王曉梅，潘素明，杜日昌，馬占忠，周立平，錢(qián)春燕

鼻咽癌放療前后Th17/Treg及相關(guān)細(xì)胞因子變化及臨床意義

王曉梅，潘素明，杜日昌，馬占忠，周立平，錢(qián)春燕

目的 探討鼻咽癌放療前后輔助性T細(xì)胞17(Th17)/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)及相關(guān)細(xì)胞因子的變化及臨床意義。方法 選取我院2015年2月—2016年2月收治的鼻咽癌50例作為鼻咽癌組，選取同期在我院體檢健康的50例作為對(duì)照組。比較兩組(鼻咽癌組放療前后、隨訪3個(gè)月時(shí))外周血Th17和Treg所占的占總T細(xì)胞百分比及相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化。結(jié)果 與對(duì)照組比較，鼻咽癌組血清Th17及Treg占總T細(xì)胞百分比、白細(xì)胞介素(IL)-17、IL-23、IL-10及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1水平顯著升高(P<0.05)；與放療前比較，放療后血清Th17占總T細(xì)胞百分比、IL-17及IL-23水平升高(P<0.05)，放療后Treg占總T細(xì)胞百分比、隨訪3個(gè)月時(shí)Th17及Treg占總T細(xì)胞百分比、隨訪3個(gè)月時(shí)IL-17及IL-23水平、放療后及隨訪3個(gè)月時(shí)血清TGF-β1及IL-10水平均降低(P<0.05)；與放療后比較，隨訪3個(gè)月時(shí)血清Th17及Treg占總T細(xì)胞百分比、IL-17、IL-23、IL-10及TGF-β1水平均顯著降低(P<0.05)。結(jié)論 放療可加劇鼻咽癌患者Th17/Treg的免疫失衡，期間輔以免疫治療可改善患者的免疫功能。

鼻咽腫瘤；T淋巴細(xì)胞，輔助誘導(dǎo)；Th17細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞，調(diào)節(jié)性

鼻咽癌是臨床常見(jiàn)惡性腫瘤，我國(guó)南方地區(qū)高發(fā)[1]。放療是鼻咽癌的首選治療方案，可直接殺死腫瘤細(xì)胞，同時(shí)可引起機(jī)體免疫抑制[2]。T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤免疫的中心環(huán)節(jié)。相關(guān)研究證實(shí)，鼻咽癌患者治療前即存在不同程度的T淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂，放療則進(jìn)一步加劇機(jī)體的細(xì)胞免疫失衡[3]。輔助性T細(xì)胞17(Th17)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是最新發(fā)現(xiàn)的T淋巴細(xì)胞亞群，在機(jī)體正常狀態(tài)下兩者相互制約，保持免疫平衡，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。目前放療對(duì)鼻咽癌患者Th17/Treg免疫平衡的影響尚未明確。本研究探討鼻咽癌患者放療前后外周血Th17和Treg占總T細(xì)胞百分比及相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化，分析放療對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的影響，為臨床診斷與治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年2月—2016年2月收治的鼻咽癌50例作為鼻咽癌組，其中男32例，女18例；年齡24～67(45.7±8.3)歲；臨床分期為Ⅰ期7例，Ⅱ期14例，Ⅲ期20例，Ⅳ期9例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①初治鼻咽癌患者；②Karnofsky評(píng)分[4]≥70分；③行根治性放療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近6個(gè)月內(nèi)服用過(guò)免疫調(diào)節(jié)藥物；②合并免疫性疾??；③曾接受其他抗腫瘤治療。選取同期在我院體檢健康的50例作為對(duì)照組，其中男28例，女22例；年齡21～69(43.6±9.2)歲。兩組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 放療方法 固定體位并行CT模擬定位掃描，臨床靶區(qū)(CTV)1為高危區(qū)域，CTV2為頸部預(yù)防照射區(qū)，CTV1和 CTV2分別外擴(kuò)3 mm為靶區(qū)體積(PTV)1和 PTV2。鼻咽癌組均行調(diào)強(qiáng)適形放療(IMRT)，PGTVnx總劑量為70～74 Gy，PGTVnd為66～70 Gy，PTV1為60 Gy，PTV2為54 Gy，每周5次，共33次。

