徐亞東，李華，宋春霞

(1海陽市人民醫(yī)院，山東海陽265100;2海陽市婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心)

甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13的表達(dá)變化及對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響

徐亞東1，李華2，宋春霞1

(1海陽市人民醫(yī)院，山東海陽265100;2海陽市婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心)

目的探討信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)在甲狀腺癌患者癌組織中的表達(dá)及其對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響。方法選取接受根治術(shù)治療的甲狀腺癌患者60例。采集患者甲狀腺癌組織以及癌旁正常組織，以免疫組化法分別檢測(cè)Stat3、Survivin、MMP-13的表達(dá)，并比較甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)水平。結(jié)果甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin 、MMP-13陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織(P均<0.05)。甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)。結(jié)論甲狀腺癌患者癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)升高，且可促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

甲狀腺癌；Stat3；Survivin；基質(zhì)金屬蛋白酶13；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

甲狀腺癌屬于臨床上最常見的頸部惡性腫瘤[1]。臨床上根據(jù)患者分化程度的不同分為乳頭狀癌、濾泡樣癌、鱗癌以及髓樣癌等。其中鱗癌、髓樣癌均屬于高度惡化的癌腫，具有發(fā)展迅速、預(yù)后差等特點(diǎn)，臨床上常規(guī)治療以及放、化療均無顯著效果[2]。有研究報(bào)道顯示，甲狀腺癌存在早期侵襲四周組織，以及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況的傾向，對(duì)患者的預(yù)后以及生存期具有不同程度的影響[3]。本文通過研究信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Stat3)、凋亡抑制基因(Survivin)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)在經(jīng)根治術(shù)治療的甲狀腺癌患者組織中的表達(dá)變化及其對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，旨在為臨床診治提供新型靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年2月～2017年2月于海陽市人民醫(yī)院接受根治術(shù)治療的甲狀腺癌患者60例，均經(jīng)病理檢查確診。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：均經(jīng)手術(shù)病理檢查確診為甲狀腺癌；均行根治術(shù)治療；入院前未接受任何抗腫瘤治療；臨床病歷資料完整。其中患者男34例、女26例，年齡22～72(45.4±10.4)歲；病理組織類型：乳頭狀腺癌30例，濾泡狀腺癌18例，髓樣癌7例，鱗癌5例；伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。術(shù)中取患者甲狀腺癌組織60例份，癌旁組織(距癌組織5 cm)60例份。患者均知情并簽署了同意書，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 組織Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)的檢測(cè) 采用免疫組化法。所有組織標(biāo)本通過10%甲醛固定，予以常規(guī)石蠟包埋，而后取4 μm厚連續(xù)切片。對(duì)組織切片實(shí)施常規(guī)脫蠟水化，經(jīng)高溫高壓法給予抗原修復(fù)；再滴加一抗置于4 ℃孵育箱內(nèi)過夜；隨后嚴(yán)格按試劑盒內(nèi)說明書滴加試劑，行DAB顯色；然后行蘇木素復(fù)染、脫水、封片，最后在高倍顯微鏡下進(jìn)行結(jié)果評(píng)價(jià)。將已知陽性標(biāo)本用于陽性對(duì)照，并以PBS代替一抗用于陰性對(duì)照。其中兔抗人Stat3多克隆抗體與兔抗人Survivin多克隆抗體均購(gòu)自武漢博士德公司，兔鼠共用二抗購(gòu)自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。兔抗人MMP-13型多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物公司。DAB顯色劑和免疫組化染色有關(guān)試劑盒均購(gòu)自北京中山金橋公司。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[5，6]：切片均選擇雙盲法，并由本院兩名病理科醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立閱片。其中Stat3染色陽性信號(hào)呈棕黃色或棕色顆粒狀，定位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜；Survivin染色陽性信號(hào)棕色或棕褐色顆粒狀，定位于細(xì)胞質(zhì)。MMP-13染色陽性信號(hào)呈棕褐色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)。每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野，根據(jù)染色程度以及陽性細(xì)胞占比進(jìn)行結(jié)果判定：其中不著色計(jì)為0分，染色強(qiáng)度較差計(jì)為1分，染色強(qiáng)度中等計(jì)為2分，染色強(qiáng)度較深計(jì)為3分；陽性細(xì)胞占比<5%計(jì)為0分，陽性細(xì)胞占比5%～25%計(jì)為1分，陽性細(xì)胞占比26%～50%計(jì)為2分，陽性細(xì)胞占比>50%計(jì)為3分。兩項(xiàng)得分相乘所得結(jié)果即為最終判斷結(jié)果。其中0～1分計(jì)為陰性，2～3分計(jì)為弱陽性，4～6分計(jì)為中度陽性，>6分計(jì)為強(qiáng)陽性。陽性率=弱陽性占比+中度陽性占比+強(qiáng)陽性占比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以頻次或百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同甲狀腺組織中Stat3、Survivin、MMP-13表達(dá)比較 甲狀腺癌組織中Stat3表達(dá)陰性、弱陽性、中度陽性、強(qiáng)陽性及陽性表達(dá)率分別為13、11、19、17例，78.33%； Survivin表達(dá)分別為17、11、21、10例，71.67%；MMP-13表達(dá)分別為16、12、20、12例，73.33%；癌旁組織中分別為43、6、7、4例，28.33%；48、6、4、2例，20.00%；54、4、1、1例，10.00%。甲狀腺癌組織中各指標(biāo)表達(dá)陽性率均高于癌旁組織(χ2值分別為30、134、30、303，49.509，P均<0.05。

