曲亞蘭 謝寶芳 李丹陽

流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢在宮頸癌和癌前病變篩查中的意義

曲亞蘭 謝寶芳 李丹陽

目的探討流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢在宮頸癌和癌前病變篩查中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2014年6月—2016年6月在我院就診進(jìn)行宮頸癌檢查并有活檢結(jié)果的705例病例進(jìn)行研究，并用流式細(xì)胞術(shù)對此705例患者進(jìn)行DNA含量分析，以DNA指數(shù)(DNA index，DI)、增殖指數(shù)(Proliferative index，PI)值作為DNA含量分析的參數(shù)。結(jié)果 陰道鏡擬診結(jié)果顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌的檢出率分別為62.2%、78.0%、100%、100%；流式細(xì)胞儀檢測DNA倍性在CINⅡ及其以上級別病變(CINⅡ、CINⅢ或CIS和宮頸癌病變)的敏感性為87.7%(213/243)，特異性為90.2%(417/462)。隨著宮頸組織病變程度的加重，DI、PI值均呈上升趨勢，且各組之間進(jìn)行比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢可提高宮頸癌和癌前病變診斷率、準(zhǔn)確性和敏感性，是適合篩查宮頸癌和癌前病變的工具之一，值得臨床推廣和應(yīng)用。

流式細(xì)胞術(shù)；陰道鏡；宮頸癌；篩查

宮頸癌是女性最常見的一種惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率逐年上升并呈年輕化趨勢，早診斷、早治療宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasi，CIN)是積極防止其進(jìn)一步發(fā)展為宮頸癌的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1-2]。為探討流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢在宮頸癌和癌前病變篩查中的應(yīng)用價(jià)值，本研究選取2014年6月—2016年6月在我院就診進(jìn)行宮頸癌檢查并有活檢結(jié)果的705例病例結(jié)果進(jìn)行了研究，并利用流式細(xì)胞術(shù)對此705例患者進(jìn)行DNA含量分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年6月—2016年6月在我院門診進(jìn)行宮頸癌檢查并有活檢結(jié)果的705例病例結(jié)果進(jìn)行了研究，患者年齡分布在23～64歲，平均年齡(43.5±3.6)歲。

1.2 方法

1.2.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測 采用陰道窺器暴露宮頸后，用宮頸刷按一定方向旋轉(zhuǎn)3～5圈刷取宮頸脫落細(xì)胞后，將宮頸刷刷頭浸泡于細(xì)胞保存液內(nèi)，用磷酸鹽緩沖液(Phosphate buffered saline，PBS)漂洗細(xì)胞2次(800 r/min，離心5 min)后，用70%乙醇于4℃固定過夜后，用400目尼龍網(wǎng)過濾以除去粘連細(xì)胞，離心去掉固定液并用PBS洗去乙醇，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106/mL以制成單細(xì)胞懸液，在上述懸液中加入Triton(0.002%)、RNA酶(終濃度為100 μg/mL)、碘化吡啶(Propidium iodide，PI，終濃度為50 μg/mL)于室溫避光孵育染色30 min后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測[3-4]，以正常宮頸脫落細(xì)胞DNA含量作為二倍體細(xì)胞DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 細(xì)胞DNA含量分析 本研究采用DNA指數(shù)(DNA index，DI)、增殖指數(shù)(Proliferative index，PI)作為DNA含量分析的參數(shù)。DI=(待測宮頸細(xì)胞G0/G1細(xì)胞峰頂熒光道數(shù))/(標(biāo)準(zhǔn)二倍體細(xì)胞G0/G1細(xì)峰頂熒光道數(shù))，DI=0.9～1.1時(shí)為二倍體，超出此范圍即視為異倍體。PI=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100%[5]。(1)陰性：以正常二倍體細(xì)胞為主，未發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞，且增生細(xì)胞占檢測細(xì)胞總數(shù)的5%以下；(2)疑似：增生細(xì)胞占檢測細(xì)胞總數(shù)的5%～10%，未發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞；(3)陽性：增生細(xì)胞占檢測細(xì)胞總數(shù)的5%～10%或發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞。

