張艷秋+韓永超+尹桂麗

摘 要：微量元素在人們的身體中是十分重要的，雖然微量元素在人體中的含量較少，但是卻是人和動(dòng)物生存的必需元素，硒作為微量元素中十分重要的組成部分，可以提高人們的身體機(jī)能，在增強(qiáng)身體的免疫力上也至關(guān)重要。硒含量過高會(huì)引起機(jī)體中毒，但長期缺失卻又會(huì)引起缺硒的疾病。并且硒的毒性以及營養(yǎng)性僅在一個(gè)較小的含量變化范圍中變動(dòng)，所以提取檢測(cè)以及分析研究硒元素已為越來越多的人們所重視。本文就是對(duì)如何提取檢測(cè)微量元素硒進(jìn)行分析，為相關(guān)的研究提供借鑒。

關(guān)鍵詞：微量元素；標(biāo)準(zhǔn)硒溶液；分光光度法；熒光法；原子吸收光譜法；色譜法

1 分光光度法

分光光度法在進(jìn)行硒檢測(cè)的時(shí)候使用是非常廣泛的，在硒檢測(cè)的過程中，使用分光光度法可以使用較為低廉的設(shè)備，在這樣的情況下就可以降低成本，在降低成本的過程中可以將整個(gè)檢測(cè)的速度提高到一定的水平，這樣的檢測(cè)方式是非常重要的，需要得到我們的重視。這種方式在水樣和含硒藥品中進(jìn)行硒含量的檢測(cè)使用的頻率較多，因?yàn)檫M(jìn)行含硒藥品的檢測(cè)是十分復(fù)雜的，需要的成本較高，如果使用這種方式就可以將成本問題解決，但是這種檢測(cè)方式在選擇性較高的檢測(cè)中使用的較少。經(jīng)常使用的分光光度法有兩種，一種是二氨基聯(lián)苯胺法，另一種是苯肼催化法，這兩種方式在使用的過程中都會(huì)產(chǎn)生較大的誤差，這樣就會(huì)給檢測(cè)帶來極大的困擾，對(duì)檢測(cè)是非常不利的，在檢測(cè)的過程中會(huì)出現(xiàn)控制困難的問題。采用2，3二氨基萘顯色法檢測(cè)藥品中硒的含量重現(xiàn)性好，檢測(cè)誤差小。下面對(duì)本廠硒酵母3批次產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)，硒的檢測(cè)過程可控，誤差小，重現(xiàn)性好。

（1）檢測(cè)原理： 采用氧瓶燃燒法將供試品經(jīng)燃燒分解，使結(jié)合在骨架上或被吸附的微量硒成為硒的氧化物，利用鹽酸羥胺，將Se6+還原為Se4+，在pH2.0±0.1的條件下與二氨基萘作用，生成4，5-苯并苯硒二唑，用環(huán)已烷提取后，用紫外-可見分光光度計(jì)在378nm處測(cè)定其吸光度，并與硒對(duì)照溶液同法測(cè)得的吸光度進(jìn)行比較。

（2）操作方法

硒對(duì)照紙的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)硒溶液（100μg/ml）200μl，滴加到3x3cm定量色譜濾紙上，吹干，折好后備用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液、空白溶液的制備：取粉末適量，精密稱定（約相當(dāng)于含硒20μg，用3x3cm定量色譜濾紙包好，另取硒對(duì)照紙和3x3cm的空白定量色譜濾紙，按折疊后，固定于鉑絲下端的螺旋處，露出濾紙條。分別用1000ml氧氣燃燒瓶，以硝酸溶液（1→30）25ml為吸收液，急速通氧約1分鐘，立即用表面皿覆蓋瓶口。點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速將瓶塞插入燃燒瓶中，按緊瓶塞，并用少量水封閉瓶口，燃燒完畢（應(yīng)無灰色、黑色碎片或顆粒，若燃燒后留有灰色、黑色碎片或顆粒，表示供試品燃燒不完全，遇此情況應(yīng)重新取樣燃燒），立即充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中放置15分鐘，開啟瓶塞，用少量水沖洗瓶塞及鉑絲載樣器，合并洗液及吸收液，分別移至100ml燒杯中，用水30ml分次洗滌燃燒瓶及鉑絲、洗液分別并入各燒杯中，即得供試品溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白溶液。

將上述三種溶液分別用濃氨溶液調(diào)PH值至2.0±0.1，各加鹽酸羥胺溶液（1→2）1ml，搖勻，精密加2，3-二氨基萘試液5ml，搖勻，在水浴中加熱5分鐘，冷卻后，分別移至分液漏斗，加少量的水，分次洗滌燒杯，洗滌液并入分液漏斗中，加水使總體約為70ml，各加入環(huán)已烷10ml，強(qiáng)力振搖2分鐘，放置，分層后棄去水層，分出環(huán)已烷層，用1g無水硫酸鈉脫水，用紫外-可見分光光度法在378nm的波長處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。

