張賀洋， 劉晉宇， 凌芳芳 ， 蘭 嵐 ， 姜利建 ， 賈立軍

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系 ， 吉林延吉133002)

吉林省牛新孢子蟲病流行病學(xué)調(diào)查

張賀洋， 劉晉宇， 凌芳芳 ， 蘭 嵐 ， 姜利建 ， 賈立軍

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系 ， 吉林延吉133002)

新孢子蟲病(Neosporiasis) 是由犬新孢子蟲(Neosporacaninum) 寄生于犬、牛、羊等多種動物細(xì)胞內(nèi)而引起的一種原蟲病。該病對牛的危害最為嚴(yán)重，能夠感染各種奶牛、肉牛和黃牛，主要引起孕畜流產(chǎn)或死胎以及新生兒運(yùn)動神經(jīng)障礙等，從而造成經(jīng)濟(jì)價值降低和淘汰率升高。新孢子蟲病呈世界性分布，美國、英國、澳大利亞、新西蘭、日本等30多個國家都有發(fā)生，嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展[1]。我國多個省份和地區(qū)已報道該病的發(fā)生和流行[2-4]。近年來，新孢子蟲病的流行區(qū)域逐漸擴(kuò)大，已給養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展造成了嚴(yán)重影響。為了解吉林省牛新孢子蟲病的感染情況，本次調(diào)查采用間接ELISA方法對吉林省5個地區(qū)386份牛血清樣品進(jìn)行牛新孢子蟲病的抗體檢測，以期為該病的防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清樣本 386份牛血清樣本無菌采自吉林省梅河、松原、長春、吉林和延邊5個地區(qū)養(yǎng)牛場。無菌分離血清，于-20 ℃保存?zhèn)溆?。牛新孢子蟲病陽性血清、陰性血清均由延邊大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實驗室制備、保存。

1.2 蟲株與試劑 牛源犬新孢子蟲延邊株由延邊大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實驗室分離保存；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗牛IgG為美國Sigma公司產(chǎn)品；其他試劑均為國產(chǎn)分析純級。

1.3 血清樣本檢測 以待檢血清樣本和陰陽性對照樣本為一抗，HRP標(biāo)記的羊抗牛IgG為二抗，按已建立的間接ELISA方法[5]對386份牛血清樣本進(jìn)行新孢子蟲病抗體檢測。

1.4 統(tǒng)計分析 應(yīng)用GraphPad Prism軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行不同養(yǎng)殖方式、不同品種及不同年齡段的統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)的牛血清樣本新孢子蟲病感染情況調(diào)查 應(yīng)用ELISA方法，對吉林省梅河、松原、長春、吉林和延邊等5個地區(qū)386份血清樣本進(jìn)行了牛新孢子蟲的抗體檢測。結(jié)果，梅河、松原、長春、吉林和延邊牛新孢子蟲陽性率分別為19.67%、23.07%、10.53%、16.67%和26.60%(見表1)。結(jié)果說明吉林省的梅河、松原、長春、吉林和延邊地區(qū)均為牛新孢子蟲病的流行地區(qū)，其中延邊地區(qū)流行最為嚴(yán)重。

表1 不同地區(qū)牛新孢子蟲的感染情況

2.2 不同養(yǎng)殖方式的牛血清樣本新孢子蟲病感染情況調(diào)查 本次調(diào)查采用ELISA方法對放牧和舍飼飼養(yǎng)的386份牛血清樣本進(jìn)行了新孢子蟲抗體檢測，其中放牧飼養(yǎng)方式的陽性率為22.45%，舍飼飼養(yǎng)方式的陽性率為17.39%，平均陽性率為21.27%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，放牧和舍飼之間牛新孢子病感染率差異顯著(P<0.05)(見表2)。

表2 不同養(yǎng)殖方式牛新孢子蟲病感染情況

2.3 不同品種的牛血清樣本新孢子蟲病感染情況調(diào)查 本次調(diào)查采用ELISA方法對黃牛和奶牛的386份血清樣本進(jìn)行了新孢子蟲抗體檢測，其中黃牛的陽性率為21.42%，奶牛的陽性率為20.00%，平均陽性率為21.24%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，奶牛和黃牛之間牛新孢子病感染率差異不顯著(P>0.05)(見表3)。