1.3 血樣采集 鼻咽癌組分別于放療前、放療后及治療結(jié)束隨訪3個(gè)月時(shí)清晨空腹抽取靜脈血5 ml。對(duì)照組隨機(jī)晨起空腹采集靜脈血5 ml。

1.4 外周血Th17、Treg檢測(cè) 采集血樣3 ml，肝素抗凝，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單核細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖液調(diào)整細(xì)胞濃度至2×106/ml，加入適量抗體，室溫避光孵育15 min，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17[CD4+白細(xì)胞介素(IL)-17]、Treg(CD4+CD25+Treg)占總T淋巴細(xì)胞百分比。

1.5 血清Th17、Treg相關(guān)細(xì)胞因子檢測(cè) 采集血樣2 ml，室溫靜置2 h，3000 r/min離心10 min，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清Th17、Treg相關(guān)細(xì)胞因子水平，包括IL-17、IL-23、IL-10及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1。

2 結(jié)果

2.1 血清Th17、Treg占總T細(xì)胞百分比的比較 與對(duì)照組比較，鼻咽癌組血清Th17、Treg占總T細(xì)胞百分比顯著升高(P<0.05)；與放療前比較，放療后血清Th17占總T細(xì)胞百分比升高(P<0.05)，放療后Treg占總T細(xì)胞百分比、隨訪3個(gè)月時(shí)Th17及Treg占總T細(xì)胞百分比降低(P<0.05)；與放療后比較，隨訪3個(gè)月時(shí)血清Th17、Treg占總T細(xì)胞百分比顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 血清Th17、Treg相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化 與對(duì)照組比較，鼻咽癌組血清IL-17、IL-23、IL-10及TGF-β1水平顯著升高(P<0.05)；與放療前比較，放療后血清IL-17、IL-23水平升高(P<0.05)，放療后血清IL-10和TGF-β1、隨訪3個(gè)月時(shí)IL-17、IL-23、IL-10和TGF-β1水平均降低(P<0.05)；與放療后比較，隨訪3個(gè)月時(shí)血清IL-17、IL-23、IL-10及TGF-β1水平顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表1 放療后鼻咽癌組與健康對(duì)照組血清Th17、Treg占總T細(xì)胞百分比的比較

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與放療前比較，cP<0.05；與放療后比較，eP<0.05

表2 鼻咽癌組與健康對(duì)照組血清Th17、Treg相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與放療前比較，cP<0.05；與放療后比較，eP<0.05

3 討論

CD4+T淋巴細(xì)胞參與機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)，在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用[5]。在不同細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下，CD4+T淋巴細(xì)胞可分化為T(mén)h1、Th2、Th17和Treg等細(xì)胞亞群。Th1/Th2免疫平衡是經(jīng)典的免疫學(xué)說(shuō)，以Th2漂移為特征的Th1/Th2免疫失衡被認(rèn)為是誘發(fā)腫瘤的主要機(jī)制[6]。近年來(lái)，隨著對(duì)Th17和Treg研究的不斷深入，人們對(duì)機(jī)體抗腫瘤免疫機(jī)制有了新的認(rèn)識(shí)。Th17和Treg作為新發(fā)現(xiàn)的T淋巴細(xì)胞亞群，可直接參與腫瘤細(xì)胞的分化和發(fā)育，從而參與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7]。

