［KH－3D］劉文波，秦春秀，薛文華，梁鵬，鄔國良，林春花，繆衛(wèi)國，鄭服叢

(海南省熱帶生物資源可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南?？?70228)

橡膠樹紅根病菌Fip-gpo基因的克隆及啟動子分析

［KH－*3D］劉文波，秦春秀，薛文華，梁鵬，鄔國良，林春花，繆衛(wèi)國*，鄭服叢*

(海南省熱帶生物資源可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南海口570228)

為預(yù)測橡膠樹紅根病菌(Ganoderma pseudoferreum)真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因的序列特點(diǎn)和表達(dá)模式，采用同源克隆獲得Fipgpo的cDNA和DNA的全長序列。結(jié)果表明:該基因編碼區(qū)全長934 bp，編碼111個氨基酸殘基，分子量為12．54 kD，等電點(diǎn)4．66，有4個ATM磷酸化位點(diǎn)，與赤靈芝(G．lucidum)的Fip序列相似性為91%;其啟動子區(qū)域含有59 bp的內(nèi)含子，除了含有TATA-box、CAAT-box基本元件外，還含有參與光應(yīng)答/調(diào)控元件、赤霉素響應(yīng)元件、茉莉酸甲酯應(yīng)答元件、厭氧誘導(dǎo)作用元件、調(diào)控在胚乳中特異表達(dá)的順式作用元件、分生組織特異激活順式元件及生長素反應(yīng)元件。推測Fip-gpo基因的表達(dá)受激素、非生物誘導(dǎo)、光照等的調(diào)控。

橡膠樹紅根病菌;真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白;Fip-gpo基因;啟動子分析

真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白(Fungal immunomodulatory proteins，F(xiàn)ips)是一類具有免疫調(diào)節(jié)活性的小分子蛋白，F(xiàn)ips能有效促進(jìn)淋巴細(xì)胞和脾臟細(xì)胞的增生，并誘導(dǎo)動物和人的巨噬細(xì)胞多分泌白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子及干擾素等［1］，維護(hù)生物體的健康，完成免疫調(diào)節(jié)功能。Kino等首次從赤靈芝(Ganoderma lucidum)中分離到這種蛋白，并命名為LZ-8(Lingzhi-8)［2］。天然的免疫調(diào)節(jié)蛋白一般分子量為13 kDa左右，富含天冬氨酸Asp(D)和纈氨酸Val(V)，但缺乏組氨酸His(H)，半胱氨酸Cys(C)和甲硫氨酸Met(M)，其N端氨基酸均為乙酞化阻斷氨基酸。Fips基因編碼區(qū)大約有330～350 bp左右［3］。并證明其具有促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂及免疫調(diào)節(jié)的作用［4］。在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，大型真菌(主要是食用)一直具有很高的藥用和營養(yǎng)價值，到目前為止，己從許多大型真菌或者擔(dān)子菌克隆到Fips基因，如赤靈芝(G．lucidum)［2］、松杉靈芝(G．tsugae)［5］、金針菇(Flammulina velutipes)［6］、紫靈芝(G．japoncium) (AAX98241)［7］、小孢靈芝(G．microsporum)［8］、紫芝(G．sinensis)［9］及草菇(Volvaiella volvacea)［10］等。這些真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能與人的免疫球蛋白家族具有很大的相似性，除了赤靈芝(G．lucidum)的Fip含有1．3%糖蛋白外，其他的Fips均不是糖蛋白［2，11－13］。不同物種間Fips的氨基酸相似性很高，可達(dá)50%～90%，F(xiàn)ips具有很高的藥用價值，此蛋白在靈芝中含量少且純化率極低，在商業(yè)制藥中很難進(jìn)行［3］。從靈芝及其他大型真菌中提取天然Fips，成本高且產(chǎn)量少，3 kg的草菇子實(shí)體中獲得了94 mg的Fip-vvo［10］。到目前為止，研究真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白的作用機(jī)制較少，啟動子在基因的表達(dá)調(diào)控中起重要的作用，而Fips表達(dá)調(diào)控研究也非常少［14］。研究Fips的啟動子，可以為以后研究其啟動子打下基礎(chǔ)。

