劉愛(ài)民

·論著·

外周血中輔助性T細(xì)胞17及相關(guān)因子在胃癌患者中的變化及意義

劉愛(ài)民

目的 觀察外周血中輔助性T細(xì)胞17(Th17)及相關(guān)因子在胃癌患者中的變化及意義。方法 選擇2015年3月至2016年8月胃癌患者42例(觀察組)，其中早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)22例，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)20例，并設(shè)同期健康體檢者42例(對(duì)照組)，應(yīng)用細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定2組血漿Th17細(xì)胞，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血漿Th17細(xì)胞相關(guān)因子白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-23及IL-17情況，進(jìn)行組間及觀察組早期胃癌(22例)、晚期胃癌(20例)及黏液癌(12例)、腺癌(24例)、未分化癌(6例)比較。結(jié)果 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17細(xì)胞表達(dá)比較，觀察組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；早期胃癌患者與晚期胃癌患者IL-1β水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17細(xì)胞表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。觀察組黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論Th17及相關(guān)因子與胃癌有密切相關(guān)性，其檢測(cè)結(jié)果有助于臨床做出準(zhǔn)確判斷。

外周血中輔助性T細(xì)胞17；IL-6；IL-23；IL-17；胃癌；臨床應(yīng)用

胃癌(gastriccancer)是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率目前位于第2位，死亡率位于第3位[1,2]，發(fā)病率約占全球46.8%[3]，也是我國(guó)消化道惡性腫瘤死亡率的首位疾病，全國(guó)每年平均死亡率約為16/10萬(wàn)[4]。胃癌作為全球高發(fā)腫瘤，發(fā)病率及病死率有逐年上升的趨勢(shì)，其發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制較為復(fù)雜，過(guò)程中涉及到多個(gè)靶點(diǎn)、多個(gè)環(huán)節(jié)的綜合作用結(jié)果[5]。由于胃癌發(fā)病的隱匿性和高度轉(zhuǎn)移性，大多數(shù)患者就診時(shí)已發(fā)展為中晚期[6]。因此，胃癌早期診斷至關(guān)重要。本研究為了確定外周血中輔助性T細(xì)胞17(Th17)及其相關(guān)因子在胃癌發(fā)病及不同分期是否有相關(guān)性，為臨床治療胃癌提供免疫學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院腫瘤科2015年3月至2016年8月胃癌患者42例(觀察組)，男20例，女22例；年齡33～66歲，平均年齡(51.23±10.27)歲；臨床分期[7]：早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)22例，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)20例；黏液癌(印戎細(xì)胞癌)12例，腺癌24例，未分化癌6例。排除患有嚴(yán)重腎臟、肝臟、心血管、代謝、消化、泌尿、神經(jīng)或精神系統(tǒng)、自身免疫系統(tǒng)疾病者；經(jīng)研究者判斷不能進(jìn)入臨床試驗(yàn)者；依從性差的患者。并設(shè)同期本院體檢中心健康體檢者42例(對(duì)照組)，男19例，女23例；年齡32～65歲，平均年齡(50.87±10.13)歲。2組性別比、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 觀察指標(biāo)及方法

1.2.1 儀器與試劑：CD3PE-Cy5抗體、CD4FITCPE抗體、CD8AFITC抗體、CD25APC抗體、人Treg染色體試劑盒、Foxp3抗體及同型對(duì)照IgG2，均購(gòu)自美國(guó)eBioscience公司；佛波酯、離子霉素、布雷菲德菌素A、FIX&PERM試劑盒均購(gòu)自美國(guó)ENZO公司；淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll-Hypaque)、流式細(xì)胞儀分析儀為美國(guó)BD公司產(chǎn)品；固定破膜劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒為北京嘉美諾斯生物科技有限公司，酶標(biāo)儀應(yīng)用TECANferrdouEvolyzer(瑞士)全自動(dòng)免疫工作站。

