沈偉+韋玉英+岑湘濤

摘 要：為了探討艾葉、大青葉、訶子及連翹4種中草藥熏蒸對組培室空氣消毒的效果，篩選出對組培室空氣消毒效果最佳的中藥品種及用量，該研究采用平板沉降法進行采樣和培養(yǎng)，對4種中草藥煙熏消毒效果進行現(xiàn)場消毒試驗。結果表明：艾葉、大青葉、訶子、連翹4種中草藥對組培室空氣的滅菌率分別為74.4%、76.8%、85.7%、97.8%，因而連翹為最佳消毒中草藥；并且當連翹的用量為2.0g/m3、熏蒸時間為1h時消毒效果最佳。

關鍵詞：中草藥；熏蒸；組培室；空氣消毒

中圖分類號 R187 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2016）23-0045-02

組培苗在培養(yǎng)過程中容易受微生物污染，污染直接影響生產成本及效率，打亂生產計劃，因此，減少培養(yǎng)環(huán)境的微生物污染對降低組培室的污染率至關重要，空氣消毒是切斷微生物傳播途徑，將污染降低的有力措施。中草藥在我國擁有著悠久的歷史，是我國醫(yī)學上的珍寶，中藥功效各異，抗菌消炎是其中的重要功效之一，中草藥煙熏消毒是古時最流行的一種空氣消毒方法。隨著環(huán)保意識觀念的增強，近年來人們在對消毒制劑的選擇上越來越傾向于天然、無不良反應、消毒效果強的中草藥，將中草藥用于組培室的空氣消毒少有報道，但在各大醫(yī)院消毒中卻時常有報道[1-4]，可見中草藥在空氣消毒方面有其獨特的效果。本研究利用4種中草藥艾葉、大青葉、訶子及連翹對組培室進行熏蒸消毒，從品種、用量及熏蒸時間3個方面探索中草藥對培養(yǎng)室空氣消毒的效果，旨在克服常規(guī)消毒方法的不足，開辟綠色健康、安全可靠的組培室空氣消毒新技術、新方法，為中草藥在組培室空氣消毒中的應用及發(fā)展提供理論依據(jù)和技術參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 供試材料艾葉、大青葉、訶子、連翹購買于中藥房。試劑與儀器：95%乙醇、MS培養(yǎng)基、瓊脂、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、超凈工作臺、培養(yǎng)皿、燒杯、滅菌鍋、托盤、打火機、量筒、pH試紙、鑷子。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗材料的處理 艾葉可直接點燃；大青葉和訶子及連翹須與95%乙醇按1∶2的比例密閉浸泡24h備用。

1.2.2 試驗場所 本試驗以百色學院化生樓組培室為消毒對象，組培室大小為92.48m3。在使用4種中草藥對組培室進行試驗時室內溫度、相對濕度均相同。在進行中草藥熏蒸試驗前將組培室打掃干凈，關閉組培室門窗，除操作人員外，其他人員禁止入內。

1.2.3 采樣方法 將9個直徑為95mm含有MS培養(yǎng)基的平板放置在組培室的各個角落及中間位置，打開培養(yǎng)皿蓋使平板暴露在空氣中采用自然沉降法收集空氣中菌落數(shù)[6]，采樣時間為30min，采樣期間禁止人員走動。將消毒前后采樣的平板置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后觀察培養(yǎng)皿中菌落數(shù)，并做好實驗記錄。采樣前后用75%酒精擦拭雙手，避免手上所帶菌落污染平板，影響試驗結果。

1.2.4 不同中草藥熏蒸對組培室消毒效果影響 本試驗使用培養(yǎng)基為組織培養(yǎng)常用MS培養(yǎng)基。艾葉、大青葉、訶子、連翹4種中草藥的用量均為2.0g/m3。試驗期間不能使用其他消毒劑或物理方法對組培室進行消毒。試驗前根據(jù)試驗用量及處理方式準備好藥品。將中草藥置于托盤中在組培室中分5個點燃燒，使中藥中的有效成分揮發(fā)至空氣中，熏蒸1h后取樣，以熏蒸前30min采樣為對照，每組試驗重復4次，用平均滅菌率比較滅菌情況，從中篩選出消毒效果最佳的中草藥。

1.2.5 最適中草藥用量及最適消毒時間的確定 將篩選出的最佳消毒效果中藥進行最適中草藥用量及最適消毒時間試驗，試驗用量分別為1.0g/m3、2.0g/m3和3.0g/m3，消毒時間按煙熏后0.5h、1h、1.5h、2h的時間分別進行采樣，以熏蒸前30min采樣為對照，每組試驗重復4次，用平均滅菌率比較滅菌情況。

