謝琳玲

(四川省三臺蠶種場，四川 三臺 621100)

淺談如何提高家蠶微粒子病預知檢查的檢出率

謝琳玲

(四川省三臺蠶種場，四川 三臺 621100)

在蠶種生產(chǎn)中常遇到微粒子病預知檢查時檢出的微粒子很少，但在母蛾檢驗時卻出現(xiàn)超毒的現(xiàn)象。筆者結合工作實際對這種現(xiàn)象的發(fā)生進行了分析，并提出了相應的改進辦法，以提高預知檢查的檢出率，促進家蠶微粒子病的有效防治，提高蠶種生產(chǎn)質量。

微粒子病 預知檢查 檢出率

家蠶微粒子病(Nosemabombycis)是由微粒子原蟲感染而引起的疾病，主要傳染途徑有胚種傳染和食下傳染，對蠶業(yè)生產(chǎn)特別是蠶種生產(chǎn)的危害極大，是嚴重威脅蠶種繁育的毀滅性病害。法國生物學家巴斯德(L.Pasteur)于1865-1870年對家蠶微粒子病作了系統(tǒng)研究，花費五年時間終于創(chuàng)立了母蛾鏡檢方法，剔除病卵，有效防止了胚種傳染。后來巖淵、三谷等又輔以預知檢查、補正檢查方法為無毒蠶種的生產(chǎn)奠定了基礎。目前，各蠶種場在蠶種生產(chǎn)過程中都加強了蠶期的預知檢查，以便確切掌握原蠶飼養(yǎng)中微粒子病的發(fā)生及分布情況，及早發(fā)現(xiàn)病蠶、病蛹、病蛾，盡早采取淘汰和消毒等措施，防止家蠶微粒子病蔓延，以減少經(jīng)濟損失和環(huán)境污染，保證蠶種生產(chǎn)順利進行。但根據(jù)本人近年的工作體會和對其他蠶種場的了解，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在的預知檢查和最終的母蛾鏡檢結果有時呈負相關，即在蠶期和種繭期的預知檢查中沒有或極少發(fā)現(xiàn)微粒子，但在母蛾檢驗中卻出現(xiàn)大量的超毒蠶種，這說明預知檢查普遍存在檢出率低的問題。然而，要提高蠶種場預知檢查的檢出率，就須認真分析影響預知檢查檢出率的原因，并采取相應的對策和措施，以提高家蠶微粒子病預知檢查的檢出率。下面筆者結合近幾年的工作經(jīng)驗，淺談如何提高預知檢查的檢出率。

1 影響檢出率的原因分析

1.1 抽樣代表性差

從目前的生產(chǎn)實踐看，不少蠶種場微粒子病預知檢查抽樣的準確性不夠，樣本的代表性差，一是抽樣的數(shù)量少，代表性不夠；二是抽樣的方法不正確，影響預知檢查的檢出率。因此，改進預知檢查抽樣方法，加強預知檢查抽樣力度，增強抽樣樣本的代表性，是提高微粒子病預知檢查檢出率的基礎和重要手段。

1.2 樣本處理不當

預知檢查一般是在蠶期或蛹期，屬微粒子病感染的前期，所形成的微粒子孢子少，影響檢出率，所以，抽取的樣本應進行檢驗前處理，使微粒子孢子繁殖集聚，以提高檢出率，但生產(chǎn)中往往忽視樣本的前處理或處理不當，如對樣本沒有進行適宜的溫濕度和相應的時間保存，磨碎液沒有進行離心處理等，嚴重影響預知檢查的檢出率。

1.3 檢驗儀器設備差

目前，部份蠶種場質檢室儀器設備條件差，沒有離心機，沒有恒溫培養(yǎng)箱，無法進行樣本的前處理，顯微鏡也比較陳舊，鏡面不清晰，影響預知檢查的檢出率。

1.4 檢驗人員素質不高

預知檢查的樣本微粒子孢子數(shù)少，要在多個視野中找微粒子孢子并準確判斷，要求預知檢查的鏡檢人員必須具有豐富的經(jīng)驗和強烈的責任心，但是，有的蠶種場由于人員調(diào)換頻繁和培訓不到位，檢驗人員素質不高，影響檢出率。

