姚翔媚+高小麗

【摘 要】 目的：探討乙二胺四乙酸鹽（EDTA）抗凝血導(dǎo)致的患者血小板計(jì)數(shù)假性減少的情況，分析產(chǎn)生的原因，并提出避免這種情況的對(duì)策。方法：對(duì)我院上年度出現(xiàn)的1例血小板計(jì)數(shù)值異常偏低的病歷進(jìn)行回顧性分析，并對(duì)該異常病歷再次進(jìn)行了血涂片處理，對(duì)血小板分布的情況再次進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)涂片和計(jì)數(shù)存在明顯不符的情況，從而再次進(jìn)行復(fù)檢。在操作的過(guò)程中，血細(xì)胞計(jì)數(shù)方法采用的是手工細(xì)胞計(jì)數(shù)，血小板計(jì)數(shù)分布的情況在血涂片末梢觀察。結(jié)果：復(fù)檢時(shí)觀察患者血小板計(jì)數(shù)都在正常的范圍之內(nèi)，與初次EDTA-K2抗凝血血細(xì)胞分析儀觀察到的血小板計(jì)數(shù)明顯不符。結(jié)論：使用EDTA抗凝劑有可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)血小板凝聚的情況，從而引起EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥（PTCP），對(duì)患者臨床檢查和治療都會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重不利的影響。因此，臨床檢驗(yàn)工作當(dāng)中，一定要提高對(duì)PTCP的重視程度，提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】 EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥 乙二酸四乙酸鹽 血小板

抗凝血治療是臨床上常用的一種治療方法，常用的抗凝劑為乙二胺四乙酸鹽，主要是因?yàn)檫@種抗凝劑對(duì)患者血細(xì)胞的影響相對(duì)較小，但是仍然會(huì)導(dǎo)致機(jī)體偶然出現(xiàn)血小板凝聚的現(xiàn)象，進(jìn)而導(dǎo)致出現(xiàn)EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥，對(duì)臨床治療產(chǎn)生不利的影響[1-4]。血小板在機(jī)體凝血當(dāng)中發(fā)揮著重要的作用，血小板降低會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生十分不利的影響，甚至有可能會(huì)導(dǎo)致患者喪失生命，因此臨床上醫(yī)生十分關(guān)注血小板減少的情況。如果患者出現(xiàn)EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥，容易導(dǎo)致過(guò)度治療以及不必要檢查，甚至還會(huì)出現(xiàn)漏診或誤診的情況。為了研究EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥，明確患者是否真正出現(xiàn)血小板減少，本文選取我院上年度出現(xiàn)類(lèi)似情況的1例患者進(jìn)行分析和研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

資料來(lái)源于我院上年度治療過(guò)程中出現(xiàn)的1例血小板計(jì)數(shù)異常偏低情況的患者，患者為女性，年齡55歲，來(lái)院治療的原因是發(fā)現(xiàn)顱內(nèi)占位擬行手術(shù)治療。

1.2 使用的儀器和試劑

1.2.1 儀器 我院采用的分析儀為全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀，日本生產(chǎn)（MEK-8222K

），分析儀經(jīng)過(guò)校正之后，各項(xiàng)指標(biāo)都處于正常的水平。

1.2.2 試劑 本次研究采用的試劑主要包括溶血?jiǎng)⑾♂屢?、清洗液、草酸銨血小板稀釋液、白細(xì)胞稀釋液、EDTA-K2真空抗凝管、枸櫞酸鈉真空管、瑞氏染液。溶血?jiǎng)?、稀釋以及清洗液都是與分析儀相配套的進(jìn)口試劑，草酸銨血小板稀釋液濃度為1%，醫(yī)院科室自配，白細(xì)胞稀釋液也是科室自配。

1.3 方法

1.3.1 儀器使用方法 分別使用EDTA-K2真空抗凝管和枸櫞酸鈉真空管抽取患者的靜脈血，并混合均勻，然后使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在全血模式之下進(jìn)行檢測(cè)，準(zhǔn)確記錄WBC值以及PLT值；稀釋血液模式下測(cè)定，具體操作如下：取患者無(wú)名指末梢的血液10μL，加入標(biāo)準(zhǔn)的稀釋液當(dāng)中，混合均勻，靜置5分鐘，然后將分析儀調(diào)整到稀釋血液模式，將標(biāo)本在稀釋模式下進(jìn)行測(cè)定，準(zhǔn)確記錄WBC值以及PLT值。