1.2.3 陰道鏡活檢 凡是對流式細(xì)胞儀檢測DNA倍性結(jié)果為疑似和陽性或臨床可疑的婦女均進(jìn)行陰道鏡檢查，以組織病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)。于患者月經(jīng)干凈后的3 d～7 d，將陰道鏡置于其陰道，分別采用鹽水、冰醋酸和碘液對宮頸進(jìn)行擦拭、濕敷和涂抹，于轉(zhuǎn)化區(qū)最嚴(yán)重區(qū)域鉗取宮頸組織。若鏡下未見可疑部位，則采取傳統(tǒng)四點(diǎn)法進(jìn)行活檢，10%甲醛固定后，送至病理檢查[6-7]。

1.2.5 病理學(xué)診斷分析 病理學(xué)診斷分為：正常、宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ或CIS)和宮頸癌[8]。

1.2.6 陰道鏡擬診標(biāo)準(zhǔn) 按照國際宮頸病理與陰道鏡聯(lián)盟(International federation of cervical pathology and colposcopy，IFCPC)的描述，陰道鏡擬診標(biāo)準(zhǔn)為CINⅠ級(鏡下可見醋酸白色上皮與點(diǎn)狀血管二聯(lián)征)、CINⅡ級(出現(xiàn)醋酸白色上皮與鑲嵌二聯(lián)征)、CINⅢ級或CIS(出現(xiàn)醋酸白色上皮、點(diǎn)狀血管與鑲嵌三聯(lián)征)、宮頸癌(上述三聯(lián)征同時(shí)出現(xiàn)或單獨(dú)出現(xiàn)，并伴有玻璃狀、膠凍狀、腦狀等上皮改變)[9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)錄入SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包，計(jì)量資料比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陰道鏡擬診與陰道鏡宮頸活檢結(jié)果

以陰道鏡活檢的診斷結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，705例活檢結(jié)果顯示宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌患者分別為245例、217例、123例、85例、35例，陰道鏡擬診結(jié)果顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌的檢出率分別為62.2%、78.0%、100%、100%(表1)。

表1 陰道鏡擬診與陰道鏡宮頸活檢結(jié)果Table 1 Colposcopy diagnosis and colposcopy cervical biopsy results

2.2 流式細(xì)胞儀進(jìn)行DNA倍性分析的敏感性與特異性

以陰道鏡活檢的診斷結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，在705例活檢病例中，有243例CINⅡ及以上級別的宮頸病變(CINⅡ、CINⅢ/CIS和宮頸癌)。若將DNA倍性檢測結(jié)果中為陽性和疑似結(jié)果的病例，定為篩查后需要做陰道鏡活檢的標(biāo)準(zhǔn)，則CINⅡ及其以上級別病變(CINⅡ、CINⅢ/CIS和宮頸癌)的敏感性為87.7%(213/243)，特異性為90.2%(417/462)(表2)。

表2 流式細(xì)胞儀檢測DNA倍性結(jié)果Table 2 The DNA ploidy results detected by flow cytometry

2.3 不同宮頸組織之間DNA含量分析比較

DI、PI值均隨著宮頸組織病變程度的加重呈上升趨勢，且各組之間進(jìn)行比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表3 不同宮頸組織之間DNA含量分析比較Table 3 DNA content analysis and comparisons between different cervical tissues

Note：Compared between cervicitis group and CINⅠgroup，aP<0.05；Compared between CINⅠgroup and CINⅡgroup，bP<0.05；Compared between CINⅡgroup and CINⅢgroup，P<0.05；Compared between CINⅡgroup and CINⅢgroup，cP<0.05；Compared between CINⅢ group and UCC group，dP<0.05.