2 提高檢出率的措施和建議

2.1 確保抽樣的代表性

抽樣中樣本的代表性直接影響到鏡檢的結果，所以，抽樣樣本的質量至關重要。應在每個飼育區(qū)按照各齡規(guī)定的蠶頭數(shù)抽取，并及時裝入樣品袋內(nèi)，注明組別、品種、批次、飼育號、抽樣時間等。

2.1.1 遲眠蠶抽樣。微粒子病是一種慢性病，患病蠶兒遲眠遲起，故在蠶種繁育中每個齡期都要抽取遲眠蠶。在抽樣過程中一定要注重樣本的準確性和代表性，小蠶期可抽取收蟻2d后不疏毛、體色深暗、體軀瘦小、行動遲緩的蠶，還可以抽一些蠶糞參與鏡檢。

2.1.2 各齡弱小蠶抽樣。選擇抽取體軀瘦小、多皺，特別是尾端細小的蠶或者萎縮的病態(tài)蠶、遲發(fā)育蠶、半脫皮蠶、斑點蠶、遲起蠶等進行鏡檢。遇特殊情況如蠶兒發(fā)育不齊，病態(tài)蠶較多時整批蠶應適當增加抽樣次數(shù)和抽樣頭數(shù)。

2.1.3 蔟中抽樣。在上蔟后抽取蔟中死蠶、不結繭蠶、薄皮繭、死籠繭、小繭、不正形繭、蠶糞(20～50粒)等鏡檢。

2.1.4 蛹期抽樣。削繭時每飼育區(qū)病死蛹分區(qū)抽樣，但在削繭和鑒蛹期間，由于每位員工會操作多個飼育區(qū)，所以一定要注意樣本分區(qū)準確，以保證檢驗結果的正確對應。蛹期選擇抽取裸蛹、死蛹，或體表無光澤、有黑色斑點、腹部膨大、環(huán)節(jié)松弛、反應遲鈍、蛹皮易破的蛹做樣本。

2.1.5 發(fā)蛾促進抽樣。每一飼育批(區(qū))取早熟和遲熟蠶10～100頭單獨上蔟，用27～29℃的高溫和80%～85%相對濕度保護，促進提早發(fā)蛾，然后按區(qū)分別包樣送檢。如所取樣本中有微粒子病病蠶，經(jīng)過蛹期微孢子的發(fā)育繁殖，可提高檢出率，同時根據(jù)檢測的結果決定該批種繭是否制種。

2.1.6 苗蛾抽樣。苗蛾抽樣重點在“苗”，要在大批發(fā)蛾之前抽樣。抽樣數(shù)量可適當多一些，要明確規(guī)定原原種、原種、一代雜交種每飼育批(區(qū))抽取的數(shù)量。其次，除苗蛾抽樣外，在投蛾前選擇淘汰的卷翅蛾、黑環(huán)節(jié)蛾、焦尾蛾、禿蛾、夾灰蛾、大肚蛾及尾蛾也應分區(qū)抽樣送檢，以達到摸底的效果。

在保證抽樣樣本代表性的同時，蠶種場一定要重視養(yǎng)蠶后期用具不潔凈的接觸性感染和制種期蜀柏毒蛾對環(huán)境的污染。養(yǎng)蠶后期食桑結束，飼養(yǎng)人員警惕性降低，上蔟時蔟具直接堆放在地上，種繭保護和削繭鑒蛹時用前期被污染的用具(如蠶墊紙)接觸蠶繭和蛹體，制種期的蛾灰與蛹、蛾接觸。制種期蜀柏毒蛾正是發(fā)蛾高峰期，有可能引起病原的傳播擴散。微粒子孢子從感染到繁殖并形成新的孢子直至被檢出，需要一定的時間，感染時期越早，數(shù)量越多，檢出的時期就越早。感染時期越晚，數(shù)量越少，檢出的時期就越晚。如果在種繭保護和制種期微量感染，蛹體和苗蛾鏡檢時帶毒量會很少，檢出率就會很低。

