王強(qiáng)

吉林省長(zhǎng)春市傳染病醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春 132000

肺結(jié)核（pulmonarytuberculosisPTB）是由結(jié)核分枝桿菌引發(fā)的肺部感染性疾病，是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病[1]。結(jié)核分枝桿菌的傳染源主要是排菌的肺結(jié)核患者，通過(guò)呼吸道傳播。腸結(jié)核在消化系統(tǒng)中最為常見(jiàn)，多繼發(fā)于活動(dòng)性肺結(jié)核。1990年以來(lái)，肺結(jié)核患病率日益增長(zhǎng)。通過(guò)全球權(quán)威醫(yī)學(xué)組織統(tǒng)計(jì)，每年全球大約290萬(wàn)人因肺結(jié)核死亡[2]。值得注意的是，非洲和我國(guó)是肺結(jié)核高發(fā)國(guó)家。然而當(dāng)前多重耐藥情況嚴(yán)重，結(jié)核病的防治已經(jīng)成為了當(dāng)前臨床研究的重點(diǎn)。痰液及糞便培養(yǎng)成為了肺結(jié)核臨床診斷與鑒定的主要檢查方法，其培養(yǎng)結(jié)構(gòu)成為了確診的主要根據(jù)。為了研究分析當(dāng)前肺結(jié)核分歧桿菌耐藥情況，探究分析耐藥性發(fā)展情況，為肺結(jié)核臨床防治提供真實(shí)根據(jù)。2016年2月，該院收治的1例肺結(jié)核患者，做痰液培養(yǎng)、糞便培養(yǎng)同時(shí)培養(yǎng)出分枝桿菌，因在臨床中較少見(jiàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

患者男28歲，發(fā)現(xiàn)有乏力、消瘦、盜汗、低熱、咳嗽、胸痛等癥狀半年，入院后經(jīng)X線(xiàn)胸片，痰培養(yǎng)、便培養(yǎng)及血PPD-IgG確認(rèn)為肺結(jié)核，同時(shí)伴有咳黃痰，肺部可聞及濕性啰音。

2 試驗(yàn)程序

2.1 試驗(yàn)材料

樣品作厚膜涂片染色鏡檢和培養(yǎng)檢驗(yàn)。操作方法按中國(guó)防癆協(xié)會(huì)編審的 《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》[3]要求進(jìn)行，染色液依照《規(guī)程》自行配制，酸性羅氏培養(yǎng)基由省衛(wèi)生防疫站結(jié)核病防治所提供。改良羅氏酸性Ⅱ型培養(yǎng)基，對(duì)硝基苯甲酸（PNB)培養(yǎng)基，噻吩-2-羥酸肼 （THC）培養(yǎng)基及藥敏培養(yǎng)基異煙肼（INH）、鏈霉素（SM）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）、氧氟沙星（OFX）培養(yǎng)基，均購(gòu)于貝索生物技術(shù)有限公司。結(jié)核分枝桿菌H3tRv藥敏感株由國(guó)家參比試驗(yàn)室提供。

2.2 藥物濃度

培養(yǎng)基含藥物濃度按防癆協(xié)會(huì)結(jié)核病診斷規(guī)程比例法[4]。 鏈霉素（SM）4 μg/mL、異煙肼（INH）0.2 μg/mL、利福平（RFP）40 μg/mL、乙胺丁醇（EMB）2 μg/mL、氧氟沙星（OFX）2 μg/mL。

2.3 操作方法

①取適量的痰液和糞便加入1～2倍的HaOH4%，震蕩使標(biāo)本充分液化，在20 min內(nèi)操作完成。②取上述處理標(biāo)本0.1～0.3 mL以無(wú)菌操作接種于酸性羅氏培養(yǎng)基中，同時(shí)接種2支管，37℃培養(yǎng)，接種后3～7 d觀察結(jié)果，以后每周觀察菌落生長(zhǎng)情況1次。③有菌落生長(zhǎng)者，經(jīng)抗酸染色確認(rèn)。

3 結(jié)果

從已確認(rèn)的酸性培養(yǎng)基中刮取菌苔研磨制成10-2～10-4mg/mL菌懸液（比例法），用22SWG標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)，分別沾取1滿(mǎn)杯（即0.01 mL）10-2mg/mL和10-4mg/mL的菌液，用劃線(xiàn)法均勻接種至對(duì)照及含藥物培養(yǎng)基表面，菌型鑒定分別用10-2的菌液接種PNB和THC培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4周后報(bào)告結(jié)果。

4 討論

臨床上，肺結(jié)核是一種常見(jiàn)的傳染性疾病，切斷傳染源對(duì)于防治肺結(jié)核大范圍傳染尤為必要。臨床早期診斷不僅有助于肺結(jié)核患者的病情康復(fù)，而且還能夠有效控制肺結(jié)核疾病的擴(kuò)散。痰液和糞便培養(yǎng)成為了臨床診斷的主要方法，也是該疾病確診的重要標(biāo)準(zhǔn)。肺結(jié)核分歧桿菌生長(zhǎng)速度緩慢，痰液和糞便培養(yǎng)時(shí)間一般較長(zhǎng)，同時(shí)臨床培養(yǎng)環(huán)境、操作程序都會(huì)影響整個(gè)培養(yǎng)結(jié)果。采集樣品是痰液和糞便培養(yǎng)的第一環(huán)節(jié)，也是最關(guān)鍵的緩解。相關(guān)研究指出，痰液和糞便培養(yǎng)的采集量不得≤10 mL。肺結(jié)核分歧桿菌繁殖較慢，應(yīng)嚴(yán)格按照《規(guī)程》要求連續(xù)培養(yǎng)8周以上。樣品質(zhì)量在很大程度上影響了陽(yáng)性檢出率?；诖耍R床操作人員應(yīng)將相關(guān)事宜詳細(xì)交代給痰液和糞便待檢病人，選取合格的樣品。