2.2 甲狀腺癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率比較 甲狀腺癌淋巴轉(zhuǎn)移患者的Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率分別為86.84%(33/38)、92.11%(35/38)、89.47%(34/38，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者分別為63.64%(14/22)、36.36%(8/22)、45.45%(10/22)，兩者比較，χ2值分別為4.421、21.321、13.806，P均<0.05。

3 討論

近年，隨著人們生活水平提高以及飲食習(xí)慣改變，甲狀腺癌發(fā)病率逐年上升。該病具有較高的局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率，患者預(yù)后較差[7，8]。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移通常是多步驟的復(fù)雜性過程，可涉及到腫瘤細(xì)胞與宿主間的相互作用，常有多種基因及其產(chǎn)物在該過程中起著至關(guān)重要作用[9，10]。Stat3信號(hào)傳導(dǎo)通路和細(xì)胞的增殖、分化與凋亡存在一定相關(guān)性，且該通路的持續(xù)激活使得細(xì)胞異常增殖并向惡性轉(zhuǎn)化，屬于癌基因之一[11]。Survivin是凋亡抑制基因，具有抑制細(xì)胞凋亡以及調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的雙重作用，其不但在細(xì)胞凋亡抑制、腫瘤血管形成中發(fā)揮著至關(guān)重要作用，同時(shí)還可在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)[12]。MMP-13則是參與細(xì)胞外基質(zhì)Ⅲ型膠原降解的重要酶，其主要是通過破壞腫瘤細(xì)胞周邊，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移，與患者的預(yù)后密切相關(guān)[13，14]。

本研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織中Stat3陽性表達(dá)率較癌旁組織高，與張晨蕾等[15，16]的研究報(bào)道一致，說明Stat3可能參與了甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程，可能成為臨床上診斷甲狀腺癌的指標(biāo)之一。其中激活的Stat3可通過提高部分影響下游生長(zhǎng)、凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展；而部分受Stat3調(diào)節(jié)的下游靶基因可通過與這些相關(guān)基因共同調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和凋亡。目前，已有學(xué)者在胃癌、乳腺癌以及前列腺癌中發(fā)現(xiàn)，CyclinD1等蛋白的表達(dá)存在異常。筆者認(rèn)為，通過對(duì)Stat3基因表達(dá)進(jìn)行抑制或間接阻斷Stat3的活化，可能有效治療甲狀腺癌，值得臨床進(jìn)行更深入的研究。此外，甲狀腺癌組織中Survivin陽性表達(dá)率也較癌旁組織高，與黃海燕等[17，18]的研究報(bào)道一致，表明Survivin在甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用，可能成為臨床上診斷甲狀腺癌的指標(biāo)之一。另外，甲狀腺癌組織中MMP-13陽性表達(dá)率高于癌旁組織，與侯繼院等[19，20]的研究報(bào)道相似，提示MMP-13與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本文結(jié)果還顯示甲狀腺癌淋巴轉(zhuǎn)結(jié)移患者Stat3、Survivin、MMP-13陽性表達(dá)率均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。提示Stat3、Survivin、MMP-13的表達(dá)與甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，臨床工作中可通過對(duì)上述三項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)行有效抑制，從而達(dá)到改善患者預(yù)后的目的。

綜上所述，Stat3、Survivin、MMP-13在甲狀腺癌患者癌組織中表達(dá)升高，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。上述三項(xiàng)指標(biāo)可能成為甲狀腺癌診斷、治療以及評(píng)估預(yù)后的新靶點(diǎn)。

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