目前尚未有從作為植物病原的擔(dān)子菌中克隆Fips基因的報道。橡膠樹紅根病菌［Ganoderma pseudoferreum(Wakef)overet Steinm］是對橡膠生產(chǎn)具有較大威脅的橡膠樹紅根病的病原，屬于擔(dān)子菌，是一類分布較廣的病原菌。本文探索從植物病原真菌中克隆Fips基因，為Fips提供一個新的資源，研究其序列特點(diǎn)及表達(dá)模式，為改造和提高產(chǎn)量，促進(jìn)生產(chǎn)者開發(fā)新型的免疫蛋白藥物提供理論基礎(chǔ)［14］。

1 材料與方法

1．1 材料及主要試劑

橡膠樹紅根病菌(G．pseudoferreum)GP-1菌株由海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院分子植病實(shí)驗(yàn)室分離鑒定保存。Fungal DNA Kit 50(OMEGA);瓊脂糖凝膠DNA/PCR產(chǎn)物小量回收試劑盒(OMIGA); pMDTM18-T Vector試劑盒(寶生物工程(大連)有限公司);Tryptone(OXOID);Yeast Extract(OXOID);NaCl(廣化);反轉(zhuǎn)錄試劑盒、TaqDNA聚合酶、dNTPs、DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量DL2000均為全式金生物有限公司產(chǎn)品。

1．2 橡膠樹紅根病菌GP-1菌株基因組DNA提取(OMEGA)

取100 mg新鮮樣品液氮研磨成粉末，提取方法按照OMEGA試劑盒(DNA)的方法提取，用蛋白核酸測定儀(Bio-rab)檢測DNA濃度，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證;－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1．3 橡膠樹紅根病菌GP-1菌株基因組RNA提取(OMEGA)

稱取50～100 mg經(jīng)液氮研磨成粉末狀的樣品至2 mL離心管，按照OMEGA試劑盒(RNA)的方法提取，用蛋白核酸測定儀(Bio-rab)檢測RNA濃度，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證，－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1．4 真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因的克隆

以提取的橡膠樹紅根病菌GP-1菌株基因組DNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)設(shè)計包括啟動子區(qū)域在內(nèi)的引物，華大基因公司合成如下引物:

Gpfip1-F:5'-TCCTAGTTGACACGATGACGGCG-3';Gpfip1-R:-5'-GACACACCACGAAGGTTGAATGC-3'。

PCR反應(yīng)體系為:模板1 μl，dNTPs 25 mmol/L 2．5 μl;引物(1 mmol/L)各1 μl;10×Buffer 2．5 μl;Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0．25 μl;ddH2O 17 μl。PCR反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性5 min，94℃，30 s; 56℃，40 s;72℃，40 s;循環(huán)35次，72延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后。驗(yàn)證產(chǎn)物并拍照，用膠回收試劑盒回收PCR產(chǎn)物，連接到pMDTM18-T Vector載體，并轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞DH5α。隨機(jī)挑選4個陽性克隆送深圳華大基因公司進(jìn)行測序。

以提取的橡膠樹紅根病菌GP-1菌株的總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA(TaKaRa Bio)為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)設(shè)計包括啟動子區(qū)域在內(nèi)的引物，華大基因公司合成如下引物:Gpfip1-F:5'-TCCTAGTTGACACGATGACGGCG-3';Gpfip1-R:5'-GACACACCACGAAGGTTGAATGC-3'。PCR反應(yīng)體系為:模板1μl，dNTPs 25 mmol/L 2．5 μl;引物(1 mmol/L)各1 μl;10×Buffer 2．5 μl;Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0．25 μl;ddH2O 17 μl。PCR反應(yīng)條件: 94℃預(yù)變性5 min，94℃，30 s;56℃，40 s;72℃，40 s;循環(huán)35次，72延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后。驗(yàn)證產(chǎn)物并拍照，膠回收試劑盒回收PCR產(chǎn)物，連接到pMDTM18-T Vector載體，并轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞DH5α。隨機(jī)挑選4個陽性克隆送深圳華大基因公司進(jìn)行測序。