Th17通過(guò)募集炎性細(xì)胞、激活轉(zhuǎn)錄因子等多種途徑，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、活化，同時(shí)可通過(guò)分泌大量的IL-17、IL-23等效應(yīng)因子，啟動(dòng)STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞活化，促進(jìn)新生血管形成，從而加速腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[8]。Treg具有強(qiáng)大的免疫抑制功能，其增殖、活化與腫瘤免疫逃逸密切相關(guān)，且其相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β1、IL-10等高表達(dá)可顯著抑制腫瘤特異性免疫反應(yīng)，降低自然殺傷細(xì)胞的殺傷活性，從而抑制免疫細(xì)胞介導(dǎo)的免疫防御反應(yīng)，促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)展[9]。本文結(jié)果顯示，鼻咽癌患者放療前外周血Th17及Treg占總T細(xì)胞百分比、IL-17、IL-23、TGF-β1及IL-10水平均顯著高于對(duì)照組，提示鼻咽癌患者存在不同程度的Th17/Treg免疫失衡，與黃繼紅等[10]研究結(jié)論一致。相關(guān)研究證實(shí)外周血Th17占總T細(xì)胞百分比在胃癌、肝癌等多種惡性腫瘤中均升高[11-12]。本研究表明放療后外周血Th17占總T細(xì)胞百分比、IL-17及IL-23水平較放療前顯著升高，提示放療可促進(jìn)Th17的活化及其效應(yīng)因子的分泌，可能與急性放射性損傷有關(guān)[13]；同時(shí)，放療后外周血Treg占總T細(xì)胞百分比、TGF-β1及IL-10水平較放療前顯著降低，提示放療可抑制Treg的活化及其效應(yīng)因子分泌，可能與放療改善腫瘤微環(huán)境、減輕腫瘤免疫抑制有關(guān)；隨訪3個(gè)月時(shí)，鼻咽癌患者外周血Th17及Treg占總T細(xì)胞百分比、IL-17、IL-23、TGF-β1及IL-10水平均較放療后顯著降低，提示由放療所致的Th17/Treg免疫失衡已得到緩解，可能與患者的腫瘤負(fù)荷降低、機(jī)體免疫力有所恢復(fù)及放療毒性及不良反應(yīng)逐漸減弱有關(guān)。

綜上，鼻咽癌患者存在Th17/Treg免疫失衡，放療可加劇此現(xiàn)象，故放療期間監(jiān)測(cè)患者免疫功能變化，適當(dāng)輔以免疫治療可改善免疫功能。

[1] He Y Q, Xue W Q, Shen G P,etal. Household inhalants exposure and nasopharyngeal carcinoma risk: a large-scale case-control study in Guangdong, China[J].BMC Cancer, 2015,15:1022.

[2] Tian Y M, Tian Y H, Zeng L,etal. Prognostic model for survival of local recurrent nasopharyngeal carcinoma with intensity-modulated radiotherapy[J].Br J Cancer, 2014,110(2):297-303.

[3] 吳偉,劉聯(lián)斌,周茂華.放化療對(duì)鼻咽癌患者淋巴細(xì)胞亞群影響的觀察[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(2):129-132.

[4] Chambless L B, Kistka H M, Parker S L,etal. The relative value of postoperative versus preoperative Karnofsky Performance Scale scores as a predictor of survival after surgical resection of glioblastoma multiforme[J].J Neurooncol, 2015,121(2):359-364.

[5] 福軍亮,王福生.CD4+殺傷性T細(xì)胞在病毒感染和腫瘤性疾病中的研究進(jìn)展[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2012,28(1):102-104.

[6] 沈洪彥,孫治君.Th1/Th2細(xì)胞與腫瘤復(fù)發(fā)[J].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2006,13(4):490-492.

[7] 郭美姿,陳曉琳,尹震宇.Th17/Treg失衡在消化道腫瘤中的研究進(jìn)展[J].國(guó)際消化病雜志,2013,33(5):341-344.

[8] 蔡曼波,曾益新,邵建永,等.腫瘤微環(huán)境中Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞對(duì)鼻咽癌進(jìn)展和預(yù)后的影響[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2016,13(3):1-4.

