周靜靚

(上海市崇明區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,上海202150)

奶牛結(jié)核病的綜合防治

周靜靚

(上海市崇明區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,上海202150)

奶牛結(jié)核病是由結(jié)核分支桿菌引起的人畜共患慢性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為B類動(dòng)物疫病,規(guī)定必須強(qiáng)制報(bào)告,我國(guó)則將該病列為二類動(dòng)物疫病。結(jié)核病是一種古老的疾病,其發(fā)展經(jīng)歷了上升,平穩(wěn),爆發(fā)等多個(gè)歷程,近年來(lái)全球結(jié)核病有所回升。

奶牛;結(jié)核病;防治

1 奶牛結(jié)核病的危害

據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)資料，1986～1990年間41.5%的發(fā)展中國(guó)家和25%的發(fā)達(dá)國(guó)家結(jié)核病的疫情在上升。牛結(jié)核病雖然在許多發(fā)達(dá)國(guó)家已被控制，但在許多發(fā)展中國(guó)家，它依然威脅著億萬(wàn)人民的健康，其中包括我國(guó)在內(nèi)。至今，牛結(jié)核病所造成的損失大于牛的其他各種疾病所造成損失的總和。世界衛(wèi)生組織專家委員會(huì)第七次會(huì)議報(bào)告指出：“除非撲滅牛結(jié)核病，否則人類結(jié)核病的控制是不會(huì)成功的”。

結(jié)核病己經(jīng)給我國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，尤其是對(duì)奶牛的危害極其嚴(yán)重?；疾∧膛５膲勖s短，產(chǎn)奶量顯著降低，母牛常常不能懷孕，使役?；疾『笾饾u消瘦，勞動(dòng)能力減弱，最后被迫淘汰。同時(shí)隨著人們對(duì)奶食品需求量的日益增加，奶牛結(jié)核病與人身健康關(guān)系更為密切。國(guó)外的一項(xiàng)報(bào)告表明：曾在100個(gè)患結(jié)核病的病人中，發(fā)現(xiàn)有26例是從動(dòng)物感染上本病的，在這26人中，15歲以下的竟占了20例，他們得病都與不慎飲用含結(jié)核桿菌的牛奶有關(guān)。這將嚴(yán)重打擊人類對(duì)奶類產(chǎn)品的消費(fèi)信心，最終直接影響打擊到行業(yè)的信心，因此牛結(jié)核病已成為影響我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展，可持續(xù)發(fā)展的重大障礙。

2 奶牛結(jié)核病的流行情況

結(jié)核病曾是人類歷史上最猖獗的傳染病之一，直到結(jié)核菌發(fā)現(xiàn)及抗結(jié)核藥物出現(xiàn)后，人類結(jié)核病才有所平緩。我國(guó)很早就有結(jié)核病的記載，其中家畜結(jié)核病在我國(guó)流行歷史悠久，與人的結(jié)核病呈平行關(guān)系，特別是進(jìn)入40年代，由于從國(guó)外大量輸入奶牛，有許多結(jié)核病?；烊肫渲?，從而使我國(guó)家畜結(jié)核病的流行更為廣泛。50年代我國(guó)出現(xiàn)牛結(jié)核病的大爆發(fā)，如1955年檢出陽(yáng)性率達(dá)36.4%，以后由于人們長(zhǎng)期努力并采取有效措施，使結(jié)核陽(yáng)性率大大下降并控制在較低水平。70年代，隨著奶牛業(yè)的不斷發(fā)展，奶牛養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大，牛結(jié)核病的流行也達(dá)到了歷史最高峰，個(gè)別地區(qū)檢出陽(yáng)性率高達(dá)67.4%。雖然80年代牛結(jié)核病的流行有所緩和，但感染率仍然比較高。

3 奶牛結(jié)核病的主要診斷技術(shù)和研究發(fā)展

牛結(jié)核病的診斷方法有很多，目前的研究發(fā)展及方法主要有以下幾種：

（1）臨床癥狀和病理變化診斷：牛結(jié)核病臨床癥狀不典型，感染前期不出現(xiàn)臨床癥狀，而感染后期常出現(xiàn)體弱、厭食、消瘦、呼吸困難、淋巴結(jié)腫大和咳嗽等，這些癥狀在其他疾病也可看到，故早期臨床診斷不易獲得準(zhǔn)確結(jié)果。病理學(xué)檢查可以根據(jù)特征病變確診，如干酪樣壞死、鈣化、上皮樣細(xì)胞、多核巨細(xì)胞和吞噬細(xì)胞等，但必須在宰殺后進(jìn)行。