1.2.2 觀察方法：采集觀察組(均為手術(shù)治療前者)和對(duì)照組清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集外周靜脈血4ml，分為2份，每份2ml，分別加入肝素鈉抗凝管中，其中一份以2 500r/min離心7min，凍存在-80℃低溫冰箱中備檢測(cè)。應(yīng)用ELISA檢測(cè)血漿Th17細(xì)胞相關(guān)因子白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-23及IL-17情況。Th17細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定：將另外一份2ml靜脈血肝素抗凝分離出單核細(xì)胞溶液加入布雷菲得菌素A、離子霉素、佛波酯工作液中，然后將試管放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37℃條件下培養(yǎng)5h，留上層血漿，培養(yǎng)后的培養(yǎng)液分2份，均為100μl，分別置于2個(gè)流式管中，即Th17細(xì)胞管和同型對(duì)照管，并做好標(biāo)記。在Th17細(xì)胞管和同型對(duì)照管中均加入推薦量CD3及CD8抗體，室溫避光15min后再采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)情況比較 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17細(xì)胞表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組高于對(duì)照組。見(jiàn)表1。

表1 2組IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)情況比較

組別IL?1β(ng/L)IL?6(ng/L)IL?23(ng/L)IL?17(ng/L)Th17細(xì)胞表達(dá)(%)觀察組65．9±7．0?188．7±18．7?235．1±17．6?87．1±13．4?3．49±0．41?對(duì)照組31．4±6．341．9±10．789．7±8．831．9±8．52．19±0．40

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2 觀察組早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)、晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)情況比較 早期胃癌患者與晚期胃癌患者IL-1β水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，IL-6、IL-23IL-17水平及Th17細(xì)胞表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。見(jiàn)表2。

分期IL?1β(ng/L)IL?6(ng/L)IL?23(ng/L)IL?17(ng/L)Th17細(xì)胞表達(dá)(%)早期胃癌(n=22)57．1±5．5134．8±17．9?178．7±9．8?58．4±6．9?3．29±0．47?晚期胃癌(n=20)77．9±6．6253．7±15．7286．5±13．8105．7±8．76．41±0．45

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.3 觀察組黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)比較 觀察組黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

類別IL?1β(ng/L)IL?6(ng/L)IL?23(ng/L)IL?17(ng/L)Th17細(xì)胞表達(dá)(%)黏液癌(n=12)68．1±7．6188．7±16．7211．1±11．278．2±7．43．35±0．42腺癌(n=24)70．2±6．8203．4±17．6220．4±12．481．3±9．23．43±0．39未分化癌(n=6)67．7±7．1187．3±16．8208．4±13．077．7±10．33．39±0．43

3 討論

IL-6可促進(jìn)多種細(xì)胞的增殖和分化細(xì)胞因子，陳金華等[19]觀察了IL-6在胃癌發(fā)生中的作用，結(jié)果表明胃癌組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及浸潤(rùn)深度與IL-6關(guān)系密切，有協(xié)同趨勢(shì)。IL-6是一種自分泌生長(zhǎng)因子，與自身靶細(xì)胞IL-6R結(jié)合，并激活JAK/STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路。活化Stat3，使Survivin表達(dá)上調(diào)，靶細(xì)胞生長(zhǎng)甚至過(guò)度增殖，凋亡被抑制，從而促進(jìn)腫瘤形成。

觀察結(jié)果表明，Th17細(xì)胞在胃癌患者外周血中存在高表達(dá)，晚期胃癌患者Th17細(xì)胞表達(dá)高于早期胃癌患者，均高于健康人群；晚期胃癌患者IL-17水平高于早期胃癌患者，證明了Th17細(xì)胞分泌IL-17的主要特征；胃癌患者中黏液癌、腺癌、未分化癌IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。作為協(xié)同誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-23，2組IL-1β、IL-6及IL-23比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組高于對(duì)照組；早期胃癌患者與晚期胃癌患者IL-1β水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，IL-6、IL-23比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。胃癌患者中黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17細(xì)胞表達(dá)情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說(shuō)明Th17及相關(guān)因子與胃癌有密切相關(guān)性，其檢測(cè)結(jié)果有助于臨床做出準(zhǔn)確判斷，為胃癌免疫治療提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.07.031

056001 河北省邯鄲市中心醫(yī)院門診部

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1002-7386(2017)07-1064-03

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