[9] 汪鐵軍,謝中華,鄭元秀,等.初診鼻咽癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及與TGF-β1的相關(guān)性[J].放射免疫學(xué)雜志,2013,26(4):474-476.

[10]黃繼紅,昂杰,牟忠林,等.Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞在鼻咽癌中相關(guān)性的研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,19(9):1194-1196.

[11]葉妮,張光波,高楠,等.Th17與Foxp3+Treg在胃癌患者外周血中的表達(dá)[J].世界華人消化雜志,2012,(36):3689-3694.

[12]張?jiān)龉?秦鳴放.肝癌患者外周血Treg、Th17百分比及IL-17水平觀察[J].山東醫(yī)藥,2015,4(15):37-39.

[13]錢(qián)莘.Th17細(xì)胞在放射性肺損傷中的作用[J].腫瘤學(xué)雜志,2010,16(12):914-917.

Changes and Clinical Significance of Th17/Treg Related Cytokines in Patients with Nasopharyngeal Carcinoma before and after Radiotherapy

WANG Xiao-meia, PAN Su-mingb, DU Ri-changc, MA Zhan-zhongd, ZHOU Li-pinga, QIAN Chun-yan

(a. Department of Gastroenterology, b. Department of Radiotherapy, c. Department of Pathology, d. Department of Clinical Laboratory, Yuebei People's Hospital of Guangdong, Shaoguan, Guangdong 440200, China)

Objective To investigate changes and clinical significance of helper T cell/regulatory T cell (Th17/Treg) and related cytokines in patients with nasopharyngeal carcinoma before and after radiotherapy. Methods A total of 50 patients with nasopharyngeal carcinoma admitted during February 2015 and February 2016 were chosen as nasopharyngeal carcinoma group, and 50 healthy people taking medical examination at the same period were chosen as control group. Changes of Th17 and Treg cell proportions accounting for total T cell, and related cytokine levels were compared between two groups (before and after radiotherapy, and in follow-up for 3 month in nasopharyngeal carcinoma group). Results Compared with those in control group, serum Th17 and Treg cell accounting for total T cell proportions, interleukin (IL)-17, IL-23, IL-10 and transforming growth factor (TGF)-β1 levels were significantly increased in nasopharyngeal carcinoma group (P<0.05). Compared with those before radiotherapy, serum Th17 cell proportion after radiotherapy, serum IL-17 and IL-23 levels were significantly increased after radiotherapy (P<0.05), and Treg cell accounting for total T cell proportion after radiotherapy, Th17 and Treg cell accounting for total T cell proportions in follow-up for 3 months, IL-17 and IL-23 levels in follow-up for 3 months, serum TGF-β1 and IL-10 levels were significantly decreased after radiotherapy and 3 month after radiotherapy (P<0.05). Compared with those after radiotherapy, serum Th17 and Treg cell accounting for total T cell proportions, IL-17, IL-23, IL-10 and TGF-β1 levels were significantly decreased 3 months after radiotherapy (P<0.05). Conclusion Radiotherapy can aggravate Th17/Treg immunodissonance of patients with nasopharyngeal carcinoma, and therefore immunotherapy should be supplemented during radiotherapy to improve immune function.

Nasopharyngeal neoplasms; T-Lymphocytes, helper-inducer; Th17 cells; T-lymphocytes, regulatory

韶關(guān)市科技項(xiàng)目(2015CX-K021)

440200 廣東 韶關(guān)，廣東粵北人民醫(yī)院消化內(nèi)科(王曉梅、周立平)，放療科(潘素明)，病理科(杜日昌)，檢驗(yàn)科(馬占忠、錢(qián)春燕)

R739.63

A

1002-3429(2017)03-0078-03

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.03.030

2016-12-07 修回時(shí)間：2017-01-06)