2.2 加強鏡檢人員培訓

鏡檢人員是預知檢查工作的主體，高素質的檢驗隊伍是確保檢驗質量的根本。要加強鏡檢人員政治思想教育和業(yè)務技術培訓，牢固樹立鏡檢人員的質量意識，明確工作職責，堅持原則、忠于職守、熟練掌握鏡檢的業(yè)務技能及儀器設備的使用維護，嚴格按照《DB51/T 844-2008桑蠶微粒子病防治技術規(guī)程》中預知檢查的要求開展鏡檢工作，做到檢驗準確、記載清楚、報告及時。蠶種場要保持鏡檢隊伍的穩(wěn)定，熟練的鏡檢人員不能隨意更換。

2.3 完善檢驗儀器設備

檢驗儀器設備是正常開展預知檢查工作的基本條件。檢驗人員應在檢驗使用前對檢驗儀器設備進行調(diào)試和校驗，凡是對檢驗準確性有影響的儀器設備，需校準到正常使用狀態(tài)，維修調(diào)試不能達到要求的，應立即停止使用，同時更換和配套完善新的檢驗儀器設備，如顯微鏡、高速離心機、恒溫培養(yǎng)箱、高溫處理室等等，提高預知檢查的檢出率。

2.4 做好樣本的前處理

2.4.1 加強樣本保護。每齡抽取的遲眠蠶、弱小蠶、遲起蠶、病態(tài)蠶等樣本送到品檢室后，須進行檢驗前處理，在溫度29～32℃、相對濕度85%～90%的環(huán)境中放置3～4d后，再磨碎制樣鏡檢。

2.4.2 嚴格樣本的制樣。抽取的每個樣本按規(guī)定頭數(shù)置于乳缽或分碗中，進行充分研磨后制樣鏡檢。5齡期蠶兒體型大，制作的樣本水分多,可取中腸(中腸是微粒子孢子最早感染的組織器官)或血液制作鏡檢樣本。早熟蠶絲腺特別多，研磨難度大，可采用剪刀將樣本盡量剪碎，減小研磨難度。蠶蛹的鏡檢，為使鏡面清晰，減少脂肪球對視線的干擾，可將蠶蛹浸在70℃熱水中，經(jīng)7～10 min后取出，放入增加1倍左右濃度的堿液中磨碎制樣鏡檢。一般預知檢查的樣本量大、磨碎液多，應盡量采用過濾和離心(3000 rpm，3 min)的方法，通過樣本濃縮處理后制樣鏡檢，可大大提高檢出率。

2.5 嚴把鏡檢質量關

一是鏡檢人員應熟悉掌握微粒子孢子的屬性，微粒子孢子比重大于水，為1.30～1.35，通常沉于樣本液的底層，在鏡檢前一定要先讓蓋玻片和載玻片充分接觸，再調(diào)試顯微鏡，才能看清樣本底層的微孢子。二是嚴格執(zhí)行檢驗規(guī)程，每個鏡檢樣本的觀察視野數(shù)一定要看夠，不能減少，要求預知檢查每個鏡檢樣本觀察不少于20個視野。三是當天鏡檢結束后，應及時對鏡檢用具如試管、玻片、研磨棒、乳缽、碗、點樣板等進行清洗后，用1%有效氯漂白粉澄清液浸漬30min消毒，有毒樣本所用的工具用濃鹽酸液浸漬2h后，清洗干凈才能再次使用，防止污染，確保檢驗的準確性。

綜上所述，要提高家蠶微粒子病預知檢查的檢出率，須各生產(chǎn)班組和品檢室認真嚴格進行每項工作，才能提高檢出率，達到預知檢查的目的，減少超毒蠶種，提高蠶種質量，提高蠶種場經(jīng)濟效益。

謝琳玲(1977-)，女，大學，農(nóng)藝師，從事蠶種檢驗工作。