3 討論

宮頸癌前病變并不是必定會發(fā)展為宮頸癌，它有向前進(jìn)一步發(fā)展或向后恢復(fù)正常的雙重性，因此非常有必要從癌前病變中找出具有進(jìn)一步發(fā)展為宮頸癌潛能的這種病變。腫瘤的本質(zhì)是細(xì)胞增殖失控和增殖細(xì)胞轉(zhuǎn)移[10]。細(xì)胞在癌前病變過程中常處于活躍的增生狀態(tài)，DNA合成增加，含量發(fā)生變化，選用流式細(xì)胞儀可以精準(zhǔn)檢測到DNA含量的細(xì)微變化，因此，選用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析可以當(dāng)作一種有效診斷癌前病變發(fā)展趨向的手段。本研究采用DI、PI作為DNA含量分析的參數(shù)，結(jié)果顯示，DI、PI值均隨著宮頸組織病變程度的加重而呈上升趨勢，且各組之間進(jìn)行比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有學(xué)者指出在幾乎所有宮頸癌病變中均會出現(xiàn)DNA倍體異?；?xì)胞，且DNA變化早于細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變[11-13]，我們的研究結(jié)果與此相符，結(jié)果顯示在CINⅠ及以上均出現(xiàn)DNA倍體異?；?xì)胞，且隨著宮頸組織病變程度的加重，異常化細(xì)胞越多。因此可對CIN細(xì)胞進(jìn)行DNA含量的倍性分析以判斷癌前病變的發(fā)展趨向，在CIN中DNA倍體分析已經(jīng)被證實(shí)可作為評估具有向更高級別病變轉(zhuǎn)化的相對風(fēng)險(xiǎn)性的預(yù)測因子[14]。在臨床工作中可根據(jù)流式細(xì)胞儀檢測的DNA含量分析結(jié)果對CIN給予不同的處理方案，對CINⅠ異倍體和CINⅡ、CINⅢ/CIS應(yīng)當(dāng)采取積極干預(yù)方案，盡最大努力阻止其向惡性方向轉(zhuǎn)變，而CINⅠ二倍體的增殖活性較低，可視作良性病變，密切跟蹤其轉(zhuǎn)歸即可。本研究結(jié)果顯示在705例陰道鏡活檢中，有243例CINⅡ及以上級別的宮頸病變，將流式細(xì)胞儀檢測DNA倍性在CINⅡ及其以上級別病變(CINⅡ、CINⅢ或CIS和宮頸癌病變)的敏感性為87.7%，特異性為90.2%。結(jié)果進(jìn)一步表明采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行DNA含量分析可在不降低檢測特異性的情況下提高檢測的敏感性，是適合篩查宮頸癌和癌前病變的工具之一。

陰道鏡作為一種應(yīng)用廣泛的診斷方法，可通過觀察宮頸表面血管上皮的形態(tài)結(jié)構(gòu)，明確病變的部位和范圍發(fā)現(xiàn)肉眼看不到的亞臨床病變，在移行帶上異常最明顯處作定位活檢以提高活檢的陽性率[15]。本研究中陰道鏡擬診結(jié)果顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ/CIS、宮頸癌的檢出率分別為62.2%、78.0%、100%、100%，因此可以利用陰道鏡對觀察到的患者病變圖像進(jìn)行拍照，以達(dá)到隨訪患者的目的。

綜上所述，流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合陰道鏡活檢可提高宮頸癌和癌前病變診斷率、準(zhǔn)確性和敏感性，是適合篩查宮頸癌和癌前病變的工具之一，值得臨床推廣和應(yīng)用。

1 鄭啟忠，丁華野，張清萍，等.細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值[J].診斷病理學(xué)雜志，2015，22(8)：496-499.

2 趙宇倩，宋艷，趙方輝，等.陰道鏡下四象限活檢在宮頸癌前病變篩查中的價(jià)值[J].中華腫瘤雜志，2015，37(11)：875-879.

3 李建業(yè)，朱淑霞，宋時(shí)莉，等.流式細(xì)胞術(shù)檢測宮頸細(xì)胞DNA倍體在宮頸病變中的應(yīng)用[J].中國婦幼保健，2008，23(1)：85-87.

4 張素貞，張凡，常永霞，等.流式細(xì)胞術(shù)檢測宮頸癌CD105與VEGF-C、nm23表達(dá)[J].中國婦幼保健，2011，26(25)：3959-3961.

