發(fā)生反應(yīng)。采用洗滌方式分離固相載體上抗原抗體復(fù)合物及液體中其他物質(zhì)。這時(shí)固相酶量、標(biāo)本中受檢物質(zhì)量存在比例關(guān)系。再加入酶反應(yīng)底物，其會(huì)在酶的催化下生成有色產(chǎn)物，其產(chǎn)物量和標(biāo)本受檢物量存在直接關(guān)系，因此能夠通過呈色深淺給予的定性或定量分析。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料經(jīng)均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，且經(jīng)t檢驗(yàn)，P<0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 急性白血病患者血清中PDGF、HMGB1表達(dá)水平 初診組、復(fù)發(fā)組的PDGF、HMGB1水平均顯著高于完全緩解組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。完全緩釋組PDGF、HMGB1水平較初診組顯著降低，與對照組對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表1。

表1 急性白血病患者血清中PDGF、HMGB1含量(pg/ml)

2 急性白血病患者血清中VEGF-A、VEGF-C、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3表達(dá)水平 在急性白血病患者中，VEGF-C在初診組、完全緩解組及對照組中均不表達(dá)。初診組VEGF-A均顯著高于完全緩解組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，完全緩解組與對照組對比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；初診組、完全緩解組VEGF-R2均顯著高于對照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見表2。

表2 急性白血病患者血清中VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3表達(dá)水平(pg/ml)

3 急性白血病初診患者血清中PDGF、HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關(guān)性分析 初診患者血清PDGF與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關(guān)分析，結(jié)果無相關(guān)(r=-0.342,r=-0.089,r=-0.053;r=0.078,P>0.05)；血清HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關(guān)分析，結(jié)果無相關(guān)(r=-0.530,r=-0.079,r=-0.047;r=0.094,P>0.05)。

討 論

急性白血病發(fā)生、發(fā)展具有一定連續(xù)性，步驟與環(huán)節(jié)較為繁瑣。近些年研究指出高遷移率族蛋白I能夠在未成熟細(xì)胞與實(shí)體腫瘤組中豐富表達(dá)，是重要炎癥因子[6]。其能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展起到調(diào)節(jié)作用，參與到腫瘤轉(zhuǎn)移與擴(kuò)散中，此外還可對炎癥反應(yīng)、細(xì)胞免疫等進(jìn)行調(diào)控[7]。

在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展期間血管新生發(fā)揮著重要作用，對于原發(fā)腫瘤或轉(zhuǎn)移性腫瘤在生長、擴(kuò)散期間均依賴血管生成，若未生成新生血管，則腫瘤所需營養(yǎng)物質(zhì)與氧只由細(xì)胞外基質(zhì)通過彌散的方式基于，因此導(dǎo)致控制其生長。但當(dāng)血管形成前期到達(dá)血管形成期后腫瘤則會(huì)表現(xiàn)為不可控制生長。多數(shù)研究[8]表明，腫瘤血管生成與惡性腫瘤侵襲性緊密相關(guān)，其中生長、轉(zhuǎn)移均對血管生成存在依賴性。腫瘤血管生成過程受到正負(fù)調(diào)控因子調(diào)控的過程。

在腫瘤新生血管生成的過程中VEGF發(fā)揮著重要作用。大量研究顯示，對于急性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓異常增生等疾病中均伴有血管新生，HMGB1可在血液惡性腫瘤中表達(dá)，其還能夠經(jīng)旁分泌引發(fā)淋巴瘤細(xì)胞增殖侵襲與轉(zhuǎn)移。HMGB1高表達(dá)狀態(tài)下，可導(dǎo)致白血病細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的能力[9]。此外還在腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移期間發(fā)揮著重要作用，可對腫瘤轉(zhuǎn)移潛能、生物學(xué)行為產(chǎn)生嚴(yán)重影響，且與預(yù)后相關(guān)。因此的推測HMGB1與血管新生相關(guān)因子間具有一定關(guān)聯(lián)，可促進(jìn)急性白血病發(fā)生與發(fā)展。PDGF屬血管生成因子，其與的腫瘤發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系。當(dāng)腫瘤細(xì)胞釋放PDGF后即可使得平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移，此外還能夠促進(jìn)該類細(xì)胞增殖，直接影響到腫瘤血管的發(fā)生。同時(shí)PDGF還能提高VEGF表達(dá)水平，間接誘導(dǎo)生成血管，表明腫瘤中PDGF可通過自分泌、旁分泌加快腫瘤細(xì)胞生長，浸潤周圍基質(zhì)，刺激血管再生。PDGF激活能夠顯著增強(qiáng)組織間壓力，繼而對組織吸收抗癌藥物產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響療效[10]。

本研究中，選擇46例急性白血病患者為觀察組，健康體檢者30例為對照組，結(jié)果顯示，初診組、復(fù)發(fā)組PDGF、HMGB1水平均顯著高于完全緩解組。完全緩釋組PDGF、HMGB1水平較初診組顯著降低。表明PDGF、HMGB1在急性白血病患者中表達(dá)水平較高。在急性白血病患者中，VEGF-C在初診組、完全緩解組及對照組中均不表達(dá)。初診組VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R3均顯著高于完全緩解組；初診組、完全緩解組VEGF-R2均顯著高于對照組。表明VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R3在急性白血病患者中表達(dá)水平較高。初診患者血清PDGF與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關(guān)分析，結(jié)果無相關(guān)；血清HMGB1與VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2、VEGF-R3相關(guān)分析，結(jié)果無相關(guān)。

綜上所述，急性白血病進(jìn)展與血清PDGF、HMGB1及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)水平密切相關(guān)，可通過檢測血清PDGF、HMGB1及相關(guān)血管內(nèi)皮生長因子水平評估患者預(yù)后效果，為臨床靶向治療急性白血病提供了新方向。

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(收稿：2016-10-17)

*陜西省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科研課題(15-SCJH018)

白血病 @血小板衍生因子 @高遷移率族蛋白1 血管內(nèi)皮生長因子

R557

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.04.044

△通訊作者