陸月梅，盧紅，劉婭，陳麗平

(1南通大學(xué)附屬海安縣人民醫(yī)院，江蘇南通226600；2南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院226001)

子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶組織和血清VEGF-A、CA125表達(dá)變化及其意義

陸月梅1，盧紅1，劉婭1，陳麗平2

(1南通大學(xué)附屬海安縣人民醫(yī)院，江蘇南通226600；2南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院226001)

目的 觀察子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)患者病灶組織和血清中血管內(nèi)皮生長因子A(VEGF-A)、糖類抗原125(CA125)表達(dá)變化，并探討其意義。方法 選擇EMs患者40例為病例組，子宮內(nèi)膜正常的子宮肌瘤患者20例為對照組，留取病例組的異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織，留取對照組的正常內(nèi)膜組織。采用Western blotting檢測病例組異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織及對照組正常內(nèi)膜組織中的VEGF-A、CA125，采用ELISA法檢測病例組術(shù)前、術(shù)后及對照組術(shù)前血清中的VEGF-A、CA125。分析VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率。結(jié)果 病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對表達(dá)量高于在位內(nèi)膜組織及對照組(P均<0.05)。病例組術(shù)后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平低于術(shù)前，手術(shù)前后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平均高于對照組(P均<0.01)。病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與術(shù)前血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.956、0.882，P均<0.01)；對照組正常內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.851、0.876，P均<0.05)。血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為92.50%、95.00%、93.33%。結(jié)論 EMs患者病灶組織及血清中VEGF-A、CA125表達(dá)水平升高；VEGF-A、CA125可能參與了EMs的發(fā)生、發(fā)展；血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測可能有助于提高對EMs的診斷效能。

子宮內(nèi)膜異位癥；血管內(nèi)皮生長因子A；糖類抗原125

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2016年3月在南通大學(xué)附屬海安縣人民醫(yī)院婦科行手術(shù)治療、術(shù)后病理診斷為EMs的40例患者為病例組，年齡20～46(35.0±4.6)歲；選擇同期診斷為子宮肌瘤需手術(shù)治療、術(shù)后病理證實(shí)為子宮肌瘤且子宮內(nèi)膜正常的患者20例為對照組，年齡23～50(41.0±5.3)歲。所有患者入院前半年內(nèi)均未服用激素類藥物，且均排除內(nèi)分泌疾病及其他內(nèi)、外科疾病。收集兩組術(shù)前、術(shù)中診斷性刮宮或術(shù)中、術(shù)后采集的組織標(biāo)本，放置-80 ℃冰箱保存。

1.2 異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125檢測 采用Western blotting法檢測病例組的異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織及對照組正常內(nèi)膜組織中的VEGF-A、CA125。取標(biāo)本組織，加入RIPA裂解液制成勻漿，蛋白定量后稀釋成3 g/L，行SDS-PAGE電泳分離蛋白，經(jīng)半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h后用5%脫脂奶粉稀釋的鼠抗VEGF-A或CA125單克隆抗體(1∶500)及小鼠抗β-actin單克隆抗體(1∶1 500)室溫孵育1 h，4 ℃過夜。次日洗滌后加入用5%脫脂奶粉稀釋的結(jié)合有HRP的羊抗鼠IgG(1∶2 000)和羊抗小鼠IgG(1∶2 000)，室溫孵育2 h，洗滌后行ECL顯色。以目的蛋白條帶灰度值與β-actin內(nèi)參條帶灰度值的比值表示目的蛋白相對表達(dá)量。

1.3 血清中VEGF-A、CA125檢測 兩組患者入院后或術(shù)前采取靜脈血，靜置、離心后取其上清液，置于-80 ℃冰箱保存。病例組術(shù)后1個月復(fù)查，采集靜脈血分離血清，置于-80 ℃冰箱保存。采用ELISA法檢測兩組血清中的VEGF-A、CA125。

1.4 血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測對EMs的診斷效能分析 分析血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率。

2 結(jié)果

2.1 兩組異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125表達(dá)比較 病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對表達(dá)量分別為0.901 2±0.106 4、0.811 1±0.112 5，在位內(nèi)膜組織中分別為0.125 3±0.042 5、0.096 4±0.037 8；對照組正常內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對表達(dá)量分別為0.118 9±0.043 2、0.100 2±0.040 8。病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對表達(dá)量高于在位內(nèi)膜組織及對照組(P均<0.05)。