臨床上，結(jié)核病痰液及糞便同時(shí)培養(yǎng)出分枝桿菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也會(huì)出現(xiàn)漏檢的情況，追究其原因主要有主客觀方面，客觀方面患者曾服用抗生素及樣品質(zhì)量直接影響了分歧桿菌的生長(zhǎng)，主觀方面則還有檢查時(shí)間和臨床操作技術(shù)等。楊細(xì)蘭等[5]研究指出，在過(guò)程中，隨機(jī)抽取25張陰性片對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)大視野再檢，發(fā)現(xiàn)2片屬于陽(yáng)性?；诖?，臨床上應(yīng)對(duì)每一份樣品進(jìn)行培養(yǎng)和涂片，從而提高肺結(jié)核分歧桿菌的檢出率。如果因條件不允許只能夠進(jìn)行涂片檢查時(shí)，應(yīng)連續(xù)多次檢查和擴(kuò)大鏡檢視野來(lái)對(duì)其結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

即使肺結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)生長(zhǎng)比較慢，然而培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法日益成熟，并大大提高了陽(yáng)性檢出率，培養(yǎng)基的質(zhì)量直接影響了培養(yǎng)結(jié)果的分析數(shù)據(jù)。相關(guān)研究指出臨床上應(yīng)采用不同種類(lèi)的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)肺結(jié)核分歧桿菌，研究結(jié)果表明培養(yǎng)基所需時(shí)間同陽(yáng)性檢出率之間的差異較大，其中液體變色培養(yǎng)基最為靈敏、便捷。同時(shí)，離心時(shí)間、離心力也是影響肺結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)質(zhì)量的重要影響因素。

經(jīng)4周培養(yǎng)后，根據(jù)不同部位（痰和便）分離出的2株結(jié)核分枝桿菌均對(duì)鏈霉素（SM）4μg/mL、異煙肼（INH）0.2 μg/mL、利福平（RFP）產(chǎn)生耐藥，對(duì)乙胺丁醇（EmB）2 μg/mL、氧氟沙星（OFX）敏感，其藥物結(jié)果相同，說(shuō)明為同一菌株所感染，此病例藥物敏感試驗(yàn)表明，在不同部位（痰和便）所留取的標(biāo)本，藥敏試驗(yàn)結(jié)果相同，因此，對(duì)于該患者診斷為肺結(jié)核及腸結(jié)核尤為重要，在治療上可以同時(shí)用結(jié)核藥聯(lián)合治療，對(duì)早期有效地選用抗結(jié)核藥物提供幫助。

該文研究結(jié)果中，受檢患者均存在不同程度的耐藥性，如果依然采用初始和復(fù)治方案統(tǒng)一治療，則會(huì)造成一些患者治療結(jié)果不理想，產(chǎn)生新的耐藥性，甚至造成廣泛耐藥肺結(jié)核。另外，現(xiàn)階段臨床上還未研究出治療廣泛耐藥肺結(jié)核患者的治療方案，臨床效果差，傳染性大，嚴(yán)重威脅了肺結(jié)核疾病控制。

綜上所述，條件優(yōu)越的地區(qū)應(yīng)組織開(kāi)展分歧桿菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，同時(shí)按照藥敏結(jié)果制定針對(duì)性有效的方案，并且高度重視肺結(jié)核歸檔管理，對(duì)地區(qū)肺結(jié)核患者進(jìn)行去全面監(jiān)控，降低耐藥發(fā)生率，提高臨床治愈率，有效控制肺結(jié)核，具有重大的臨床價(jià)值。

[1]孫開(kāi)麗.痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果及影響因素分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2017(36)：140.

[2]張德和，余旭良，祝進(jìn)，等.復(fù)治涂陽(yáng)肺結(jié)核患者分枝桿菌屬培養(yǎng)及藥敏結(jié)果分析 [J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（20）：4666-4667.

[3]王泉，李君蓮，許苗，等.新疆地區(qū)結(jié)核病患者T-SPOT.TB檢測(cè)與結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果對(duì)比分析[C].中國(guó)防癆雜志創(chuàng)刊80周年紀(jì)念暨學(xué)術(shù)會(huì)議，2014.

[4]張德和，余旭良，郝曉剛，等.痰涂片陽(yáng)性肺結(jié)核患者分枝桿菌培養(yǎng)及藥敏結(jié)果743例分析 [J].浙江醫(yī)學(xué)，2013（5）：376-378.

[5]楊細(xì)蘭，劉運(yùn)堂，楊春燕，等.結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)及結(jié)果分析[J].今日健康，2015（11)：413.