抗酸染色法：病料涂片后進(jìn)行抗酸染色，顯微鏡檢查抗酸性桿菌，本菌的細(xì)胞壁不僅有肽聚糖，還有特殊的糖脂，因?yàn)樘侵挠绊?，致使革蘭氏染色不易著染，但能抵抗30ml/L酸酒精的脫色作用，抗酸染色為紅色，常用齊尼二氏染色法，也可用熒光抗酸染色法。如果組織內(nèi)有抗酸性微生物，并且具有典型的組織學(xué)病變，則可以做出初步診斷。抗酸染色法陽(yáng)性率比較低，但它作為一種傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，具有假陽(yáng)性率低，價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，在牛場(chǎng)中就可進(jìn)行，所以仍有一定的實(shí)用價(jià)值。

（2）細(xì)菌分離培養(yǎng)法：用選擇性培養(yǎng)基分離分支桿菌，再通過(guò)培養(yǎng)和生化試驗(yàn)來(lái)鑒定，也可采用核酸探針和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法。如果因培養(yǎng)物污染或其他特殊原因，可通過(guò)豚鼠接種，再分離鑒定來(lái)證實(shí)。常用的培養(yǎng)基是羅杰二氏培養(yǎng)基、改良羅杰二氏培養(yǎng)基、丙酮酸培養(yǎng)基和小川培養(yǎng)基。但是，在上述培養(yǎng)基中，結(jié)核菌需14～15h分裂一次，這使得病原學(xué)檢查所需周期長(zhǎng)，一般需10～30d才能看到菌落，陽(yáng)性率不高，所以在實(shí)際工作中很少被采用。

（3）PCR：PCR技術(shù)自1983年發(fā)明以來(lái)，顯示出了靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速等特點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛地用于檢測(cè)疑似結(jié)核病病人的臨床樣品（主要是痰液），近年來(lái)在檢測(cè)牛結(jié)核病方面也有應(yīng)用。Ritelli M等報(bào)道，將人的一個(gè)巨噬細(xì)胞系用來(lái)從臨床樣品中分離擴(kuò)增分支桿菌，收集培養(yǎng)后的細(xì)胞，再通過(guò)半套式PCR檢測(cè)培養(yǎng)物中牛分支桿菌的特異性插入序列IS6110，可以確定有沒(méi)有牛分支桿菌感染。劉思國(guó)等根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的牛分支桿菌的pncA基因序列，設(shè)計(jì)引物可擴(kuò)增294 bp目的片段，建立了特異性檢測(cè)牛分支桿菌的PCR方法，該方法特異性強(qiáng)，敏感度可達(dá)到50 pg，陽(yáng)性樣品符合率為90%，陰性樣品符合率為100%，而且有利于結(jié)果的判定和臨床樣品的直接檢測(cè)。但是，商品化試劑盒和各科研部門研制的方法檢測(cè)結(jié)果差異較大。含有少量細(xì)菌的樣品降低了檢測(cè)結(jié)果的可靠性。由于去除污染的方法、DNA提取步驟、去除酶抑制劑技術(shù)、內(nèi)部和外部控制以及交叉污染的防止措施等差異使得結(jié)果千差萬(wàn)別。該方法還需要標(biāo)準(zhǔn)化和更加嚴(yán)格的操作步驟，以克服實(shí)驗(yàn)過(guò)程中容易出現(xiàn)的假陽(yáng)性或假陰性問(wèn)題。

（4）遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)：目前臨床上應(yīng)用最廣泛的是遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，即結(jié)核菌素試驗(yàn)，它是測(cè)定牛結(jié)核病的標(biāo)準(zhǔn)方法，也是國(guó)際貿(mào)易的指定方法。對(duì)牛皮內(nèi)注射結(jié)核菌素，并在72h后測(cè)量注射部位腫脹程度。美國(guó)就是采用撲殺結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性牛而消滅了牛結(jié)核病。它的技術(shù)要求不高，但是工作量大，檢出時(shí)間長(zhǎng)，操作麻煩，許多因素都可以降低該方法的敏感性和特異性。由于提純結(jié)核菌素（PPD）皮膚試驗(yàn)個(gè)體差異較大，注射劑量和PPD批號(hào)對(duì)牛個(gè)體反應(yīng)均有差異，會(huì)呈現(xiàn)不同的皮膚反應(yīng)，其結(jié)果以皮膚厚度的增加數(shù)為準(zhǔn)，易造成人為誤差。結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性僅能表明在過(guò)去某一時(shí)間曾經(jīng)發(fā)生過(guò)的一次結(jié)核菌感染，它無(wú)法證明目前的結(jié)核菌感染是否為活動(dòng)的，或僅為在機(jī)體的某處有活的結(jié)核菌存在。當(dāng)動(dòng)物發(fā)生某些細(xì)菌或病毒的感染時(shí)，或者使用某些藥物治療及一些不明原因，也可能造成假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。部分研究者還發(fā)現(xiàn)，該法存在著極強(qiáng)的非特異性，即在相當(dāng)數(shù)量的結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性牛中，既找不出特征病變，又不能分離出結(jié)核菌，或僅僅分離出非典型的分支桿菌，重復(fù)檢疫時(shí)陽(yáng)性率下降，而且妊娠母牛檢出率低，給基層的撲殺工作帶來(lái)困難，因此在實(shí)際工作中用于診斷牛結(jié)核病并不十分理想。