5 辛海，袁世強(qiáng)，楊幼易.流式細(xì)胞術(shù)在宮頸癌及其癌前病變中的臨床應(yīng)用[J].放射免疫學(xué)雜志，2013，26(6)：781-783.

6 林雪珊，周全，何春妮.陰道鏡和高危型HPV-DNA檢測在宮頸不典型病變篩查中的應(yīng)用[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2013，11(6)：854-855.

7 鄒雪梅.“三階梯”診療程序在4215名婦女宮頸病變普查中的應(yīng)用[J].中華疾病控制雜志，2010，14(1)：84-85.

8 王剛，王莉，石松荔，等.DNA倍體分析技術(shù)在宮頸癌早期篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國腫瘤臨床，2012，39(12)：1639-1642.

9 錢德英.陰道鏡下異常圖像對宮頸病變篩查意義[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2016，32(5)：399-402.

10 Rodenbury CJ，Corneliase CJ，Hermans J，et al.DNA flow cytometry and morphometry as prognostic indications in advanced ovarian cancer：a step forward in predicting the clinical outcome[J].Gyn Oncol，1988，29(2)：176-180.

11 Grote HJ，F(xiàn)riedrichs N，Pomjanski N，et al.Prognostic significance of DNA cytometry in carcinoma of the uterine cervix FIGO StageB and II[J].Anal Cell pathol，2001，23(3)：97-105.

12 Duarte CE，Carvalho CO，Silvafilho AL.Adaptation of image cytometry methodology for DNA ploidy analysis of cervical epithelium samples：a pilot study[J].Taiwan J Obstet Gynecol，2014，53(2)：227-231.

13 王剛，王莉，石松荔，等.DNA 倍體分析技術(shù)在宮頸癌早期篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國腫瘤臨床，2012，39(21)：1639-1642.

14 Lorenzato M，Bory JP，Cucherousset J，et al.Usefullness of DNA ploidy measurement on liquid-based smears showing conflicting results between cytology and high-risk human papillomavirus typing[J].Am J Clin Pathol，2002，118(6)：708-713.

15 Benedet JL，Matisic JP，Bertrand MA.The quality of community colposcopic practice[J].Obstetrics Gynecology，2004，103(1)：92-100.

(收稿：2016-09-20)

The clinical application value of flow-cytometry combined with colposcope ultra high frequency electric knife for diagnosis of uterine cervix carcinoma and cervical intraepithelial neoplasia

QUYalan，XIEBaofang，LIDanyang

Department of Obstetrics and Gynecology，Beijing Mentougou District Hospital，Beijing 102300，China

Objective To explore the clinical application value of flow-cytometry combined with colposcope ultra high frequency electric knife for diagnosis of uterine cervix carcinoma(UCC)and cervical intraepithelial neoplasia(CIN).Methods A total of 705 cases was included in this study who were screened from April 2014 to April 2016 and accepted colposcopy biopsy.DNA flow cytometry was performed to determine DNA index(DI)and proliferative index(PI).Results Colposcopy diagnosis results showed that the detection rate of CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ/CIS and UCC were 62.2%，78.0%，62.2% and 78.0% respectively.The sensitivity and specificity were 87.7%(213/243)and 90.2%(417/462)for DNA ploidy test using flow-cytometry.DI and PI of CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ/CIS and UCC increased gradually with significant differences(P<0.05).Conclusion Flow-cytometry combined with colposcopy biopsy may be a useful tool for cervical cancer screening in developing countries and has a competitive sensitivity and specificity，which is worthy of popularization and application.

Flow cytometry；Colposcopy biopsy；Uterine cervix carcinoma；Screening

北京市門頭溝區(qū)醫(yī)院婦產(chǎn)科(北京 102300)

曲亞蘭，女，(1983-)，碩士研究生，從事子宮內(nèi)膜異位癥診治的研究。

曲亞蘭，E-mail：quyalan0920@126.com

R711.74

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.01.006