1．5 橡膠樹紅根病菌菌GP-1菌株FIP基因的生物信息學(xué)分析

基因和蛋白質(zhì)同源性利用NCBI軟件分析，啟動子區(qū)域通過PlantCARE在線軟件預(yù)測，轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)通過http://www．fruitfly．org/seq_tools/promoter．html預(yù)測，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及疏水性分析利用ExPASy中的相關(guān)工具預(yù)測;磷酸化位點(diǎn)預(yù)測軟件(http://kinasephos2．mbc．nctu．edu．tw/index．html);蛋白質(zhì)的二級機(jī)構(gòu)通過https://npsa-prabi．ibcp．fr/cgi-bin/npsa_automat．pl?page=/NPSA/npsa_ server．html在線預(yù)測;三級結(jié)構(gòu)通過ExPASy中的相關(guān)工具預(yù)測;蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)作圖通過http://prodes．toulouse．inra．fr/multalin［15］and ESPript［16］進(jìn)行;分子系統(tǒng)進(jìn)化樹在軟件MEGA5．03上進(jìn)行，采用NJ (neighbor jioning)方法重復(fù)運(yùn)行1000次。

2 結(jié)果與分析

2．1 Fip-gpo基因的克隆

以橡膠樹紅根病菌菌絲為材料，提取橡膠樹紅根病菌基因組DNA和RNA，Gpfip1為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳圖譜顯示大小為1200 bp左右(圖1)和1100 bp左右條帶(圖2)，與目的片段大小相符合，將片段克隆后，經(jīng)菌落PCR檢測為陽性克隆(圖3)。通過NCBI的blastx在線比對，表明Fip-gpo基因長度為336 bp，編碼111個氨基酸殘基的ORF框(圖4);基因的上游啟動子區(qū)域經(jīng)NCBI上的nucleotide blast在線比對，和赤靈芝(G．lucidum)免疫調(diào)節(jié)蛋白LZ-8(M58032．1)基因的上游啟動子區(qū)域相似性為75%，具有59 bp的內(nèi)含子。確定該基因的全長為934 bp。

圖1 FIP-gpo基因PCR擴(kuò)增電泳圖Fig．1Electrophoresis of PCR product of Fip-gpo

圖2 FIP-gpo基因cDNA的PCR擴(kuò)增電泳圖Fig．2Electrophoresis of PCR product ofFip-gpo

圖3 FIP-gpo基因T-克隆的PCR擴(kuò)增電泳圖Fig．3Electrophoresis of colony PCR product of Fip-gpo

圖4 Fip-gpo核酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列Fig．4Nucleotide sequence and deduced amina acid sequence of Fip-gpo

2．2 Fip-gpo和其他Fips的相似性分析

經(jīng)Blast比對發(fā)現(xiàn)，該基因的氨基酸序列和LZ-8(AAA33350．1)、Fip-gts［5］和Fip-gja(AAX98241．1)的相似性分別為為91%、91%和83%，但和蟲擬蠟菌Geriporiopsis subvermispora B(EMD41188．1)親緣性較遠(yuǎn)，相似性為48%。將Fip-gpo和其他14種己知的Fips用MEGA 5．1軟件，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，從圖中可以看出(圖5)，F(xiàn)ip-gpo與赤靈芝(G．lucidum)LZ-8(AAA33350．1)和Fip-gts(G．tsugae)［5］聚在一簇，蟲擬蠟菌G．subvermispora B (EMD41188)單獨(dú)成一簇。