2.2 兩組血清中VEGF-A、CA125表達(dá)比較 病例組術(shù)前血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平分別為(721.35±95.61)pg/mL、(33.67±10.66)μg/mL，術(shù)后分別為(368.20±33.68)pg/mL、(20.88±9.92)μg/mL；對照組血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平分別為(115.5±78.24)pg/mL、(15.30±6.01)μg/mL。病例組術(shù)后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平低于術(shù)前，手術(shù)前后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平均高于對照組(P均<0.01)。

2.3 內(nèi)膜組織VEGF-A、CA125表達(dá)水平與術(shù)前血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平的相關(guān)性 病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與術(shù)前血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.956、0.882，P均<0.01)；對照組正常內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125與血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.851、0.876，P均<0.05)。

2.4 血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測對EMs的診斷效能 VEGF-A單項(xiàng)檢測診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為75.00%、95.00%、81.67%；CA125單項(xiàng)檢測診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為88.88%、95.00%、92.11%；VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為92.50%、95.00%、93.33%。

3 討論

目前EMs的診斷金標(biāo)準(zhǔn)為腹腔鏡探查及病理檢查，但均屬于有創(chuàng)性檢查[5]。血清CA125升高是EMs的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。除腫瘤以外，早孕、炎癥反應(yīng)及EMs人群血清CA125也會升高。CA125單項(xiàng)檢測診斷EMs的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率均不理想[3]。尋找對EMs有較好診斷效能的檢查方法已成為廣大臨床工作者關(guān)注的問題。關(guān)于EMs的發(fā)病機(jī)制有多種學(xué)說，目前被廣泛接受的是經(jīng)血逆流種植學(xué)說，但經(jīng)血逆流現(xiàn)象普遍，而EMs發(fā)病率僅為10%左右[6～8]，這說明經(jīng)血逆流只是誘因，關(guān)鍵與內(nèi)膜的異位種植生長有關(guān)。經(jīng)血中的子宮內(nèi)膜能成功地異位種植生長，與局部毛細(xì)血管的新生密不可分[9～11]。因此，新生血管生成已成為EMs發(fā)病機(jī)制、治療策略及診斷相關(guān)研究的熱點(diǎn)。

VEGF是一種高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，能夠提高微血管通透性，改變細(xì)胞外基質(zhì)成分，以利于新生血管的生長[5]。很多學(xué)者[6,7]觀察到EMs患者的異位病灶、血液、腹腔液中多種血管生成因子水平明顯增高。VEGF可分為A、B、C、D、E五個亞型，其中VEGF-A是最常見的一型，主要與VEGF受體1、2結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效用[12]。目前國內(nèi)外多項(xiàng)研究[13～15]報道了EMs患者血清和組織中VEGF的表達(dá)及其在EMs診斷、治療中的價值，但對VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測診斷EMs的效能報道較少。

本研究分別納入EMs患者及子宮內(nèi)膜正常的子宮肌瘤患者，觀察EMs病灶組織及血清中VEGF-A、CA125的表達(dá)變化，結(jié)果顯示病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125相對表達(dá)量高于在位內(nèi)膜組織及對照組；病例組術(shù)后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平低于術(shù)前，手術(shù)前后血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平均高于對照組。上述結(jié)果提示VEGF-A高表達(dá)可能與EMs的發(fā)病、進(jìn)展有關(guān)，血清VEGF-A水平可能在EMs術(shù)后隨訪評估中有一定應(yīng)用價值。另外，我們分析了病灶組織與血清中兩項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)病例組異位內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125表達(dá)與術(shù)前血清中VEGF-A、CA125表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，對照組正常子宮內(nèi)膜組織中VEGF-A、CA125表達(dá)與血清中VEGF-A、CA125表達(dá)也呈正相關(guān)關(guān)系，由此說明EMs患者血清VEGF-A、CA125表達(dá)水平變化趨勢與病灶組織中的一致。進(jìn)一步分析得出，血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測診斷EMs的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率分別為92.50%、95.00%、93.33%，高于CA125單獨(dú)檢測對EMS的診斷效能[16]，說明VEGF-A、CA125聯(lián)合檢測對EMs的診斷效能更好。

綜上所述，EMs患者病灶組織和血清中VEGF-A、CA125表達(dá)水平升高，VEGF-A、CA125可能參與了EMs的發(fā)生、發(fā)展；血清VEGF-A、CA125聯(lián)合檢查有助于提高對EMs的診斷效能。然而，本研究樣本量較少，上述結(jié)論仍有待于進(jìn)一步證實(shí)。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會子宮內(nèi)膜異位癥協(xié)作組.子宮內(nèi)膜異位癥的診治指南[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2015,50(3):161-169.

