劉 娜孔令靜劉 波張 棟宦者威陳月鋒谷桂平楊俊青

(1.山東匯眾獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)有限公司，山東濟(jì)南 250022；2.山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022)

一例肉雞感染腺病毒的診治

劉 娜1孔令靜1劉 波1張 棟2宦者威1陳月鋒1谷桂平1楊俊青1

(1.山東匯眾獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)有限公司，山東濟(jì)南 250022；2.山東省動物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250022)

2016年8月，齊河某養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的肉雞發(fā)生了一種精神沉郁、病死率高，剖檢以心包積液且肝臟呈土黃色并分布有出血點(diǎn)為主要病變的疾病。無菌采取病死雞的肝臟接種科瑪嘉尿路菌群顯色培養(yǎng)基和沙門氏菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)均未見細(xì)菌生長。取病死雞臟器組織進(jìn)行RT-PCR檢測，結(jié)果顯示該樣品A型流感病毒、新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒均為陰性，禽腺病毒為陽性。結(jié)合臨床癥狀、剖檢病變和實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，表明該肉雞場發(fā)病的原因是由禽腺病毒感染引起。

肉雞 心包積液 腺病毒

禽腺病毒是一群高度多樣性的病原體，根據(jù)其抗原性不同可分為3個群（I、II、III群），其中I群是從雞、火雞、鵝和鵪鶉的呼吸道感染分離出的，具有相同的群特異性抗原，臨床上可引起雞包涵體肝炎、心包積水綜合征。I群腺病毒在家禽體內(nèi)普遍存在，多數(shù)在禽體內(nèi)復(fù)制卻不致病，導(dǎo)致雞群呈隱性感染或只是引起輕微的病癥，使得養(yǎng)殖戶忽視此類疾病的發(fā)生，給養(yǎng)殖業(yè)造成較大經(jīng)濟(jì)損失。

1 發(fā)病情況和臨床癥狀

2016年8月份，齊河某肉雞養(yǎng)殖場養(yǎng)殖28日齡817肉雞2900只，肉雞發(fā)生不明原因的死亡。發(fā)病初期個別雞只突然死亡，雞群無其他明顯癥狀，3～4d后死亡逐漸增加，死亡20～30只/d，發(fā)病已一周。雞群臨床癥狀主要為精神不振，羽毛蓬亂，采食下降，拉黃綠色稀糞，有明顯呼吸道癥狀。

2 剖檢變化

對病死雞和發(fā)病的活雞進(jìn)行剖檢，病變主要為心包積液，呈黃色水樣，心肌松軟；肝臟呈土黃色并出血、質(zhì)脆，脾臟出血；氣管內(nèi)含黏液，肺臟水腫、出血；盲腸扁桃體出血，泄殖腔出血。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

3.1 材料與方法

3.1.1 試劑與儀器

禽腺病毒核酸檢測試劑盒購自武漢科前生物股份有限公司，A型流感病毒（通用型）和新城疫病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒購自凱杰生物工程有限公司，傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒購自生科尚儀有限公司?？片敿文蚵肪猴@色培養(yǎng)基和沙門氏菌顯色培養(yǎng)基購自上海欣中生物工程有限公司。高速冷凍離心機(jī)、全自動核酸提取儀、Roche熒光PCR儀、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)，恒溫培養(yǎng)箱。

3.1.2 細(xì)菌培養(yǎng)

無菌采集肝臟，在科瑪嘉尿路菌群顯色培養(yǎng)基和沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，放置于恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。

3.1.3 病原檢測

無菌采集病死雞的泄殖腔、肝臟、肺臟和氣管等器官。將臟器剪碎、研磨并勻漿，反復(fù)凍融4次，4℃，8000r/min離心5min，取上清液0.3 ml提取核酸，做模板備用。A型流感病毒、新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒在熒光PCR儀中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增，腺病毒按說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳和凝膠成像。

3.2 結(jié)果與分析

3.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)

病料在科瑪嘉尿路菌群顯色培養(yǎng)基和沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h后，經(jīng)觀察培養(yǎng)基上均無細(xì)菌生長，表明該雞群未被細(xì)菌感染。

3.2.2 A型流感病毒、新城疫病毒和傳染性支氣管病毒RT-PC檢測結(jié)果分析

A型流感病毒、新城疫病毒和傳染性支氣管病毒陽性對照Ct值分別為15.48、18.44、14.93，均呈S型特異性曲線，陰性對照Ct值均為0，樣品Ct值均為0，如圖1所示，表明樣品A型流感病毒、新城疫病毒和傳染性支氣管病毒檢測均呈陰性，未感染上述3種病毒。

圖1 A型流感病毒、新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR結(jié)果

3.2.3 腺病毒RT-PCR檢測結(jié)果分析

如圖2所示，樣品擴(kuò)增后在498bp處出現(xiàn)一條與陽性對照大小一致的電泳條帶，這表明該樣品感染了禽腺病毒。

圖2 腺病毒RT-PCR結(jié)果

3.2.4 結(jié)果

結(jié)合臨床癥狀、剖檢變化以及實(shí)驗(yàn)室RT-PCR檢測結(jié)果，可以明確該雞場的發(fā)病原因是由禽腺病毒感染所引起的。

4 討論

4.1 在病原方面

腺病毒I群有12個血清型，其中血清-4型腺病毒是引起雞心包積水-肝炎綜合征的特異性病原。該病發(fā)病率較低，但死亡率較高，可達(dá)20%-80%，多發(fā)生在養(yǎng)殖密度大、飼養(yǎng)時間長的養(yǎng)殖場。通過臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場消毒不完善，環(huán)境污染嚴(yán)重，缺乏有效的生物安全措施，也是雞群發(fā)病的一個潛在因素。

4.2 在管理方面

改善飼養(yǎng)環(huán)境，保證舍內(nèi)溫度、濕度和合理通風(fēng)，為其健康創(chuàng)造有利條件。加強(qiáng)生物安全措施，定期消毒，尤其是各種生產(chǎn)用具和運(yùn)輸車輛及種蛋的消毒。做好雞場的衛(wèi)生管理，墊料的消毒及處理、病死雞的無害化處理等工作。

4.3 在治療方面

臨床上以抗病毒、保肝護(hù)腎、利水消腫、防止繼發(fā)感染為原則，具體如下：（1）注射禽腺病毒高免抗體，1ml/kg；（2）采用保肝護(hù)腎、增強(qiáng)免疫力、抗病毒等作用的中草藥進(jìn)行防治，并控制細(xì)菌感染；（3）在飼料中添加微量元素和復(fù)合維生素以增強(qiáng)雞群抵抗力，減少各種應(yīng)激反應(yīng)。

[1] 國紀(jì)壘，刁有祥，薛耳兌，等.I群腺病毒山東株的分離鑒定 及hexon基因的克隆與分析[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，32（12）：1773-1774.

[2] 李曉鳳，宋輝.一例雞心包積液-肝炎綜合征的實(shí)驗(yàn)室診斷[J].養(yǎng)殖與飼料，2016，（2）：53-55.

[3] 袁萬哲，李玉保，王建昌，等.雞心包積液-肝炎綜合征的初步研究[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2016，46（2）：157-160.

劉娜（1983-），山東濟(jì)南人，女，碩士，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事動物疫病診斷、實(shí)驗(yàn)室檢測等方面的工作。