2．3 Fip-gpo的結(jié)構(gòu)分析

經(jīng)Eepasy相關(guān)軟件對Fip-gpo氨基酸進(jìn)行預(yù)測，得到該氨基酸的理論分子量為12．54 kD，等電點(diǎn)pI為4．66。天冬氨酸Asp(D)和纈氨酸Val(V)各11個。無半胱氨酸Cys(C)、組氨酸His(H)和甲硫氨酸Met(M)，分子式C573H859N143O172S1;不穩(wěn)定系數(shù)為0．99，該蛋白在溶液中穩(wěn)定;脂肪系數(shù)為79．82;親水系數(shù)為－0．192，具親水的特性(圖6)，無跨膜結(jié)構(gòu)域。這與Fips蛋白具有13 Kd，111～114氨基酸相吻合，符合Fips的特性［17］，可以歸為Fips家族。

2．3．1 Fip-gpo激酶磷酸化修飾位點(diǎn)預(yù)測經(jīng)過磷酸化位點(diǎn)預(yù)測軟件進(jìn)行Fip-gpo磷酸化位點(diǎn)預(yù)測，結(jié)果表明可能發(fā)生磷酸化的氨基酸為絲氨酸(S)，磷酸化位點(diǎn)分別位于32、64、69、72位，具有保守的結(jié)構(gòu)域(圖7)。SVM score為0．98，他的motif是ATM _67_L4R4。

圖5 Fip-gpo的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig．5Phylogenetic tree of Fip-gpo

圖6 Fip-gpo蛋白質(zhì)序列疏水區(qū)域分布預(yù)測Fig．6Hydrophobic area forecast map of Fip-gpo protein

圖7 Fip-gpo的磷酸化位點(diǎn)預(yù)測Fig．7Phosphorylation sites prediction of Fip-gpo

2．3．2 Fip-gpo結(jié)構(gòu)預(yù)測通過Sopma的方法預(yù)測了Fip-gpo的二級結(jié)構(gòu)，F(xiàn)ip-gpo的二級構(gòu)包括4．5 %的α螺旋、13．51%的β轉(zhuǎn)角、37．84%的延伸鏈及44．14%無規(guī)則卷曲。α螺旋主要在于N端，β轉(zhuǎn)角主要位于C端，無規(guī)則卷曲貫穿整個Fip-gpo序列，延伸鏈分散在序列中。蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)作圖通過http://prodes．toulouse．inra．fr/multalin［15］and ESPript［16］預(yù)測后，主要成分是β轉(zhuǎn)角(β1-β9)(圖8-A)。蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)通過swissmodel在線預(yù)測進(jìn)行Fip-gpo三級結(jié)構(gòu)預(yù)測，結(jié)構(gòu)預(yù)測表明空間結(jié)構(gòu)與LingZhi-8(3f3h)［18］結(jié)晶體結(jié)構(gòu)相似，相似性為0．99(圖8-B)。

2．4 橡膠樹紅根病菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因啟動子序列分析

通過PlantCARE［19］軟件在線分析Fip-gpo基因上游啟動子區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)及其功能，結(jié)果見表1。與啟動子活性相關(guān)的基本順式作用元件有2種:TATA box和CAAT box分別位于－197和－281、－417、－472等位置;除此之外，還發(fā)現(xiàn)2個與非生物誘導(dǎo)相關(guān)的順式作用元件:甲基茉莉酸應(yīng)答順式作用元件CGTCA-motif和厭氧誘導(dǎo)必要的順式作用元件ARE;1個分生組織特異激活順式元件A-box(CCGTCC-box);1個調(diào)控在胚乳中特異表達(dá)的順式作用元件Skn-1_motif;2個與激素有關(guān)的順式作用元件:生長素反應(yīng)元件TGA-element和赤霉素響應(yīng)元件P-box;1個光調(diào)控的順式作用元件G-box;1個光響應(yīng)元件Sp1。轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)通過fruitfly在線預(yù)測，轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)在-172處(圖9)。