檢測(cè)結(jié)果：

此方法可用于含量硒藥品的檢測(cè)。

2 熒光法

熒光法也是一種對(duì)微量元素硒進(jìn)行檢測(cè)的方法，利用這種方法在檢測(cè)的過程中，應(yīng)用的范圍也較為廣泛，尤其是在硒化合物的分析中，這種方法是非常重要的。隨著生物化學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，在進(jìn)行硒檢測(cè)的過程中，對(duì)水樣也有著一定的要求，水樣中硒的含量不能夠大于1μg，在這樣的情況下才能進(jìn)行檢測(cè)。

利用熒光法進(jìn)行硒的檢測(cè)，在發(fā)射的波長上有著要求，波長必須要大于390nm，還要小于600nm。這種方式存在一個(gè)不可避免的缺陷，無法排除干擾物的影響。因此結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際含量偏高。

3 原子吸收光譜法

原子吸收光譜法是利用自身的特性進(jìn)行測(cè)量，利用這種方法對(duì)硒含量進(jìn)行測(cè)量，這種方法是活躍度較高的一種方式，在靈敏度上也有著嚴(yán)格的要求，在準(zhǔn)確性上也需要人們的關(guān)注。這種方法被廣泛的應(yīng)用于生物、水樣和食品的檢測(cè)中，靈芝孢子粉的測(cè)定主要是利用原子吸收光譜法，這種方法在進(jìn)行靈芝孢子粉的使用上，需要使用石墨爐的吸收方法，在檢測(cè)的過程中，需要嚴(yán)格控制每一個(gè)環(huán)節(jié)，避免在檢測(cè)的過程中出現(xiàn)問題。

4 色譜法

色譜法在醫(yī)藥、食品、化工、石油、農(nóng)藥和環(huán)境檢測(cè)硒含量的測(cè)定中應(yīng)用較為廣泛，主要原因?yàn)樯V法效能高、選擇性好、靈敏度高、速度快，僅需少量樣品、簡(jiǎn)單的設(shè)備，便可以獲得準(zhǔn)確含量。近年來飼料、生物材料的硒檢測(cè)中色譜法得到了廣泛的應(yīng)用。但色譜法在進(jìn)行硒測(cè)定中需要進(jìn)行衍生，例如對(duì)環(huán)境樣品陰離子進(jìn)行離子色譜測(cè)定，通過高效液相色譜法對(duì)魚中含量硒進(jìn)行測(cè)定。研究者提出通過使用ICP-MS以及高效液相分離和FAAS做為硒化學(xué)形態(tài)測(cè)定中的元素專一檢測(cè)設(shè)備。在優(yōu)化的HPLC條件下，用ESAIII陰離子色譜柱（250*4.6mm），以檸檬酸銨為流動(dòng)相（5.5mol/L，pH5.5），流速為1.5mL/min，進(jìn)樣量為100μL，分離和測(cè)定三甲基硒離子、硒代蛋氨酸、亞硒酸和硒酸鹽只需8min。

5 其他分析法

隨著測(cè)定方式和研究方法的發(fā)展進(jìn)步，提取分析方式不斷的發(fā)生變化，在凈水劑、頭發(fā)以及水樣的微量硒檢測(cè)中，越來越多的分析方式不斷涌現(xiàn)，這些方法都具有一定的特色，在精度、準(zhǔn)度以及靈敏度和選擇性上都各有優(yōu)勢(shì)。例如，在頭發(fā)、指甲的硒含量測(cè)定中通過使用中子活化法進(jìn)行測(cè)定。通過該種方法測(cè)定出的結(jié)果被人們看做是標(biāo)準(zhǔn)精度值，但是由于設(shè)備投入較高因此該方式應(yīng)用范圍較為狹窄。

結(jié)束語

通過以上分光光度法、熒光法、原子吸收分光光度法、色譜法等對(duì)微量元素硒的提取檢測(cè)方法的分析，可以看出，紫外分光光度法中2.3-二氨基萘顯色法對(duì)藥品中微量硒的檢測(cè)操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，可用于一般富硒藥品的檢測(cè)。熒光法對(duì)海藻類產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，回收率可達(dá)97.7%。原子吸收光譜法以其靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，預(yù)處理簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于食品、生物以及水樣檢測(cè)。色譜法在飼料、生物材料等的硒檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用。但是目前對(duì)于微量硒的提取仍存在較大的困難，所以具體的提取、分析方法選擇還需要根據(jù)測(cè)定的樣品實(shí)際數(shù)量、性質(zhì)以及測(cè)定要求，進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇。同時(shí)，通過科學(xué)的方式進(jìn)行富硒動(dòng)植物的培育，開發(fā)出相應(yīng)的生物制品，用以滿足人們對(duì)健康的硒含量的要求。

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