1.3.2 手工法 準(zhǔn)確抽取患者手指末梢血20μL，與0.38ml濃度為1%的草酸銨血小板稀釋液進(jìn)行混合，搖晃均勻，直到完全溶血之后再次搖晃均勻，并在計(jì)數(shù)池當(dāng)中滴入一滴血小板懸液，靜置10-15分鐘，然后使用高倍計(jì)數(shù)血小板數(shù)。對(duì)于白細(xì)胞數(shù)的手工計(jì)數(shù)采用同樣的方法進(jìn)行處理。

1.3.3 血涂片瑞氏染色觀察：分別選取手指末梢血以及EDTA-K2抗凝血制作血涂片，然后進(jìn)行瑞氏染色，通過(guò)油鏡觀察血小板的形態(tài)。

2 結(jié)果

該例患者入院之后，初次采用EDTA-K2抗凝血進(jìn)行血常規(guī)檢查，檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)血小板低于正常值，然而患者并沒(méi)有出現(xiàn)明顯的血小板減少相關(guān)癥狀，并且肝脾淋巴結(jié)正常。進(jìn)而對(duì)患者又使用不同的抗凝劑重新采集全血和稀釋血進(jìn)行復(fù)查，同時(shí)對(duì)患者的凝血功能、肝腎功能以及紅細(xì)胞沉降等情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)再次采用EDTA抗凝血?jiǎng)r(shí)患者血小板的檢測(cè)值仍然偏低，但是使用其它抗凝血的方法進(jìn)行復(fù)查的結(jié)果正常，其他的各項(xiàng)檢查結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)異常，并且對(duì)手指末梢血采用血涂片法進(jìn)行血小板數(shù)量和分布情況的檢測(cè)，結(jié)果顯示均未出現(xiàn)異常，但血涂片直接對(duì)EDTA抗凝血進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)血小板存在聚集成簇的情況，甚至成片，很少見(jiàn)血小板單純的存在，表明患者出現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)假性減少的原因?yàn)檠“寰奂谝黄?，與患者機(jī)體功能沒(méi)有直接的關(guān)系。

對(duì)此患者采用的三種方法進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果如下：EDTA抗凝血標(biāo)本采用血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)，血小板計(jì)數(shù)為45×109/L，WBC總數(shù)為25.1×109/L；通過(guò)顯微鏡對(duì)枸櫞酸鈉抗凝血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果血小板計(jì)數(shù)為220×109/L，WBC總數(shù)為19.3×109/L，然后采用血細(xì)胞分析儀對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，血小板計(jì)數(shù)為186×109/L，WBC總數(shù)為18.5×109/L。

3 討論

相對(duì)于其他的抗凝劑，EDTA對(duì)血液的影響較小，因此國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)將其作為使用血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血細(xì)胞檢測(cè)的常用抗凝劑。通常情況下，EDTA對(duì)血液當(dāng)中血細(xì)胞的形態(tài)以及血小板的數(shù)量是沒(méi)有影響的，但是由于患者個(gè)體差異性，偶爾會(huì)出現(xiàn)血小板聚集成塊或者成片的情況，進(jìn)而導(dǎo)致患者的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)明顯降低的情況，這種情況也被成為EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥[5-8]。由于血小板是機(jī)體參與凝血的重要組成部分，如果出現(xiàn)EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥，有可能會(huì)導(dǎo)致誤診的出現(xiàn)，進(jìn)而影響患者治療的情況。因此，EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥這種情況一定要引起臨床醫(yī)生的高度重視，正確判斷患者是否真的出現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)減少的情況[9-13]。

3.1 EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥出現(xiàn)的原因分析 （1）EDTA-K2的特性：EDTA-K2具有使血液產(chǎn)生免疫介導(dǎo)的作用，導(dǎo)致出現(xiàn)冷抗血小板抗體，進(jìn)而導(dǎo)致血小板發(fā)生抗體抗原反應(yīng)，產(chǎn)生凝聚現(xiàn)象。（2）個(gè)體差異性：EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥一般情況下不會(huì)出現(xiàn)，只有少數(shù)的患者會(huì)出現(xiàn)。有研究表明，這類(lèi)患者血小板的表面存在一種隱蔽性的抗原，在EDTA促使血小板活化的同時(shí)，會(huì)導(dǎo)致血小板表面的抗原與血漿當(dāng)中自身抗體相結(jié)合，進(jìn)而產(chǎn)生一種活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致血小板纖維蛋白原受體活性增強(qiáng)，致使血小板凝聚成一團(tuán)，進(jìn)而導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)出現(xiàn)假性減少的情況。（3）儀器自身的特點(diǎn)：全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀工作的原理是電阻法或化學(xué)發(fā)光原理，對(duì)于體積大小不同的細(xì)胞，通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)電阻會(huì)增加，進(jìn)而產(chǎn)生脈沖數(shù)目，然后通過(guò)脈沖數(shù)目來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞的數(shù)量。因此，儀器只是對(duì)細(xì)胞的大小進(jìn)行判斷，但是對(duì)于細(xì)胞的類(lèi)型還不能明確判斷，這樣以來(lái)，聚集在一起的血小板就會(huì)被當(dāng)中一個(gè)單細(xì)胞或者是其他的類(lèi)型的細(xì)胞計(jì)算，由此導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)明顯減少[14-15]。