圖8 Fip-gpo蛋白的結(jié)構(gòu)特征Fig．8Fip-gpo protein of architectural feature

表1 應(yīng)用PlantCARE預(yù)測FIP-gpo啟動子順式作用元件Table 1Cis-acting regulatory element analysis of FIP-gpo promoter sequence by plant CARE

3 討論與結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)已經(jīng)報道的真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因，從橡膠樹紅根病菌轉(zhuǎn)錄組中篩選到真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因序列，設(shè)計引物克隆Fip-gpo基因，在DNA和RNA水平上克隆了Fip-gpo基因，該基因編碼序列無內(nèi)含子，氨基酸的理論分子量為12．54kD，等電點(diǎn)pI=4．66。富含天冬氨酸Asp(D)和纈氨酸Val(V)各11個。無半胱氨酸Cys(C)、組氨酸His (H)和甲硫氨酸Met(M)，分子式C573H859N143O172S1;不穩(wěn)定系數(shù)為0．99，小于于閡值40，說明該蛋白在溶液中穩(wěn)定;脂肪系數(shù)為79．82;親水系數(shù)為－0．192，具親水的特性。這與Fip蛋白具有13Kd，111～114氨基酸相吻合［17］;磷酸化位點(diǎn)預(yù)測表明，具有4個磷酸化位點(diǎn)，SVM score為0．98，具保守的結(jié)構(gòu)域(ATM_67_L4R4)，ATM蛋白激酶參與了DNA損傷的修復(fù)、防止畸變甚至癌變的作用;Fip-gpo蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析表明，F(xiàn)ip-gpo的二級構(gòu)包括4．5%的α螺旋、13．51%的β轉(zhuǎn)角、37．84%的延伸鏈及44．14%無規(guī)則卷曲。α螺旋主要在于N端，β轉(zhuǎn)角主要位于C端，無規(guī)則卷曲貫穿整個Fip-gpo序列;Fip-gpo的三級結(jié)構(gòu)與LZ-8(3f3h)結(jié)晶體結(jié)構(gòu)相似，為0．99;具Fips的特性［17］，可以歸為Fips家族。進(jìn)化分析表明，該基因的氨基酸序列和LZ-8 (AAA33350)、Fip-gts［5］和Fip-gja(AAX98241)的相似性分別為為91%、91%和83%，但和蟲擬蠟菌G．subvermispora B(EMD41188)親緣性較遠(yuǎn)，相似性為48%，不同真菌屬種間，免疫調(diào)節(jié)蛋白相差較大。橡膠樹紅根病菌(G．pseudoferreum)經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室ITS鑒定，和赤靈芝(G．lucidum)和松杉靈芝(G．tsugae)的相似性分別為95%和96%。也驗(yàn)證了橡膠樹紅根病菌(G．pseudoferreum)的Fip和赤靈芝(G．lucidum)、松杉靈芝(G．tsugae)的Fip親緣關(guān)系較近。探索從植物病原真菌中克隆Fips基因，為Fips提供一個新的資源;促進(jìn)真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白的開發(fā)與利用。

圖9 橡膠樹紅根病菌真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因啟動子序列分析Fig．9Analysis of promoter sequence of Fip-gpo