表3 不同品種牛新孢子蟲病感染情況

2.4 不同年齡的牛血清樣本新孢子蟲病感染情況調(diào)查 本次調(diào)查采用ELISA方法對不同年齡段的386份牛血清樣本進(jìn)行了新孢子蟲抗體檢測，其中0～3歲的陽性率為18.36%，4～6歲陽性率為25.00%，合計陽性率為21.24%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，幼齡和中齡之間牛新孢子病感染率差異顯著(P<0.05)(見表4)。

表4 不同年齡段牛新孢子蟲病感染情況

3 討論

近年來，新孢子蟲病在我國的流行區(qū)域逐漸擴(kuò)大，新疆、青海、河北、山東、北京、吉林、黑龍江等多個省、市、自治區(qū)都有牛新孢子蟲病的報道[6]。2006年丁德等對吉林省的梅河、舒蘭、琿春、雙陽地區(qū)黃牛進(jìn)行了新孢子蟲病調(diào)查，其感染率最高為16.67%[7]。本次調(diào)查對吉林省5個地區(qū)的386份牛血清樣本進(jìn)行了檢測，總體陽性率為21.24(82/386)，證實吉林省是牛新孢子蟲病的流行區(qū)域，其感染率顯著高于前期吉林省其他地區(qū)的調(diào)查數(shù)據(jù)，說明該病在吉林省的流行區(qū)域逐漸擴(kuò)大，并呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。

通過對386份牛血清樣本的檢測，其中延邊地區(qū)牛新孢子蟲病感染嚴(yán)重，長春地區(qū)感染率最低；不同養(yǎng)殖方式牛新孢子蟲病感染率差異顯著(P<0.05)，其中放牧牛新孢子蟲病感染率高，這與蟲體由卵囊傳播有直接關(guān)系；不同年齡段牛新孢子蟲病感染率差異顯著(P<0.05)，其中成年牛感染率高，而犢牛感染率低，這可能與犢牛多以垂直傳播為主，而成年牛多以水平傳播為主有關(guān)；不同品種間牛新孢子蟲病感染率差異不顯著(P>0.05)，說明牛新孢子蟲病感染與牛的品種無關(guān)，黃牛和奶牛均是易感動物。

由于人們對犬新孢子蟲的生活史闡明的不夠完全，感染途徑仍不夠清楚，因此對該病的防控缺乏有效措施。本次調(diào)查結(jié)果表明，吉林省是牛新孢子蟲病的流行區(qū)域，尤其延邊地區(qū)感染嚴(yán)重，此調(diào)查數(shù)據(jù)為吉林省新孢子蟲病的有效防控提供了科學(xué)的流行病學(xué)資料。

[1] Reichel M P,Alejandra Ayanegui-Alcérreca M,Gondim L F,etal.What is the global economic impact of Neospora caninum in cattle-The billion dollar question[J].Int J Parasitol,2013,43(2):133-142.[2] 劉群，李博，齊長明，等.奶牛新孢子蟲病血清學(xué)檢測初報[J].中國獸醫(yī)雜志，2003，39(2):8-9.

[3] 王春仁，李志蓮，翟延慶，等.奶牛新孢子蟲重組蛋白NcSRS2t間接ELISA方法的建立及初步應(yīng)用[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2009，31(2)：145-149.

[4] 閆雙，陳亮，巴音查汗.牛新孢子蟲病在新疆地區(qū)流行情況調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2012(10)：98-100.

[5] 賈立軍，張守發(fā)，魯承.犬新孢子蟲可溶性抗原分析及間接ELISA檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)雜志，2009，45(9)：25-26．[6] 鄒世穎，何倩妮，王小蕾，等.我國北方六省市牛新孢子蟲病血清學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)雜志，2012,48(2):54-55.

[7] 丁德，于龍政，賈立軍，等.吉林省部分地區(qū)黃牛新孢子蟲病的流行病學(xué)調(diào)查[J].畜牧與獸醫(yī)，2006，38(11)：34-36.

2016-03-11

國家自然科學(xué)基金(31160501;31360605)；吉林省重點(diǎn)科技攻關(guān)項目(20140204078NY)；吉林省教育廳重點(diǎn)項目[吉教科合字(2015)第1號]；吉林省自然科學(xué)基金項目(20160101201JC)

張賀洋(1986-)，女，碩士生，研究方向為動物疫病防制，E-mail：271555612@qq.com

賈立軍，E-mail：lijunjia1015@sohu.com

S852.72+3

B

0529-6005(2017)03-0052-02