3.2 糾正方法 通過(guò)本文的分析發(fā)現(xiàn)，采用另外方法對(duì)機(jī)體血小板計(jì)數(shù)進(jìn)行復(fù)檢是切實(shí)可行的，可以有效的糾正EDTA依賴(lài)性假性血小板減少的現(xiàn)象，并且操作相對(duì)比較簡(jiǎn)單，雖然有報(bào)道指出，個(gè)別患者采用枸櫞酸鈉抗凝劑之后仍然會(huì)出現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)減少的情況，但是總體上來(lái)說(shuō)，使用枸櫞酸鈉抗凝劑是糾正EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥的可用方法之一。此外，檢測(cè)操作時(shí)需要嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行，儀器和器材的使用都需要規(guī)范。在將懸液滴入計(jì)數(shù)池之后，要靜置10-15分鐘的時(shí)間，避免時(shí)間過(guò)短，導(dǎo)致血小板沒(méi)有完全沉下；同時(shí)所有的檢測(cè)需在1h之內(nèi)完成，避免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致血小板被破壞，從而影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。另外，在檢驗(yàn)結(jié)果表明患者的血小板數(shù)量減少時(shí)，一定要綜合分析患者的病情、凝血功能情況、病史等情況，及時(shí)與患者主治醫(yī)生溝通，全面了解患者的實(shí)際情況，以便及時(shí)跟蹤檢測(cè)，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為患者治療提供可靠的判斷標(biāo)準(zhǔn)，防止出現(xiàn)誤診、漏診等情況。

3.3 各種檢查方法分析 血小板計(jì)數(shù)檢查結(jié)果是否準(zhǔn)確直接關(guān)系到臨床診斷和治療，因此一定要保證檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性，對(duì)于檢查結(jié)果存在疑問(wèn)的標(biāo)本需要使用其他方式復(fù)查。手工法是臨床上評(píng)價(jià)血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性的參考方法，但是這種檢查方法得到的結(jié)果精密性比較差，雖然如此，但是這種方法仍是臨床上有效的確定血小板計(jì)數(shù)的復(fù)檢方法。使用枸櫞酸鈉抗凝劑進(jìn)行復(fù)檢時(shí)，如果檢查的結(jié)果與手工法檢查的結(jié)果差異明顯，則不能像臨床上發(fā)送檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)，需要進(jìn)一步確定檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。使用瑞氏染色方法對(duì)血涂片進(jìn)行觀察，如果發(fā)現(xiàn)存在血小板大量聚集但是數(shù)量并沒(méi)有減少的情況，則需要將其作為可疑病例進(jìn)一步復(fù)查。

EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥可見(jiàn)于健康人群和患病人群，患病人群多為癌癥、肝病、肺心病、全身免疫性疾病等患者，發(fā)生率非常低。盡管如此，一旦發(fā)生這種情況，臨床上會(huì)進(jìn)行大量的輔助檢查，從而導(dǎo)致醫(yī)療資源的浪費(fèi)，甚至還會(huì)發(fā)生誤診等情況，對(duì)患者造成嚴(yán)重不利的影響。因此，對(duì)于沒(méi)有明顯血小板減少臨床表現(xiàn)的人一定要使用不同的方法進(jìn)行復(fù)檢，以提高檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免對(duì)臨床醫(yī)生造成誤導(dǎo)，發(fā)生誤診。

綜上所述，使用EDTA抗凝劑有可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)血小板凝聚的情況，從而引起EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥（PTCP），主要的表現(xiàn)為血小板計(jì)數(shù)減少，白細(xì)胞增多，對(duì)患者臨床檢查和治療都會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重不利的影響，導(dǎo)致輔助檢查項(xiàng)目增多，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致出現(xiàn)誤診的情況。因此，臨床檢驗(yàn)工作當(dāng)中，一定要提高對(duì)PTCP的重視程度，提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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