啟動子是基因的重要組成部分，可以被RNA聚合酶識別并結(jié)合，控制著基因的轉(zhuǎn)錄，啟動子的組成類型，可以控制基因表達(dá)的起始時間和表達(dá)的程度［20］。是目的基因在轉(zhuǎn)錄水平上的重要調(diào)控元件，對生物的生長發(fā)育起著重要的作用。以橡膠樹紅根病菌的菌絲體提取DNA和RNA中分別克隆了Fips基因的上游503 bp的啟動子區(qū)域，該區(qū)域含有59 bp的內(nèi)含子，和赤靈芝(G．lucidum)［2］及紫芝(G．sinensis)［21］的61 bp相差了2 bp，經(jīng)過分析表明，與啟動子基本活性相關(guān)的順式作用元件有TATA-box、CAAT-box和G-box。TATA-box是RNA聚合酶II識別位點(diǎn);CAAT-box控制著轉(zhuǎn)錄起始的頻率［22］;G-box需要特異的結(jié)合SP1才能促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄［23］;與誘導(dǎo)相關(guān)的順式作用元件有甲基茉莉酸應(yīng)答順式作用元件CGTCA-motif、厭氧誘導(dǎo)必要的順式作用元件ARE;1個分生組織特異激活順式元件A-box (CCGTCC-box);1個調(diào)控在胚乳中特異表達(dá)的順式作用元件Skn-1_motif;2個與激素有關(guān)的順式作用元件:生長素反應(yīng)元件TGA-element和赤霉素響應(yīng)元件P-box，推測Fip-gpo基因的表達(dá)受激素、非生物誘導(dǎo)、光照等的調(diào)控。但是在赤靈芝(G．lucidum)的啟動子序列中含有一個脫落酸應(yīng)答順式作用元件［24］而該基因的啟動子區(qū)域無脫落酸應(yīng)答順式作用元件，表明Fip-gpo基因在表達(dá)調(diào)控功能上的分化，為進(jìn)一步研究Fip-gpo基因的表達(dá)和功能奠定基礎(chǔ)，對深入了解病原真菌的真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白基因，結(jié)構(gòu)和功能直接的關(guān)系有重要的意義。

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(責(zé)任編輯 陳虹)

Cloning and Promoter Sequence Analysis of Fip-gpo Gene from Ganoderma pseudoferreum

LIU Wen-bo，QIN Chun-xiu，XUE Wen-hua，LIANG Peng，WU Guo-liang，LIN Chun-hua，MIAO Wei-guo*，ZHENG Fu-cong*
(Hainan Key Laboratory for Sustainable Utilization of Tropical Bioresource/College of Environment and Plant Protection，Hainan University，Hainan Haikou 570228，China)

This experiment was conducted to investigate the sequence characteristics and expression pattern of fungal immunomodulatory protein gene in Ganoderma pseudoferreum．The cDNA，DNA and promoter sequences of a Fip-gpo gene by homologous cloning from G．Pseudoferreum were isolated and analyzed．The result showed that the fragment contained a full encoding region of 934 bp encoding 111 amino acid residues with a molecular mass of 12．54 kD，this deduced protein had a pI of 4．66，four ATM Phosphorylation sites prediction，and similarity with Fip sequence of G．lucidum in 91%;Its DNA promoter sequence had 59 bp intron，in addition to the TATA/CAATbox，its promoter contains some specific regulatory elements such as light responsive element and cis-acting regulatory element involved in light responsiveness，gibberellin-responsive element，cis-acting regulatory element involved in the MeJA-responsiveness，cis-acting regulatory element essential for the anaerobic induction，cis-acting regulatory element required for endosperm expression，cis-acting regulatory element related to meristem specific activation and auxin-responsive element．It was supposed that the expression of Fip-gpo gene was regulated by circadian，abiotic elicitor，light et al．

Ganoderma pseudoferreum;Fungal immunomodulatory proteins;Fip-gpo gene;Promoter sequence analysis

S435．76

A

1001－4829(2017)1－0122－07

10．16213/j．cnki．scjas．2017．1．022

2016－01－20

2015年海南省自然科學(xué)基金(20153131);農(nóng)業(yè)部2013年熱作農(nóng)技推廣與體系建設(shè)項(xiàng)目(13RZNJ-20);國家農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)(CARS-34-GW8);農(nóng)業(yè)部2012年熱作農(nóng)技推廣與體系建設(shè)項(xiàng)目(12RZNJ-19)

劉文波(1978－)，男，云南曲靖人，碩士，主要從事熱帶植物病理研究，E-mail:saucher@163．com，*為通訊作者:繆衛(wèi)國(1969－)，男，江蘇南通人，博士，教授，從事分子植物病理等研究，E-mail:weiguomiao1105@126．com;鄭服叢(1956－)，男，教授，從事植物病理學(xué)研究，E-mail:zhengfucong@126．com。