1.3 菌落的檢測與統(tǒng)計 菌落檢測：在觀察結果時，根據(jù)菌落外觀按霉菌、細菌進行菌落的分類。菌落統(tǒng)計：統(tǒng)計好試驗前后各培養(yǎng)皿菌落數(shù)，根據(jù)奧氏公式分別計算熏蒸前和熏蒸后組培室空氣中的含菌量，奧氏公式為：

空氣菌落總數(shù)（cfu/m3）=50000N/A×T

式中：A為培養(yǎng)皿面積（cm2）；

T為培養(yǎng)皿暴露時間（min）；

N為培養(yǎng)皿平均菌落（cfu/皿）。

2 結果與分析

2.1 4種中草藥熏蒸對組培室滅菌率效果的影響 由表1可知，使用艾葉、大青葉、訶子、連翹4種中草藥分別對組培室進行熏蒸消毒，消毒前后，空氣中菌落數(shù)分別減少了74.4%、76.5%、85.7%、97.8%，但對霉菌和細菌的滅菌效果存在差異，4種中草藥對于霉菌的滅菌率分別為76.7%、78.9%、89.5%、98.4%，對細菌的滅菌效果分別為64.0%、66.6%、72.7%、90.5%。對比4種中草藥對于霉菌和細菌的滅菌效果可知，4種中草藥對于霉菌的滅菌效果均高于對細菌的滅菌作用，總滅菌率由高到底依次為連翹>訶子>大青葉>艾葉，艾葉、大青葉、訶子、連翹4種中草藥用于組培室空氣消毒時均起到了滅菌作用，綜合考慮霉菌和細菌滅菌率，連翹為4種中草藥中最佳。

3 結論與討論

紫外線消毒、甲醛+高錳酸鉀熏蒸、過氧化氫、84消毒液、乙酸、乙醇都是目前組培室中常用的消毒方法[5]，這些方法對各種菌類具有快速殺滅的作用，但藥效持續(xù)時間短，具有毒性，安全性差，操作需要有防護措施，不利于在有人的環(huán)境下操作，消毒后異味殘留時間長，長時間使用會對人體產生巨大傷害[7]。中藥有治療人體疾病的功能，同時許多中藥又具備了很強的殺菌的功效，本研究采用艾葉、大青葉、訶子及連翹對組培室進行空氣消毒，結果表明，連翹為4種中草藥中最適用于熏蒸消毒中草藥，且當連翹的用量為2.0g/m3、熏蒸時間為1h消毒效果最佳。在燃燒過程中產生的煙霧彌漫在組培室的各個角落，不存在死角，當人接觸到這些煙時，沒有任何的不適感。中草藥熏蒸用于組培室空氣消毒克服了組培室中常規(guī)消毒方法存在的消毒死角、對人體危害、具有刺激性氣味、成本高、操作具有危險性等缺點，是一種安全、可靠的新的消毒方式。

參考文獻

[1]李正澤，呂華，張峻.蒼芷佩蘭熏蒸劑對病室空氣消毒的探討[J].中國中藥信息，1999，6（9）：73.

[2]陳莉.中藥空氣消毒劑對病室內空氣消毒的效果觀察[J].中醫(yī)正骨，200l，13（2）：11.

[3]施綺云，薛廣波，胡世杰.蒼術復方消毒劑對空氣中微生物殺滅效果的檢測[J].中國消毒學雜志，l995，l2（2）：114-115.

[4]王淑云，何飛舟，羅坤華，等.中藥速效空氣消毒片對醫(yī)院空氣消毒效果的臨床觀察[J].中華護理雜志，1997，32（1）：37.

[5]黃作喜，邱超，曹楨迦，等.植物組織培養(yǎng)種消毒劑的應用研究進展[J].內江師范學院學報，2013，28（6）：26-30.

[6]鄒瑜，林貴美，韋華芳，等.四種方法對組培空氣消毒效果的研究[J].廣西農業(yè)科學，2009，6（8）：117-119.

[7]孟長軍.組培實驗室常見消毒方法優(yōu)劣比較[J].中國園藝文摘，2012，7（8）：177-178.

[8]中科院中國植物志編委會.中國植物志 （第六十一卷）[M].北京：科學出版社.1992：42-43. （責編：張宏民）