[2] McLeod BS, Retzloff MG. Epidemiology of endometriosis: an assessment of risk factors[J]. Clin Obstet Gynecol, 2010,53(2):389-396.

[3] Greene AD, Lang SA, Kendziorski JA, et al. Endometriosis: where are we and where are we going?[J]. Reproduction, 2016,152(3):R63-78.

[4] Cho S, Choi YS, Jeon YE, et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its soluble receptor-1 in endometriosis[J]. Microvasc Res, 2012,83(2):237-242.

[5] Mohamed L, Mohamed, Manal M, et al. Comparative study between VEGF-A and CA125 in diagnosis and follow-up of advanced endometriosis after conservativelaparoscopic surgery[J]. Arch Gynecol Obstet, 2013,287(1):77-82.

[6] Hirsch M, Duffy JM, Kusznir JO, et al. Variation in outcome reporting in endometriosis trials: a systematic review[J]. Am J Obstet Gynecol, 2016,214(4):452-464.

[7] Vetvicka V, Laganà AS, Salmeri FM, et al. Regulation of apoptotic pathways during endometriosis: from the molecular basis to the future perspectives[J]. Arch Gynecol Obstet, 2016,294(5):897-904.

[8] Ferrero S, Alessandri F, Racca A, et al. Treatment of pain associated with deep endometriosis: alternatives and evidence[J]. Fertil Steril, 2015,104(4):771-792.

[9] Tafi E, Leone Roberti Maggiore U, Alessandri F, et al. Advances in pharmacotherapy for treating endometriosis[J]. Expert Opin Pharmacother, 2015,16(16):2465-2483.

[10] Guo SW. Endometriosis and ovarian cancer: potential benefits and harms of screening and risk-reducing surgery[J]. Fertil Steril, 2015,104(4):813-830.

[11] Harlev A, Gupta S, Agarwal A. Targeting oxidative stress to treat endometriosis[J]. Expert Opin Ther Targets, 2015,9(11):1447-1464.

[12] 易金玲,沈艷麗,馮文廣,等.子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中miR-556-3p、VEGF表達(dá)變化[J].山東醫(yī)藥,2016,56(7):50-52.

[13]Kim M, Park HJ, Seol JW, et al. VEGF-A regulated by progesterone governs uterine angiogenesis and vascular remodelling during pregnancy[J]. EMBO Mol Med, 2013,5(9):1415-1430.

[14] 成萍,紀(jì)燕琴.子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志,2015,11(1):117-119.

[15] GonCalves GA, Camargo-Kosugi CM, Bonetti TC, et al. p27kip1 overexpression regulates VEGF expression, cell proliferation and apoptosis in cell culture from eutopic endometrium of women with endometriosis[J]. Apoptosis, 2015,20(3):327-335.

[16] 李雙梅,邵華江,馬建婷.子宮內(nèi)膜芳香化酶與血清CA125聯(lián)合檢測對卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的診斷價值[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2012,16(4):621-624.

(收稿日期：2016-10-08)

南通市衛(wèi)生局青年科研基金項(xiàng)目(WQZ2015016)。

陳麗平(E-mail: 1193136107@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.03.026

R711.71

B

1002-266X(2017)03-0081-03

2016-06-28)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)可引起患者痛經(jīng)、月經(jīng)紊亂、不孕及盆腔痛，嚴(yán)重影響中青年婦女的生活質(zhì)量[1]。EMs雖為良性病變，但具有類似惡性腫瘤的局部種植、浸潤生長及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力[2]。目前，血清糖類抗原125(CA125)升高是EMs的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，但CA125對EMs的診斷敏感度、特異度、準(zhǔn)確率均不盡如人意[3]。血管形成在EMs的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用。近年來發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)參與了EMs的病理過程[4]。本研究觀察了EMs患者病灶組織和血清中VEGF-A、CA125的表達(dá)變化，并探討其意義。