何經(jīng)緯，馮波，劉一輝

（四川省畜牧總站，四川 成都 610041）

分光光度計測定種公豬精液密度

何經(jīng)緯，馮波，劉一輝

（四川省畜牧總站，四川 成都 610041）

1 操作步驟

1.1 打開721型分光光度計電源開關和比色皿室的箱蓋，使光電管在無光照情況下預熱20min。

1.2 旋轉(zhuǎn)波長調(diào)節(jié)器，選擇450nm為測定所需的單色光波長。

1.3 選擇適當?shù)撵`敏度，一般先將靈敏度旋鈕旋至最低檔位。

1.4 調(diào)0%：打開比色皿室的箱蓋（關閉光門），用零點調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)旋鈕使電表指針在通光度（T值）為0%處。

1.5 調(diào)100%：在比色皿中加入豬精液稀釋劑溶液4mL，拉動拉桿使其置于光路中，蓋上比色皿室箱蓋（打開光門），調(diào)節(jié)光量調(diào)節(jié)旋鈕，使電表指針在T值為100%處。

1.6 反復調(diào)節(jié)旋鈕，直到關閉光門和打開光門時指針分別指在T值為0%和100%處為止。

如果T值不能調(diào)節(jié)到100%，就增大靈敏度，重新調(diào)0%、100%。

1.7 待測溶液的配制：取比色皿一支（以容量為4mL比色皿為例），分別加入3.6mL豬精液稀釋劑溶液，0.4mL豬原精液混勻，用擦鏡紙擦干比色皿透光面，使其光亮，無氣泡。

1.8 將待測溶液置于比色皿并放入比色皿室中，蓋上箱蓋，拉動拉桿將待測溶液置于光路中，此時從指針的位置讀得待測溶液的T值或吸光率（A值）。T值或吸光率（A值）根據(jù)對照表讀取精液密度。

2 操作技巧

2.1 使用比色皿時，只能拿毛玻璃的兩面，并且必須用擦鏡紙擦干透光面，以保護透光面不受損壞或產(chǎn)生斑痕。用比色皿裝液前必須用所裝溶液沖洗3次，避免改變?nèi)芤旱臐舛取?/p>

2.2 T值和A值成一定函數(shù)關系，可以相互轉(zhuǎn)換。根據(jù)目前研究，T值讀數(shù)誤差較小。

2.3 生豬精液取樣時應取精液瓶中間的液樣。

2.4 生豬精液長期放置會下沉到容器底部，因此，取樣時應搖勻，測量時速度要快，讀數(shù)要準。

2.5 測量時生豬精液稀釋了10倍，因此，要根據(jù)其參照的密度標準作相應調(diào)整。

3 計算方法

利用分光光度計測出T值后，根據(jù)對照表讀取精液密度（ρ），用于計算稀釋液的加入量和確定分裝瓶數(shù)，計算公式如下：

注：ρ為精液密度，V為豬精液體積，m為精子活力，n為精子畸形率，Y為瓶數(shù)，V0為采精量，V1為豬精液稀釋后的體積，V2為加入稀釋液的體積。

按照國家標準GB/T 25172-2010，精液產(chǎn)品中總精液數(shù)為30～35億個/瓶，每劑80mL。

實際生產(chǎn)過程中，精子畸形率通過普通顯微鏡難以檢測，因此，精子畸形率=0%，稀釋后精子活力與之前保持不變。

S814.8

C

1001-8964（2017）11-0039-01

2017-09-27