郭志琴，呂青山，王振，陸麗慧，張琳，鄔萬新

（嘉興市第一醫(yī)院，浙江 嘉興 314000）

Jab1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

郭志琴，呂青山，王振，陸麗慧，張琳，鄔萬新

（嘉興市第一醫(yī)院，浙江 嘉興 314000）

目的研究c-Jun激活區(qū)結(jié)合蛋白1（Jab1）在乳腺癌組織中的表達(dá)，探討其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及與p27kip1的相關(guān)性。方法回顧性收集111例乳腺癌及癌旁組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法檢測(cè)乳腺癌及相應(yīng)癌旁組織中Jab1蛋白的表達(dá)，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果本組乳腺癌組織中Jab1蛋白陽性表達(dá)率為92.8%（103/111），而癌旁組織中Jabl蛋白陽性表達(dá)率為10.8%（12/111），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Jab1蛋白表達(dá)與乳腺癌患者發(fā)病年齡、組織學(xué)類型、激素受體狀態(tài)等無關(guān)（均P＞0.05），而與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)（均P＜0.01）；Jab1蛋白陽性表達(dá)與p27kip1表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.528，P＜0.01）。結(jié)論Jab1蛋白的異常表達(dá)可能參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，檢測(cè)Jab1蛋白有助于乳腺癌的臨床診斷。

乳腺癌；c-Jun激活區(qū)結(jié)合蛋白1；p27kip1；病理

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率不斷上升，已位居女性惡性腫瘤死亡率的首位，嚴(yán)重危害女性身心健康[1]。p27kip1是重要的細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子，其蛋白表達(dá)和亞細(xì)胞定位改變與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)[2-3]。Jab1可以特異性地與p27kip1結(jié)合，實(shí)現(xiàn)p27kip1出核轉(zhuǎn)運(yùn)，并使其通過泛素-蛋白酶體途徑降解。然而，目前國內(nèi)未見Jab1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)研究。本研究分析Jab1蛋白與乳腺癌臨床病理特征和p27kip1的關(guān)系，探討其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2004年1月～2005年12月臨床及病理資料完整、行手術(shù)治療并經(jīng)病理檢查證實(shí)為原發(fā)性乳腺癌的組織標(biāo)本111例。均為女性，年齡31～82歲，平均（51.3±10.1）歲。腫瘤大小0.5～10.0cm，平均（2.7±1.8）cm。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例（45.95%）。根據(jù)美國癌癥聯(lián)合會(huì)（AJCC）乳腺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：I期31例，Ⅱ期58例，III期22例。所有患者術(shù)前均未接受放化療或其他輔助治療。本研究經(jīng)嘉興市第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意批準(zhǔn)，并獲得患者或其家屬的知情同意。

1.2 方法 主要試劑：小鼠抗人Jab1單克隆抗體（611618，美國BD公司）；兔抗人p27kip1多克隆抗體 （C-19，美國Santa Cruz公司）；ER抗體（SP1）、PR抗體（SP2）和c-erbB-2抗體（SP3）（美國Zymed公司）；免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒 （k5007，丹麥Dako公司）。按試劑盒說明，采用EnVision二步法，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定：ER和PR以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性；c-erbB-2以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性；Jab1和p27kip1以細(xì)胞核或胞核伴胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，只有細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為非特異性染色。每張切片選取5個(gè)有代表性的高倍視野 （400×），每個(gè)視野計(jì)數(shù)300個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。＜10%為（-），10%～30%為 （+），31%～60%為 （++），＞60%為（+++）。（-）和（+）為低表達(dá)，（++）和（+++）為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，相關(guān)性分析采用χ2檢驗(yàn)、Fisher精確概率法和Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Jab1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，Jab1蛋白主要定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀，胞質(zhì)偶有少量表達(dá)。癌旁組織中Jab1蛋白表達(dá)不明顯或不表達(dá)（圖1A），而乳腺癌組織中表達(dá)較高（圖1B）。本組乳腺癌組織中Jab1蛋白陽性表達(dá)率為92.8%（103/111），高表達(dá)率為58.6%（65/ 111），低表達(dá)率為41.4%（46/111），而癌旁組織中Jab1蛋白陽性表達(dá)率僅為10.8%（12/111），兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本研究也檢測(cè)了p27kip1蛋白的表達(dá)及分布，發(fā)現(xiàn)其陽性染色信號(hào)在細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)呈彌漫分布的棕黃色或棕褐色顆粒 （圖1C）。本組乳腺癌組織中p27kip1蛋白陽性表達(dá)率為45.0%（50/111），高表達(dá)者僅18.9%（21/111）。

