顧先志+曲長(zhǎng)欣

摘 要：本實(shí)驗(yàn)采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法，以高效液相色譜法測(cè)定從麥貞花顆粒中提出女貞苷的量為考察指標(biāo)，考察提取次數(shù)、加水倍數(shù)、提取時(shí)間3個(gè)因素。含量測(cè)定方法：色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相以甲醇-水（40：60）；檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。女貞苷對(duì)照品在50～350μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。女貞苷平均回收率分別為99.3%。女貞苷最佳提取工藝為加入8倍量水，煎煮提取90分鐘，連續(xù)提取3次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高；測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，

關(guān)鍵詞：麥貞花顆粒；提取；工藝

女貞子為麥貞花顆粒主要成分之一。女貞子，別名女貞實(shí)、冬青子、鼠梓子，為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)。女貞子是一味補(bǔ)腎滋陰、養(yǎng)肝明目的中藥，可治肝腎不足、頭暈耳嗚、頭發(fā)早白及兩目昏糊等病癥。女貞子具有補(bǔ)益肝腎，明目，清虛熱的功效，主要用于頭暈?zāi)垦！㈨毎l(fā)早白、視物昏花、陰虛發(fā)熱等。女貞子含墩果酸、甘露醇、葡萄糖、棕櫚酸、銅、鋅、鐵、錳等?！侗静菡酚涊d：“養(yǎng)陰氣，平陰火，解煩熱骨蒸，止虛汗，消渴，及淋濁，崩漏，便血，尿血，陰瘡，痔漏疼痛。亦清肝火，可以明目止淚?！迸懽由杏袕?qiáng)心、擴(kuò)張冠狀血管、保肝、免疫調(diào)節(jié)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗炎、抗衰老、擴(kuò)張外周血管、止咳、抗菌等作用[1-2]。本實(shí)驗(yàn)以女貞苷為指標(biāo)對(duì)麥貞花顆粒提取工藝進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

WP-UP-Ⅲ-20精密型實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用超純水機(jī)（四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司）；FA1204CFAC型全自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；KQ250DE煎煮波清洗器煎煮波檢測(cè)儀器（煙臺(tái)鑫康商貿(mào)有限公司）；HH-601超級(jí)恒溫水?。ū本└蝗鸷銊?chuàng)科技有限公司）；PHS-550智能型臺(tái)式酸度計(jì)（杭州陸恒生物科技有限公司）；EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設(shè)備有限公司）；可見(jiàn)分光光度計(jì)（掃描型）（石家莊偉天科學(xué)儀器設(shè)備有限公司）。女貞苷對(duì)照品（自制）。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）；甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）；乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素考察

2.1.1 提取次數(shù)

取麥貞花顆粒藥材，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分鐘，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮；第二次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取兩次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮；第三次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取三次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。第四次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取四次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中女貞苷含量并計(jì)算女貞苷收率。

2.1.2 加水倍數(shù)

取麥貞花顆粒藥材，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取四次，第一次加14倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第二次加12倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第四次加8倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，分別過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中女貞苷含量并計(jì)算女貞苷收率。

2.1.3 提取時(shí)間

取麥貞花顆粒藥材，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取三次，第一次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第二次加10倍水，煎煮提取90分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍水，煎煮提取120分鐘，連續(xù)四次，分別過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中女貞苷含量并計(jì)算女貞苷收率。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，提取次數(shù)、加水倍數(shù)和提取時(shí)間對(duì)女貞苷收率影響較大。選擇提取次數(shù)、加水倍數(shù)和提取時(shí)間作為考察因素，采用正交試驗(yàn)法對(duì)影響提取效率的其它工藝條件進(jìn)行優(yōu)選。采用3個(gè)考察水平，用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平表見(jiàn)表1。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[3-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相以甲醇-水（40：60）；檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。理論板數(shù)按女貞苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取提取膏適量，精密量取，至于25毫升容量瓶?jī)?nèi)，用70%乙醇超聲10分鐘，放置室溫，用70%乙醇定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

3.3 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱(chēng)取女貞苷對(duì)照品5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

將濃度為50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml，350μg/ml的對(duì)照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)表明，女貞苷對(duì)照品在50～350μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱(chēng)取同一批的膏子6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.82%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

3.6 回收率試驗(yàn)

取已知含量的同一批供試品各6份，分別精密添加一定量的女貞苷對(duì)照品，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。平均回收率為99.3%，RSD為0.73%。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按照L9（34）正交設(shè)計(jì)表?xiàng)l件進(jìn)行試驗(yàn)，得到最佳提取工藝為加入8倍量水，煎煮提取90分鐘，連續(xù)提取3次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

參考文獻(xiàn)

[1]張明發(fā)，沈雅琴.女貞子抗炎、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2012（05）.

[2]范秦鶴，侯雅玲，朱愛(ài)華，呂蘭熏，馮敬群.女貞子不同炮制品升高白細(xì)胞耐缺氧作用及毒性比較[J].西北藥學(xué)雜志，2004（01）.

[3]李澤運(yùn)，陳曉輝，馬鳳，蘇丹，畢開(kāi)順.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定二至丸中紅景天苷、女貞子苷和蟛蜞菊內(nèi)酯的含量[J].藥物分析雜志，2011（01）.

[4]李澤運(yùn)，陳曉輝，馬鳳，蘇丹，畢開(kāi)順.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定二至丸中紅景天苷、女貞子苷和蟛蜞菊內(nèi)酯的含量[J].藥物分析雜志，2011（01）.

[5]黃雯，蘇子仁，畢文川，李軍，施麗瓊，文英強(qiáng)，詹華強(qiáng).HPLC法測(cè)定女貞子藥材中女貞苷的含量[J].藥物分析雜志，2009（05）.