費(fèi)中杰

（揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院研究生，江蘇揚(yáng)州 225001）

新城疫基因工程疫苗的研究進(jìn)展

費(fèi)中杰

（揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院研究生，江蘇揚(yáng)州 225001）

新城疫（Newcastle disease，ND）是一種烈性病毒性家禽傳染病，曾被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類(lèi)傳染病。本病自1926年首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，已經(jīng)在世界范圍內(nèi)多次流行，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。免疫接種是控制ND的主要手段。目前常用的有弱毒疫苗、中等毒力疫苗和滅活疫苗等常規(guī)疫苗，雖然商品雞群多次進(jìn)行免疫接種，但由于環(huán)境中強(qiáng)毒的存在，仍有可能感染新城疫病毒，造成ND以不同的形式發(fā)生和流行。為了彌補(bǔ)常規(guī)疫苗的不足，國(guó)內(nèi)外一些實(shí)驗(yàn)室從20世紀(jì)80年代末開(kāi)始研制ND基因工程疫苗，在DNA疫苗、亞單位疫苗和活載體疫苗等方面都進(jìn)行了有益的探索。在重組活載體疫苗研究中，NDV主要免疫保護(hù)性抗原F和HN已在多種載體系統(tǒng)中得到表達(dá)。

新城疫；疫苗；研究

1 DNA疫苗

在DNA疫苗研究方面，日本學(xué)者Sakaguchi等[2]將NDV F基因插入質(zhì)粒載體，在巨細(xì)胞病毒早期增強(qiáng)子和雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子的調(diào)控下，構(gòu)建了線(xiàn)性質(zhì)粒以及線(xiàn)性質(zhì)粒與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染劑的混合物，他們都能誘導(dǎo)高水平的針對(duì)F蛋白的抗體，而閉環(huán)狀的質(zhì)粒不能產(chǎn)生抗體。姜永厚等[3]構(gòu)建了共表達(dá)雞IL-2和ND F基因的重組真核質(zhì)粒，用該共表達(dá)質(zhì)粒比將單表達(dá)IL-2基因的質(zhì)粒和單表達(dá)F基因的質(zhì)?；旌鲜褂玫姆椒ㄒM(jìn)一步，為DNA疫苗的應(yīng)用提供了極大便利。免疫接種時(shí)，一針注射即可完成，而不需分別注射2種質(zhì)粒。

2 亞單位疫苗

亞單位疫苗是將NDV保護(hù)性抗原基因在原核或真核系統(tǒng)中表達(dá)所獲得的產(chǎn)品制成的疫苗。桿狀病毒載體系統(tǒng)是研制ND亞單位苗的重要工具，它是以昆蟲(chóng)桿狀病毒為載體插入外源基因，以昆蟲(chóng)和昆蟲(chóng)細(xì)胞為受體的表達(dá)系統(tǒng)。Luckow等[4]創(chuàng)建了一種全新的桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，稱(chēng)為Bac-to-Bac系統(tǒng)，其構(gòu)建和篩選方法簡(jiǎn)單，陽(yáng)性重組率高，是目前最好的桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。

3 反向遺傳重組疫苗

反向遺傳操作技術(shù)是通過(guò)構(gòu)建RNA病毒的感染性分子克隆，在DNA分子水平上對(duì)其進(jìn)行體外操作，從而研究病毒結(jié)構(gòu)與功能的方法。

La Sota免疫組在排毒高峰時(shí)的病毒量為基因VII型弱毒株免疫組的10倍以上[5]。目前以該致弱毒種為基礎(chǔ)毒種制備的滅活疫苗正在新獸藥注冊(cè)審批中。

4 活載體疫苗

4.1 以馬立克疫苗病毒為載體

火雞皰疹病毒（HVT）是最近發(fā)展起來(lái)的病毒載體，優(yōu)點(diǎn)是對(duì)雞及其它動(dòng)物均無(wú)致病性，使用安全，接種雞體后病毒可在雞體內(nèi)形成長(zhǎng)達(dá)數(shù)周的病毒血癥，且終生潛伏感染。目前，HVT已成為國(guó)內(nèi)外研究家禽疫苗的重要病毒載體。Sakaguchi等[6]將F基因插入到血清1型馬立克病毒（MDV1）US10基因內(nèi)，以SV40啟動(dòng)子構(gòu)建了重組1型馬立克氏病毒（rMDV1）。陳溥言等[7]在HVT FC126株中表達(dá)了NDV Miyadera株的HN基因。后來(lái)又將新城疫病毒F48E9株的F基因克隆到包含火雞皰疹病毒HVT非必須片段載體PTK2B中，成功的構(gòu)建了含有F基因表達(dá)盒的HVT轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體PTK3F，為進(jìn)一步在細(xì)胞中轉(zhuǎn)染并獲得表達(dá)F基因的HVT重組病毒奠定了基礎(chǔ)。