牛結(jié)核病的診斷方法雖然有很多，但無(wú)論哪種檢測(cè)方法都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，如與細(xì)胞免疫相應(yīng)的淋巴細(xì)胞增生試驗(yàn)和γ-干擾素試驗(yàn)或者因?yàn)椴僮鞣爆崳蛘咭驗(yàn)槌杀靖?，所用試劑含有放射性物質(zhì)，難以在牛結(jié)核病的常規(guī)檢測(cè)中運(yùn)用；分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)需要貴重的儀器設(shè)備，技術(shù)復(fù)雜，對(duì)實(shí)驗(yàn)室和操作人員的要求較高等原因，使其在常規(guī)牛結(jié)核病普查中難以運(yùn)用；目前作為法定檢疫方法，結(jié)核菌素試驗(yàn)仍然是普查檢疫中運(yùn)用的方法。

4 奶牛結(jié)核病的防治

雖然我們對(duì)于奶牛結(jié)核病在理論上已有相當(dāng)?shù)难芯?，知道了其危害以及一些檢測(cè)的方法，但是卻還是缺乏一種快速精確確診的手段以及有效控制其的一些措施，導(dǎo)致其不能得到有效控制，并且由于各種因素的存在，近年來(lái)，其發(fā)展趨勢(shì)更是不容樂(lè)觀，特別是隨著人民生活水平的提升，奶產(chǎn)品消費(fèi)量迅速上升，市場(chǎng)巨大，養(yǎng)牛業(yè)迅猛發(fā)展，飼養(yǎng)奶牛的積極性也空前高漲，規(guī)模不斷擴(kuò)大，但相應(yīng)的防控疫病能力卻停滯不前，導(dǎo)致各類惡性疾病時(shí)有發(fā)生，而病牛又由于各種利害關(guān)系又不能做到嚴(yán)格控制，甚至出現(xiàn)出售病牛情況，導(dǎo)致傳染源人為轉(zhuǎn)移，更是讓結(jié)核病防控難上加難。

另一方面讓人擔(dān)心的是隨著全國(guó)大市場(chǎng)、大流通的進(jìn)一步形成，各地失去了有效防控疾病的地域屏障優(yōu)勢(shì)，加上奶牛交易頻繁，轉(zhuǎn)運(yùn)奶牛手續(xù)不齊全情況時(shí)有發(fā)生，甚至結(jié)核病病牛也發(fā)生大范圍流動(dòng)，直接導(dǎo)致了各地發(fā)生結(jié)核病疫情的潛在風(fēng)險(xiǎn)越來(lái)越大，所以加強(qiáng)奶牛結(jié)核病的監(jiān)測(cè)檢疫工作，嚴(yán)格撲殺病牛是當(dāng)前緊迫的一項(xiàng)工作，對(duì)防止結(jié)核病的發(fā)生，擴(kuò)散和傳播，對(duì)促進(jìn)奶牛業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定健康發(fā)展和確保人民群眾身體健康具有十分重要和深遠(yuǎn)的意義，且迫在眉睫。 因此，農(nóng)業(yè)部規(guī)定，奶牛結(jié)核病防治必須堅(jiān)持”預(yù)防為主”的方針，采取”監(jiān)測(cè)、檢疫、撲殺、消毒”相結(jié)合的綜合性防治措施，每年定期開(kāi)展奶牛結(jié)核病監(jiān)測(cè)，從而達(dá)到加強(qiáng)對(duì)奶牛結(jié)核病的防治，有效控制該病疫情，保障畜牧業(yè)發(fā)展和人民身體健康，各地也更應(yīng)該制定適合本地區(qū)更為嚴(yán)格的措施，防止結(jié)核病的發(fā)生，杜絕一切可能引起結(jié)核病的因素，保證轄區(qū)的牛群干凈健康。

[1] 楊廣.奶牛結(jié)核病的防治[J].草業(yè)與畜牧，2012，（8）：52-53.