朱國良，石麒麟

乳腺癌HER-2免疫組化檸檬酸高溫高壓抗原修復手工操作的最佳條件

朱國良，石麒麟

抗原修復；有效修復時間；手工操作；檸檬酸；免疫組織化學

免疫組化技術(shù)是臨床病理診斷中重要的輔助技術(shù)之一，對于判斷腫瘤的來源、分類、預后和鑒別診斷以及指導和評估臨床治療起著重要作用，而正確的抗原修復是免疫組化結(jié)果準確性的關鍵步驟。對常規(guī)10%中性福爾馬林固定的石蠟切片進行抗原熱修復是廣泛接受的抗原修復方式。全自動多功能組織病理檢測系統(tǒng)具有染色著色均勻、定位準確、可重復性強等優(yōu)點[1]，但設備昂貴，試劑成本高，使用范圍受到限制，基層醫(yī)院病理科目前仍普遍使用手工操作方法。目前手工操作中各科的修復方法不盡相同[2]，即使相同的方法修復細節(jié)也有很大的差別?，F(xiàn)以本科室HER-2檢測為例，對大家普遍使用的檸檬酸高溫高壓抗原修復方法[3]的細節(jié)進行對比，觀察不同修復條件下的結(jié)果差別，探討檸檬酸高溫高壓抗原修復的最佳條件，確立大家能廣泛接受的相對統(tǒng)一的手工抗原熱修復方法。

1 材料與方法

1.1 標本 選取2014年1月～2015年6月湖州市第一人民醫(yī)院病理科存檔的經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的78例乳腺癌組織，均行HER-2免疫組化檢測，每例標本均連續(xù)3 μm厚切片，各切9張，分為9組，其中第9組加入已知染色結(jié)果為3+、2+、1+、0乳腺癌組織切片作為對照，65 ℃烤箱烤片2 h。

1.2 試劑 一抗HER-2(SP3即用型)、二抗免疫組化試劑盒(MaxVision2)、檸檬酸鹽抗原修復液(粉劑，規(guī)格：2 000 mL每包，稀釋后相當于pH 6.0工作液)、DAB顯色劑、PBS(0.1 mol/L，pH 7.2～7.4)，均購自福州邁新公司；一抗HER-2(4B5即用型)和XT ultraView檢測試劑盒購自羅氏公司。

1.3 儀器 市售家用壓力鍋(蘇泊爾牌，不銹鋼，內(nèi)徑18 cm)工作壓力均為90 kPa；不銹鋼切片架；美的家用電磁爐；全自動多功能組織病理檢測系統(tǒng)(美國Ventana公司)。

1.4 方法 將組織切片脫蠟至水后，放入0.3%H2O2處理15 min，再入蒸餾水備用。具體修復方法見表1。修復完成后，后續(xù)步驟按照MaxVision2試劑盒操作說明書執(zhí)行。對照第9組進行Ventana機器染色，按設備使用說明操作。免疫組化結(jié)果判斷參照《乳腺癌HER-2檢測指南(2014版)》[4]。

2 結(jié)果

第9組對照組織檢測結(jié)果與原判讀結(jié)果一致。第1組陽性率降低，且有12例不同程度掉片；第2組與第9組相比，判讀結(jié)果最為接近，其中1例3+判讀為2+，1例2+判讀為1+，其余病例全部吻合，且組織無掉片，定位準確，背景清晰；第3組陽性強度略下降，部分組織出現(xiàn)非特異性著色；第4～6組陽性強度明顯下降，出現(xiàn)大量假陰性；第7組出現(xiàn)假陽性，且有8例出現(xiàn)背景著色；第8組陽性率及陽性強度明顯提高，出現(xiàn)假陽性，且普遍出現(xiàn)背景著色及個別組織掉片(表2)。

3 討論

由于在組織固定過程中，甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，導致抗體對抗原的特異性反應降低，從而導致假陰性，因此抗原修復對于免疫組化是不可或缺的，可直接影響染色結(jié)果。各實驗室采用哪種抗原修復方法視具體情況而定，但不論采用哪種方法均應以準確的實驗結(jié)果為最佳選擇。熱抗原修復雖然可提高敏感性，但操作不當亦可產(chǎn)生假陽性。高壓鍋法因成本低、操作簡單易行、染色效果理想的優(yōu)點而被大多數(shù)實驗室使用，但也具有耗時和極易受溫度影響的缺點。而抗原修復的關鍵因素主要是抗原修復液的選擇和抗原修復的溫度與時間，即不管何種修復方式跟有效修復時間[5]的長短關系密切。本實驗結(jié)果表明檸檬酸高溫高壓抗原修復的方法因有效修復時間的不同，而產(chǎn)生完全不同的結(jié)果：第1組實驗功率過高的電磁爐抗原修復易掉片及產(chǎn)生細胞核假陽性的風險，與文獻報道一致[6]；第2組實驗結(jié)果與第9組Ventana機器的結(jié)果最為吻合，第9組18例3+的病例第2組檢測結(jié)果為17例3+、1例2+，第9組15例2+的病例第2組檢測結(jié)果為14例2+，1例1+，其余病例檢測結(jié)果一致，且第2組所有檢測結(jié)果定位準確，結(jié)構(gòu)清晰，不掉片；第3組實驗因電磁爐功率過低則間接延長了修復時間，從而導致容易出現(xiàn)非特異性的背景著色；第4～6組實驗由于有效修復時間不足，從而導致結(jié)果完全不同，相差甚遠；第7、8組實驗由于明顯延長有效修復時間，從而導致陽性率升高，且出現(xiàn)假陽性，與文獻報道一致[7]。本實驗進一步證實了溫度及有效修復時間的重要性。

表1 抗原修復不同手工操作方法比較

表2 Ventana機器染色和8組不同修復時間的手工染色結(jié)果比較

本組實驗結(jié)果表明，第2組結(jié)果與Ventana機器的結(jié)果最為吻合，且定位準確，結(jié)構(gòu)清晰，不掉片，是理想的HER-2檸檬酸高溫高壓抗原修復手工操作方法，適合基層醫(yī)院使用。

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時間：2017-2-27 10:14

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浙江省湖州市第一人民醫(yī)院病理科，湖州 313000

朱國良，男，主管技師。E-mail: blzgl@126.com

R 446

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1001-7399(2017)02-0219-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.027

接受日期：2016-10-28