4.2 以雞痘病毒為載體

新城疫病毒和雞痘病毒（FPV）是影響家禽業(yè)較為嚴(yán)重的兩種疫病。預(yù)防這兩種病的疫苗也用了數(shù)十年，對(duì)促進(jìn)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展功不可沒(méi)。因此，以雞痘病毒為載體構(gòu)建表達(dá)ND基因的疫苗可以起到一舉兩得的作用。

目前，家禽上幾個(gè)重大的病毒傳染病如新城疫（ND）、禽流感（AI）、傳染性法氏囊?。↖BD）、馬立克?。∕D）、雞傳染性支氣管炎（IB）、雞傳染性喉氣管炎（ILT）等保護(hù)性抗原基因都已在雞痘病毒上在獲得表達(dá)，國(guó)內(nèi)外已有ND、AI、ILT 重組雞痘病毒已獲得注冊(cè)，作為商品化的疫苗使用[8]。

利用FPV作載體構(gòu)建表達(dá)不同毒株NDV的HN和F蛋白的重組活疫苗是近十年來(lái)研究的熱點(diǎn)。Taylor等[9]發(fā)現(xiàn)，表達(dá)F蛋白的重組雞痘病毒的保護(hù)率因接種途徑而異，其中點(diǎn)眼或口服可提供部分保護(hù)，肌肉注射或翅蹼接種均可提供100%保護(hù)。Edbauer等構(gòu)建的表達(dá)HN基因的重組雞痘病毒，一次接種或二次接種均可提供100%保護(hù)力，而點(diǎn)眼途徑僅能提供10%的保護(hù)率和30%的保護(hù)率。

綜上所述，以雞痘病毒為載體研制的NDV重組疫苗與傳統(tǒng)的疫苗相比，具有高效、安全等優(yōu)點(diǎn)，可同時(shí)預(yù)防雞痘和新城疫。從免疫檢測(cè)的角度考慮，用表達(dá)F或HN蛋白的重組苗免疫后，可根據(jù)是否產(chǎn)生其他蛋白抗體來(lái)鑒別雞群感染的是疫苗毒還是野毒，此外，在FPV中表達(dá)多種外源基因的重組苗，可達(dá)到優(yōu)化免疫程序，減少應(yīng)激，降低成本，顯示重組活載體疫苗更大的優(yōu)勢(shì)。

[1]Alexander D J. Newcastle disease and other avian Paramyxoviridae infections [M]. Ames：Iowa State University Press，1997：541-569.

[2]Sakaguchi M，Nakamura H，Sonoda K，et al. Protection of chickens from Newcastle disease by vaccination with a linear plasmid DNA expressing the F protein of Newcastle disease virus [J].Vaccine，1996，14（8）：747-752.

[3]姜永厚，陳獎(jiǎng)勵(lì)，宋秀龍，等.雞新城疫病毒F和雞IL-2重組DNA疫苗的構(gòu)建[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2001，23（2）：81-84.

[4]Luckow V A，Lee S C，Barry G F，et al. Efficient generation of infectious recombinant baculoviruses by site-specific transposonmediated insertion of foreign genes into baculovirus genome propagated in Escherichia coli [J].J Virol，1993，67（8）：4566-4579.

[5]Hu S，Ma H，Liu X，et al. A vaccine candidate of attenuated genotype Ⅶ Newcastle disease virus generated by reverse genetics [J].Vaccine，2009，27（6）：904-910.

[6]Sakaguchi M，Nakamura H，Sonoda K，et al. Protection of chickens with or without maternal antibodies against both Marek’s and Newcastle diseases by one-time vaccination with recombinant vaccine of Marek’s disease virus type 1 [J].Vaccine，1998，16（5）：472-479.

[7]趙軍，張秀根，陳溥言，等.表達(dá)雞新城疫病毒HN基因的重組火雞皰疹病毒的構(gòu)建[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000，32（2）：150-154.

[8]甘軍紀(jì)，彭大新，劉秀梵.重組禽痘病毒疫苗研究進(jìn)展[J].畜牧與獸醫(yī)，2012，44（10）：97-101.

[9]Taylor J，Edbauer C，Rey-Senelonge A，et al. Newcastle disease virus fusion protein expressed in a fowlpox virus recombinant confers protection in chickens[J].J Virol，1990，64（4）：1441-1450.