圖1 乳腺癌組織中Jab1和p27kip1免疫組織化學(xué)染色。（1A：Jab1蛋白在癌旁組織內(nèi)低表達(dá)或不表達(dá)；1B：Jab1蛋白在癌組織內(nèi)高表達(dá)；1C：p27kip1蛋白在癌細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)彌漫分布）（EnVision法×100）

2.2 Jab1蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Jab1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)與患者發(fā)病年齡、組織學(xué)類型、激素受體狀態(tài)等均無關(guān)（均P＞0.05），而與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和TNM分期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。詳見表1。

表1 Jab1蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 （n，%）

續(xù)表1

2.3 乳腺癌組織中Jab1和p27kip1蛋白表達(dá)的相關(guān)性 乳腺癌組織中Jab1蛋白與p27kip1蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.528，P＜0.01），詳見表2。

表2 Jab1蛋白表達(dá)與p27kip1表達(dá)的關(guān)系

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子p27kip1的失調(diào)控與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但具體作用機(jī)制尚未完全闡明。p27kip1的表達(dá)調(diào)控主要位于轉(zhuǎn)錄后階段，包括Jab1介導(dǎo)的出核轉(zhuǎn)運(yùn)以及隨后的泛素化降解。因此，在乳腺癌中研究Jab1蛋白表達(dá)以及與p27kip1的相關(guān)性具有重要意義。Jab1是COP信號(hào)復(fù)合物的第5亞單位，也被稱為CSN5，能與多種蛋白相互作用，是一種重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子[4]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，Jab1可以特異性地與p27kip1結(jié)合，將細(xì)胞核內(nèi)磷酸化的p27kip1攜帶運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)中，使其通過泛素-蛋白酶體途徑降解[5]。已有研究顯示，Jab1在鼻咽癌、卵巢癌等[6-7]中呈高表達(dá)。Hsu等[8]報(bào)道Jab1在乳腺癌中的表達(dá)增加與p27kip1的下降及乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)。

本文研究顯示，Jab1蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，與上述文獻(xiàn)報(bào)道相似，提示Jab1高表達(dá)可能與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)。本研究結(jié)合乳腺癌患者的臨床病理資料發(fā)現(xiàn)，Jab1蛋白陽性表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)，而這些臨床病理指標(biāo)都是與患者預(yù)后密切相關(guān)的重要因素。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中Jab1蛋白陽性表達(dá)與p27kip1蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示Jab1和p27kip1共同參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。上述這些結(jié)果提示，在乳腺癌組織中，Jab1蛋白表達(dá)異常增加時(shí)，可以加速p27kip1的出核轉(zhuǎn)運(yùn)以及繼發(fā)的泛素化降解，導(dǎo)致癌細(xì)胞內(nèi)p27kip1蛋白水平下降，引發(fā)細(xì)胞周期調(diào)控紊亂，從而參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。Jab1蛋白表達(dá)上調(diào)是乳腺癌的重要惡性表型特征之一，與乳腺癌的惡性進(jìn)展有關(guān)，其高表達(dá)提示患者可能預(yù)后不良。然而，對(duì)于Jab1介導(dǎo)的p27kip1出核降解的具體機(jī)制尚未明了，在這條途徑中，Jab1究竟如何發(fā)揮作用尚有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，Jab1蛋白的異常表達(dá)可能參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，并與p27kip1負(fù)相關(guān)。Jab1可能通過與p27kip1結(jié)合來調(diào)節(jié)p27kip1的核內(nèi)外分布并影響其表達(dá)，從而參與調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的生長。檢測(cè)Jab1蛋白有助于乳腺癌的臨床診斷及預(yù)后判斷，為乳腺癌的基因治療提供新的可能途徑。

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